【摘要】： 目的:構(gòu)建裂解型腺病毒載體,研究其體外對黑色素瘤細胞及小鼠腹水型肝癌的抑制作用。 方法:利用本室已構(gòu)建的pUCm-T-E1A質(zhì)粒為模板進行PCR,將目的片段用HindⅢ、EcoRV雙酶切后連接到帶有GFP標記的pAdTrack-CMV質(zhì)粒上,PmeI線性化重組質(zhì)粒pAdTrack-CMV-E1A與腺病毒質(zhì)粒pAdeasy-1共轉(zhuǎn)化BJ5183細菌,獲得重組腺病毒表達載體pAdeasy-1-pAdTradck-CMV-E1A經(jīng)pacI線性化后轉(zhuǎn)染QBI-293A細胞;收獲病毒重組子。將獲得的重組病毒子感染A375黑色素瘤細胞。然后分別用RT-PCR、流式細胞儀及MTT法等方法鑒定E1A基因的表達并且研究其對小白鼠腹水型肝癌的抑制及其免疫功能的影響。 結(jié)果:成功構(gòu)建了裂解型腺病毒Ad-E1A,可顯著裂解A375黑色素瘤細胞,抑制細胞生長。Ad-E1A可體內(nèi)抑制小鼠腹水型肝癌的生長,且對小鼠的免疫器官沒有抑制,同時可提高中性粒細胞和單核細胞的數(shù)目。 結(jié)論:裂解型腺病毒Ad-E1A可在體外裂解黑色素瘤細胞,抑制人黑色素瘤細胞生長。體內(nèi)抑制小鼠腹水型肝癌H22的生長,并可以提高小白鼠免疫功能。
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R739.5;R735.7
【圖文】：

2.2裂解型腺病毒對小鼠免疫器官的影響根據(jù)小鼠體重和免疫器官重量，按公式計算器官指數(shù)。結(jié)果致瘤組與非致瘤組(332)相比，胸腺指數(shù)均有所降低(如圖2一ZA)，但PBS組(259)與Ad一EIA組(219)降低不明顯，無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。5一Fu組(64)的小鼠胸腺指數(shù)顯著降低(p<0.01);致瘤組與非致瘤組

(13.s75xlo犯)白細胞數(shù)增加，但5一Fu組(4.4sxlog幾)反而減少。致瘤組內(nèi)，5一Fu組比PBS組，Ad一 EIA組白細胞數(shù)明顯下降，差異極顯著(p<0.01)(如圖2一3A)。對白細胞中的淋巴細胞、中性粒細胞和單核細胞數(shù)統(tǒng)計分析，結(jié)果致瘤組淋巴細胞數(shù)與非致瘤組(6.65xlo，幾)相比，PBs組(lo.53xlo垅)與Ad一EIA組 (9.025、109/L)淋巴細胞數(shù)上升，5一Fu組 (3.56xl0譏)淋巴細胞下降印<0.05)。致瘤組內(nèi)，5一Fu組與PBs組、Ad一EIA組的淋巴細胞數(shù)差異顯著(p<0.01)(如圖2一3B)。致瘤組的中性粒細胞數(shù)與未致瘤組 (0.3xlo沉)比較，PBs組

(l.33xlog幾)與Ad一EIA組(2.sxlog幾)單核細胞數(shù)明顯增加，5一Fu組(o.48xlog幾)單核細胞數(shù)明顯下降(P<0.05)。致瘤組內(nèi)，5一Fu組與PBs組、Ad一EIA組的中性粒細胞數(shù)差異顯著(p<0.01)。(如圖2一3B)二二二:二N盡彭ive1.....PBSC二二J隴穿沁ec。嚨rd...1千巧巧凡丈勺八序EIA**口幻區(qū)幻SRJ心r巴坦eq任 118nu50七曰n

本文編號：2753328