【摘要】： 白癜風(fēng)是臨床常見(jiàn)的色素脫失性疾病,關(guān)于黑素細(xì)胞破壞或凋亡的病理機(jī)制眾說(shuō)紛紜,從若干角度提出研究假說(shuō),涉及遺傳、自身免疫、神經(jīng)介質(zhì)、氧化應(yīng)激、細(xì)胞毒作用、微環(huán)境紊亂等諸多方面。近年的研究表明,氧化應(yīng)激產(chǎn)生大量活性氧自由基及脂質(zhì)過(guò)氧化物等,在觸發(fā)黑素細(xì)胞破壞或功能障礙方面扮演重要角色。氧化-抗氧化機(jī)制穩(wěn)定的情況下,機(jī)體應(yīng)對(duì)環(huán)境物理、化學(xué)刺激時(shí),抗氧化劑能夠迅速清除有害自由基,保護(hù)機(jī)體免受氧化損傷。具有特殊遺傳背景(存在致病性遺傳變異)的個(gè)體,黑素細(xì)胞抵御外界有害刺激能力下降,抗氧化機(jī)制失調(diào),細(xì)胞容易發(fā)生壞死或凋亡。 過(guò)氧化氫酶(catalase)、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(Glutathione S-transferase GSTs)是重要的抗氧化酶,其編碼基因變異有可能造成蛋白表達(dá)或功能異常。目前尚無(wú)抗氧化酶基因多態(tài)性與漢族人白癜風(fēng)相關(guān)性的研究,因此我們以西北漢族人群為研究對(duì)象,通過(guò)大規(guī)模病例-對(duì)照研究,檢測(cè)分析抗氧化酶編碼基因CAT、GSTM1、GSTT1、GSTP1啟動(dòng)子區(qū)或外顯子區(qū)重要單核甘酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism SNP)位點(diǎn)的分布頻率,探討突變型個(gè)體與白癜風(fēng)易感性的關(guān)系,并對(duì)啟動(dòng)子區(qū)SNP位點(diǎn)進(jìn)行初步功能學(xué)研究,從分子機(jī)制初步闡述抗氧化酶基因遺傳變異在白癜風(fēng)發(fā)病中的作用,為白癜風(fēng)機(jī)理研究和臨床治療提供線索和理論依據(jù)。 方法 本實(shí)驗(yàn)收集749例白癜風(fēng)患者和763例正常人DNA樣本,通過(guò)PCR-RFLP和多重PCR的方法檢測(cè)了4個(gè)基因共8個(gè)SNP位點(diǎn)(GSTT1、GSTM1、GSTP1 Ile104Val、GSTP1 Ala113Val、GSTP1 Gly169Asp、CAT -89AT、CAT 389CT、CAT 419CT)的基因型,SAS軟件統(tǒng)計(jì)白癜風(fēng)患者和正常人群中的分布頻率,分析其與疾病的關(guān)聯(lián)性。對(duì)CAT基因啟動(dòng)子區(qū)SNP進(jìn)行初步功能學(xué)研究,構(gòu)建含啟動(dòng)子區(qū)不同等位基因的重組質(zhì)粒,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞,利用熒光素酶報(bào)告基因分析啟動(dòng)子區(qū)單點(diǎn)突變對(duì)基因轉(zhuǎn)錄活性的影響,ELISA檢測(cè)不同基因型個(gè)體血清中過(guò)氧化氫酶活性。 結(jié)果 1. GSTT1基因缺失型個(gè)體罹患白癜風(fēng)的風(fēng)險(xiǎn)增高(校正OR 1.42, 95%可信區(qū)間1.16-1.75),而GSTM1基因缺失僅表現(xiàn)為風(fēng)險(xiǎn)性增加趨勢(shì)(P=0.059,校正OR 1.22, 95%可信區(qū)間0.99-1.49);GSTT1/GSTM1聯(lián)合基因缺失的個(gè)體更容易發(fā)生白癜風(fēng)(校正OR 1.71, 95%可信區(qū)間1.28-2.28)。 2. GSTP1基因3個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)中,GSTP1 Ile104Val在白癜風(fēng)患者和正常人群中分布無(wú)明顯差異,GSTP1 Ala113Val和GSTP1 Gly169Asp在本研究樣品中僅檢測(cè)到極少數(shù)變異,提示不同種族間基因突變頻率存在差異。 3. CAT -89AT位點(diǎn)等位基因在白癜風(fēng)患者和正常人群中分布有顯著差異,攜帶突變基因型的個(gè)體患病風(fēng)險(xiǎn)增高;CAT 389CT位點(diǎn)與疾病無(wú)明顯關(guān)系;CAT 419CT位點(diǎn)在本研究入選樣本中表現(xiàn)同質(zhì)性。 4. CAT -89AT和CAT 389CT存在協(xié)同作用,個(gè)體患病風(fēng)險(xiǎn)隨等位基因突變個(gè)數(shù)增加而增加;CAT -89AT和CAT 389CT之間也有相互作用,CAT -89AT基因型個(gè)體常攜帶CAT 389 TT基因型,其患病風(fēng)險(xiǎn)大大增加(校正OR 1.71, 95%可信區(qū)間1.59 5.64)。 5.經(jīng)軟件分析預(yù)測(cè)及熒光素酶報(bào)告基因分析,CAT -89AT位點(diǎn)發(fā)生遺傳變異(A→T)后,轉(zhuǎn)錄活性發(fā)生明顯改變;含突變等位基因的序列可能結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子Sp1,影響正常轉(zhuǎn)錄。 6.同正常人群相比,白癜風(fēng)患者血清中過(guò)氧化氫酶活性明顯下降;CAT -89不同基因型個(gè)體血清過(guò)氧化氫酶活性無(wú)顯著差異。 結(jié)論 1. GSTT1基因和GSTM1基因與漢族人白癜風(fēng)有顯著相關(guān)性,基因缺失的個(gè)體患病風(fēng)險(xiǎn)增高;GSTP1基因外顯子區(qū)Ile104Val、Ala113Val和Gly169Asp 3個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)對(duì)白癜風(fēng)發(fā)病無(wú)明顯影響。 2. CAT -89AT多態(tài)性位點(diǎn)與白癜風(fēng)發(fā)病有密切關(guān)系,并協(xié)同外顯子區(qū)389CT位點(diǎn)共同影響疾病發(fā)生。 3. CAT啟動(dòng)子區(qū)-89位點(diǎn)基因變異可能產(chǎn)生新的蛋白結(jié)合位點(diǎn),或原有轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合特性改變,但單獨(dú)作用尚不能導(dǎo)致蛋白表達(dá)量明顯改變。 4.抗氧化酶基因變異可能影響酶蛋白表達(dá)或催化功能變異,機(jī)體應(yīng)對(duì)氧化損傷能力降低,容易受攻擊。進(jìn)一步研究氧化-抗氧化系統(tǒng)中基因變異的分子機(jī)制,可為白癜風(fēng)發(fā)病機(jī)理的研究和臨床治療提供線索和新方法。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R758.41

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 高雅瓊;王彩麗;;谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性與疾病關(guān)系的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2013年01期

本文編號(hào)：2737662