本文關(guān)鍵詞：整合素αVβ3，脂筏和c-SRC在人類黑色素瘤A375細(xì)胞遷移中的作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：脂筏是細(xì)胞膜上的微結(jié)構(gòu)域,它能夠起到穩(wěn)定細(xì)胞膜的作用。同時(shí),脂筏能夠在細(xì)胞膜上形成較大的平臺(tái),通過負(fù)載受體蛋白起到信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用。整合素位于細(xì)胞膜的表面,作為細(xì)胞表面的粘附受體分子起作用。在細(xì)胞內(nèi)部,有很多非受體酪氨酸激酶,例如c-SRC,它能夠協(xié)助信號(hào)從細(xì)胞內(nèi)部轉(zhuǎn)導(dǎo)到膜上的受體蛋白。而且,這些非受體酪氨酸激酶也能夠接收從細(xì)胞膜上的受體蛋白傳遞到細(xì)胞內(nèi)部的信號(hào)。這種從外部到內(nèi)部和從內(nèi)部到外部的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)形式調(diào)節(jié)了多種生理途徑,包括細(xì)胞遷移、存活、細(xì)胞與細(xì)胞之間的粘附、細(xì)胞增殖、血管的發(fā)生和浸潤(rùn)。 腫瘤細(xì)胞能夠把這些正常的生理過程為己所用,進(jìn)行延伸和侵襲性生長(zhǎng)并轉(zhuǎn)移到遠(yuǎn)端部位。經(jīng)過劃痕愈合分析,Transwell遷移分析和靶定整合素β3特異性的siRNA實(shí)驗(yàn),我們證實(shí)了脂筏、c-SRC和整合素aVβ3在調(diào)節(jié)A375細(xì)胞遷移的過程中起到一定作用。免疫共沉淀和免疫熒光共定位分析揭示了脂筏的擾亂并不影響c-SRC和整合素aVβ3的相互作用。但是,我們注意到,脂筏的擾亂使粘附斑點(diǎn)的數(shù)量減少,表明脂筏可能能夠影響整合素aVβ3的簇集,從而影響A375細(xì)胞的遷移。而且,因?yàn)橹げ⒉恢苯佑绊慶-SRC的活性,推測(cè)脂筏和c-SRC可能是通過獨(dú)立調(diào)節(jié)整合素aVβ3來影響細(xì)胞遷移的。揭示能夠介導(dǎo)A375細(xì)胞遷移的這些因素為解釋多種癌癥細(xì)胞紊亂的原因提供了證據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：整合素αVβ3 脂筏 c-SRC 癌癥細(xì)胞遷移 焦點(diǎn)粘附 脂筏擾亂
【學(xué)位授予單位】：東北師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R739.5
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-6
• CONTENTS6-9
• INTRODUCTION9-32
• 0.1 GLOBAL CANCER STATISTICS14-15
• 0.2 CONTROVERSIES OVER THE EXISTENCE OF LIPID RAFTS15-16
• 0.3 The STRUCTURAL ANALYSIS AND COMPOSITION OF LIPID RAFTS, INTEGRIN αVβ3 AND c-SRC16-22
• 0.3.1 Lipid Rafts16-18
• 0.3.2 Integrins18-20
• 0.3.3 The structural composition and activation of c-SRC20-22
• 0.4THE ROLE OF LIPID RAFTS, c-SRC and INTEGRIN αVβ3 IN REGULATING CANCER CELL MIGRATION22-25
• 0.4.1 Lipid Rafts Regulate Cell Migration Through Enhancing Signal Transduction22-23
• 0.4.2 Integrins'Adhesive Structures Form Linkage Between The ECM And Actin Cytoskeleton To Bring About Migration23-24
• 0.4.3 c-SRC Acts As A Kinase To Regulate Migration24-25
• 0.5 THE CROSSTALK BETWEEN LIPID RAFTS, c-SRC AND INTEGRIN αVβ325-28
• 0.6 MODELS USE IN THE STUDY OF CELL MIGRATION28-29
• 0.7 RESEARCH AIMS29-30
• 0.8 RESEARCH SIGNIFICANCE30-32
• MATERIALS32-35
• 1.1 TUMOR CELL LINE32
• 1.2 COMPETENT CELLS STRAIN32
• 1.3 ANTIBODIES32
• 1.4 REAGENTS32-33
• 1.5 MAIN INSTRUMENTS33
• 1.6 MEDIA AND SOLUTION PREPARATIONS33-35
• 1.6.1 SDS-PAGE, Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis Solution34
• 1.6.2 Western Blot Buffers34-35
• 1.6.3 LB (Luria Bertani) Medium Preparation35
• 1.6.4 Agarose Gel Preparation35
• METHODS35-51
• 2.1 CELL CULTURE35
• 2.2 c-SRC DOMAINS PLASMID CONSTRUCT35-42
• 2.2.1 Extracting the plasmid from the filter paper36
• 2.2.2 Transformation36
• 2.2.3 Culturing and storing single clones36
• 2.2.4 Extraction of plasmid from grown cultured medium36-38
• 2.2.5 Polymerase Chain Reaction(PCR)38-39
• 2.2.6 PCR Master Mix39
• 2.2.7 Primers39-40
• 2.2.8 Running the gel40
• 2.2.9 Purifying the gel40-41
• 2.2.10 Restriction cutting41
• 2.2.11 Ligation41-42
• 2.3 CELLS TRANSFECTION42
• 2.4 siRNA INTEGRIN β3 PREPARATION42-45
• 2.4.1 Making cDNA43-44
• 2.4.2 PCR Master Mix44
• 2.4.3 PCR Cycle Reaction Times44
• 2.4.4 Integrin β3 Primers44
• 2.4.5 Confocal Immunofluorescence Microscopy44-45
• 2.5 MTT CELL PROLIFERATION ASSAY45
• 2.6 WOUND HEALING ASSAY45-46
• 2.6.1 Calculations46
• 2.7 TRANSWELL ASSAY46-47
• 2.8 COIMMUNOPRECIPITATION AND WESTERN BLOT47-48
• 2.8.1 Western Blot47-48
• 2.9 CONFOCAL IMMUNOFLUORESCENCE MICROSCOPY FOR COLOCALIZATION EXPERIMENT48
• 2.10 STATISTICAL ANALYSIS48-51
• RESULTS51-62
• 3.0 LIPID RAFTS AND c-SRC AFFECTS CELL PROLIFERATION51-52
• 3.1 LIPID RAFT DISRUPTION AND c-SRC INHIBITION INDEPENDENTLY REDUCES A375 CELL MIGRATION52-57
• 3.2 OVEREXPRESSION OF c-SRC DOES NOT INCREASE A375 CELLS MIGRATION57-58
• 3.3 DEPLETION OF INTEGRIN β3 CAUSES A DECREASE IN A375 CELL MIGRATION58-60
• 3.4 LIPID RAFT DISRUPTION DOES NOT AFFECT c-SRC INTERACTION WITH INTEGRIN αVβ360-62
• DISCUSSION62-65
• CONCLUSION65-66
• REFERENCES66-73
• ACKNOWLEDGEMENT73-74
• PUBLISHED PAPERS DURING MASTER DEGREE (2010-2013)74

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  本文關(guān)鍵詞：整合素αVβ3，脂筏和c-SRC在人類黑色素瘤A375細(xì)胞遷移中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：275864