【摘要】： 目的:通過研究洛伐他汀(Lovastatin)對(duì)惡性黑色素瘤(malignant melanoma ,MM)B16細(xì)胞株體內(nèi)、外的作用,觀察洛伐他汀聯(lián)合順鉑(Cisplatin,DDP)對(duì)B16細(xì)胞株體內(nèi)、外作用的影響,進(jìn)一步闡明洛伐他汀作用的可能機(jī)制,初步探討其用于惡性黑色素瘤治療及化學(xué)預(yù)防的可行性。 方法: 1體外實(shí)驗(yàn):以不同濃度的洛伐他汀(Lov)作用于培養(yǎng)的B16細(xì)胞,用四甲基偶氮唑藍(lán)(tetrzolium-based colorimetric assay,MTT)比色試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的增殖活性,并觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。采用MTT比色法檢測(cè)洛伐他汀聯(lián)合對(duì)B16細(xì)胞株的增殖抑制作用,采用金氏公式[1]分析相互作用指數(shù)(Iteraction Index),評(píng)價(jià)聯(lián)合后的作用,如q0.85表示相加作用,q0.85為拮抗作用。 2體內(nèi)實(shí)驗(yàn):建立B16細(xì)胞C57小鼠皮下移植瘤模型,隨機(jī)分為5組:空白對(duì)照組(8只):給予等滲鹽水灌胃1次/日;Lov1組(12只):給予Lov 4mg/(kgd)灌胃;Lov2組(12只):給予Lov 16mg/(kgd)灌胃;順鉑組(12只):給予順鉑10mg/kg(d14、21)腹腔注射;聯(lián)合組(12只):給予Lov 16mg/(kgd)+順鉑10 mg/kg(d14、21);成瘤后測(cè)量各小鼠腫瘤的最長徑和最短徑,隔日一次,計(jì)算腫瘤體積。采用免疫組化法測(cè)定Survivin、Fas、VEGF表達(dá)水平。 結(jié)果: 1體外實(shí)驗(yàn): MTT比色法顯示洛伐他汀(0.5、1、2、4、8、16、32μmol/L)對(duì)B16細(xì)胞增殖具有抑制作用。不同濃度洛伐他汀處理細(xì)胞24-72h后,與對(duì)照組相比,各處理組OD值均有不同程度下降,差異具有顯著性(P0.05)。且隨洛伐他汀處理濃度的增大、作用時(shí)間的延長,OD值逐漸下降,即洛伐他汀對(duì)B16細(xì)胞的增殖抑制作用呈明顯的時(shí)間-劑量依賴效應(yīng)。MTT比色法分析洛伐他汀聯(lián)合順鉑對(duì)B16細(xì)胞的增殖抑制作用,結(jié)果顯示:2、4、8、16μmol/L的洛伐他汀可加強(qiáng)順鉑對(duì)B16細(xì)胞的增殖抑制作用。且隨洛伐他汀濃度的增大,其對(duì)順鉑的協(xié)同作用增強(qiáng)。光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)結(jié)果顯示:未經(jīng)藥物作用的細(xì)胞呈梭形,形態(tài)飽滿,而用藥組細(xì)胞皺縮,破裂,呈不規(guī)則形,有的細(xì)胞兩端出現(xiàn)細(xì)長的偽足,脫落細(xì)胞增多,明顯抑制了B16細(xì)胞的生長,細(xì)胞出現(xiàn)明顯的形態(tài)學(xué)改變。金氏公式分析相互作用指數(shù)顯示,不同濃度順鉑聯(lián)合2、4、8、16μmol/L的洛伐他汀的q值均大于0.85。 2體內(nèi)試驗(yàn):C57小鼠接種B16細(xì)胞后3-5天,多數(shù)小鼠可以觸及到瘤體,種瘤后第21天測(cè)得各處理組小鼠腫瘤體積明顯小于空白組,差異具有顯著性(P0.05)。3周后處死小鼠,聯(lián)合組腫瘤組織中Survivin免疫組織化學(xué)評(píng)分最低,說明不同濃度藥物處理后可下調(diào)腫瘤組織中Survivin的表達(dá);空白組腫瘤組織中VEGF高表達(dá)(5.750±0.619),聯(lián)合組腫瘤組織中VEGF呈低表達(dá)(2.000±0.326);空白組腫瘤組織中Fas表達(dá)較低,經(jīng)藥物處理組Fas呈不同程度的高表達(dá),且以聯(lián)合組中表達(dá)最高。對(duì)于每一種指標(biāo),比較處理組與空白組的IHS評(píng)分,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論:1 HMG-CoA還原酶抑制劑洛伐他汀具有抑制B16細(xì)胞增殖的作用,其抑制B16細(xì)胞增殖的作用呈時(shí)間-劑量依賴關(guān)系。2洛伐他汀可協(xié)同順鉑對(duì)B16細(xì)胞的增殖抑制作用。3洛伐他汀可通過下調(diào)Survivin、VEGF的表達(dá)而發(fā)揮其抑制B16細(xì)胞增殖、浸潤和轉(zhuǎn)移的作用。4洛伐他汀可通過上調(diào)Fas的表達(dá)而誘導(dǎo)B16細(xì)胞凋亡。5 VEGF表達(dá)與Survivin表達(dá)呈正相關(guān),VEGF表達(dá)與Fas表達(dá)呈負(fù)相關(guān),Survivin表達(dá)與Fas表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。6洛伐他汀可強(qiáng)化順鉑誘導(dǎo)B16細(xì)胞凋亡的作用,推測(cè)洛伐他汀可增加B16細(xì)胞對(duì)化療藥的敏感性。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R739.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2729641