【摘要】：將單純皰疹病毒的胸苷激酶(Herpes simplex virus thymidine kinase，HSV-tk)基因?qū)肽[瘤細(xì)胞中表達(dá)，聯(lián)合使用藥物丙氧鳥苷(Ganciclovir，GCV)可有效地殺傷腫瘤。其主要機(jī)理是：GCV作為一種核苷類似物，可在HSV-TK酶(胸苷激酶)作用下生成一磷酸化合物(GCVMP)，繼而在細(xì)胞內(nèi)其它酶的作用下生成三磷酸化合物(GCVTP)，后者可阻斷細(xì)胞DNA復(fù)制，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。另外，通過“旁觀者效應(yīng)(bystander effect)”還可以有效殺傷tk~+細(xì)胞周圍的tk~-細(xì)胞。因此只要有一部分腫瘤細(xì)胞表達(dá)HSV-tk基因即可殺死全部腫瘤細(xì)胞。 本研究用一種與潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因(hygromycin phosphotransferase gene，hph)相融合的HSV1-tk基因作為目的基因(稱為HyTK基因)，構(gòu)建了重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體LNCHyTK；用lipofectin將其導(dǎo)入包裝細(xì)胞PA317中，獲得了產(chǎn)病毒細(xì)胞PA317／LNCHyTK及含有重組病毒的細(xì)胞上清(病毒上清)；以惡性黑色素瘤細(xì)胞為主要對象，研究了逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的HyTK基因轉(zhuǎn)移聯(lián)合應(yīng)用GCV對小鼠惡性黑色素瘤細(xì)胞株B16的體外及體內(nèi)殺傷作用。此外，還觀察了HyTK基因／GCV對人宮頸癌細(xì)胞株HeLa和SiHa細(xì)胞，及人肝癌細(xì)胞株H7402細(xì)胞的體外殺傷作用。 體外實(shí)驗(yàn)表明，逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的HyTK基因轉(zhuǎn)移可顯著提高B16細(xì)胞對GCV的敏感性(較未轉(zhuǎn)染的B16細(xì)胞高100-1000倍以上)，并且可觀察到“旁觀者效應(yīng)”。HyTK基因／GCV系統(tǒng)對H7402細(xì)胞和HeLa細(xì)胞也具有
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：1996
【分類號】：R739.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 吳小兵,蘇成芝,伍志堅(jiān),趙健,彭朝暉;逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的HyTK基因轉(zhuǎn)移及殺傷惡性黑色素瘤細(xì)胞的研究[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1996年03期

2 李秀森;MTT比色法檢測細(xì)胞存活和淋巴因子[J];免疫學(xué)雜志;1992年01期

3 賴冠華，陳詩書;用于多基因表達(dá)的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體[J];生命的化學(xué)(中國生物化學(xué)會通訊);1995年05期

本文編號：2758710