【摘要】：目的:本研究擬通過(guò)miRNA基因轉(zhuǎn)染技術(shù),研究miR-205-5p對(duì)人皮膚鱗癌SCC12細(xì)胞增殖能力的影響及其與Bcl-2關(guān)聯(lián)情況。方法:1.應(yīng)用miRNA基因芯片檢測(cè)人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞HaCaT與人皮膚鱗狀細(xì)胞癌SCC12細(xì)胞中差異表達(dá)的miRNA。2.采用RT-PCR法(Real-time PCR,實(shí)時(shí)熒光定量PCR)檢測(cè)miR-205-5p在HaCaT與SCC12細(xì)胞中的表達(dá)。3.利用脂質(zhì)體Lipofectamine 2000分別將miR-205-5p模擬物(miR-205-5p mimics)、miR-205-5p抑制物(miR-205-5p inhibitor)、miRNA陰性對(duì)照(miRNA-NC)轉(zhuǎn)染至SCC12細(xì)胞,對(duì)照組不做轉(zhuǎn)染。4.用RT-PCR法分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染48小時(shí)后四組細(xì)胞miR-205-5p的表達(dá)情況。5.CCK8法檢測(cè)轉(zhuǎn)染48小時(shí)后四組SCC12細(xì)胞的增殖能力。6.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染48小時(shí)后四組SCC12細(xì)胞的凋亡情況。7.RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染48小時(shí)后各組細(xì)胞Bcl-2的mRNA含量。8.Western-blotting檢測(cè)轉(zhuǎn)染72小時(shí)后各組細(xì)胞中Bcl-2、Bax的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1.RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示miR-205-5p在HaCa T細(xì)胞中的表達(dá)明顯高于SCC12細(xì)胞(P0.01),其表達(dá)量約為SCC12細(xì)胞的20倍。2.轉(zhuǎn)染miR-205-5p mimics后miR-205-5p組的miR-205-5p的表達(dá)量明顯高于miR-205-5p inhibitors組、NC組和control組(P0.05);miR-205-5p inhibitors組的miR-205-5p的表達(dá)量明顯低于miR-205-5p組、NC組和control組(P0.05);然而NC組和control組相比則無(wú)明顯差異(P0.05)。3.CCK8法檢測(cè)顯示,miR-205-5p組細(xì)胞的增殖能力明顯低于miR-205-5p inhibitors組、NC組和control組(P0.05);miR-205-5p inhibitors組的細(xì)胞增殖能力明顯高于miR-205-5p組、NC組和control組(P0.05);然而NC組和control組相比則無(wú)明顯差異(P0.05)。4.流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況顯示,miR-205-5p組的細(xì)胞凋亡率明顯高于miR-205-5p inhibitors組、NC組和control組(P0.05);miR-205-5p inhibitors組的細(xì)胞凋亡率明顯低于miR-205-5p組、NC組和control組(P0.05);然而NC組和control組相比則無(wú)明顯差異(P0.05)。5.RT-PCR法檢測(cè)各組Bcl-2的mRNA表達(dá),統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果miR-205-5p組Bcl-2的mRNA表達(dá)量低于miR-205-5p inhibitors組、NC組和control組(P0.05);miR-205-5p inhibitors組Bcl-2的mRNA表達(dá)量高于miR-205-5p組、NC組和control組(P0.05);然而NC組和control組相比則無(wú)明顯差異(P0.05)。6.Western-blotting檢測(cè)miR-205-5p對(duì)Bcl-2蛋白表達(dá)的影響,統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果miR-205-5p組Bcl-2的蛋白表達(dá)量低于miR-205-5p inhibitors組、NC組和control組(P0.05);miR-205-5p inhibitors組Bcl-2的蛋白表達(dá)量高于miR-205-5p組、NC組和control組(P0.05);然而NC組和control組相比則無(wú)明顯差異(P0.05)。結(jié)論:1.miR-205-5p在SCC12細(xì)胞中的表達(dá)較HaCaT細(xì)胞下調(diào)。2.miR-205-5p可以抑制靶基因Bcl-2的mRNA和蛋白的表達(dá)。3.miR-205-5p可以顯著抑制SCC12細(xì)胞的增殖,促進(jìn)其凋亡,其作用機(jī)制可能與miR-205-5p對(duì)靶基因Bcl-2的抑制有關(guān)。4.miR-205-5p有可能成為皮膚鱗癌診斷、治療的新靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R739.5
【圖文】：

圖 1.微陣列分析 miR-205-5p 的表達(dá)水平2.miR-205-5p 在 HaCaT 細(xì)胞、SCC12 細(xì)胞中的表達(dá)情況根據(jù) RT-PCR 得到的結(jié)果，以HaCaT細(xì)胞表達(dá)量為1，SCC12細(xì)胞中miR表達(dá)量為 0.05 ±0.01。如下圖所示，SCC12 細(xì)胞 miR-205-5p 明顯低于

圖 2.miR-205-5p 在 SCC12、HaCaT 細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)量 （**P <0.01）3.分別轉(zhuǎn)染 miR-205-5p mimics、 miR-205-5p inhibitors、 miR-NC 后 SCC12胞中 miR-205-5p 的表達(dá)水平根據(jù) RT-PCR 得到的結(jié)果，以 control 組表達(dá)量為 1，miR-205-5p 組、

圖 3.轉(zhuǎn)染后 miR-205-5p 表達(dá)量的變化 （*P <0. 05 ）4、miR-205-5p 對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響SCC12 細(xì)胞經(jīng)轉(zhuǎn)染處理 48 h 后,各組加入 CCK8 試劑，設(shè)置波長(zhǎng)為 450測(cè)各孔的 A 值，A 值越高，則細(xì)胞增殖能力越強(qiáng)。miR-205-5p 組、 miR

【參考文獻(xiàn)】

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1 夏永華;侯慧芳;李敏;張彩鳳;劉冬;胡華;張孟杰;程賽;;MiRNA-373在皮膚鱗狀細(xì)胞癌的表達(dá)及對(duì)侵襲的影響[J];中華皮膚科雜志;2017年10期

2 張進(jìn)霞;譚曉華;袁震;李燕虎;齊燕;南希;齊明鍵;高鶴;連福治;楊磊;;下調(diào)let-7微小RNA對(duì)卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒裂解復(fù)制和絲裂原激活蛋白激酶激酶激酶激酶4及其下游因子的影響[J];中華腫瘤雜志;2016年07期

本文編號(hào)：2746198