發(fā)布時(shí)間：2020-06-24 11:05

【摘要】： 梅毒(Syphilis)是危害性很大的性傳播性疾病(STD)。監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)顯示,我國(guó)現(xiàn)階段梅毒發(fā)病率持續(xù)增高,防治形勢(shì)嚴(yán)峻,同時(shí),梅毒患者容易感染或傳播艾滋病(AIDS)。因此,早期診斷并及時(shí)治療對(duì)梅毒預(yù)防控制至關(guān)重要。 本研究期望通過建立巢式PCR技術(shù)及運(yùn)用改良ELISA、改良蛋白印跡技術(shù)對(duì)血清中特異性Tp-IgG抗體親和力檢測(cè)來區(qū)分梅毒早期或晚期感染。 根據(jù)TP polA基因序列,初步建立巢式PCR技術(shù),對(duì)比DF、TRUST、TPPA、TP-IgM ELISA、TP-IgG ELISA等檢測(cè)法對(duì)31例確診為一期梅毒的皮損組織液、血清進(jìn)行平行檢測(cè);通過改良ELISA技術(shù)和改良蛋白印跡(WB)技術(shù),對(duì)15例確診為一期梅毒和21例潛伏(latent)梅毒的患者血清進(jìn)行TP-IgG抗體親和力檢測(cè)。 結(jié)果顯示:巢式PCR在檢測(cè)TP標(biāo)準(zhǔn)株和對(duì)照菌株時(shí)具有高度的特異性,只擴(kuò)增TP標(biāo)準(zhǔn)株,并能檢測(cè)到1個(gè)/ul的TP菌液濃度。應(yīng)用該巢式PCR檢測(cè)上述31例一期梅毒硬下疳組織液,陽性率達(dá)90.32% ,高于暗視野檢查(Dark field,DF)結(jié)果54.84%,差異有顯著性(χ2=8.10,P〈0.005),略高于TPPA結(jié)果87.1%,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。應(yīng)用該巢式PCR檢測(cè)血清中TP-DNA的陽性率為12.90(%4/31),明顯低于組織液巢式PCR和其它常規(guī)方法(TRUST陽性率為74.19%、TP-IgM ELISA陽性率為61.29%,TP-IgG ELISA陽性率為74.19%),可能與一期梅毒血清中TP含量低有關(guān),說明一期梅毒血清不能作為理想的標(biāo)本用于TP-DNA檢測(cè)。與TPPA比較,DF、TP-IgM陽性率較低,差異有顯著性。而TP-IgM與TP-IgG陽性率比較,差異無顯著性(χ2=0.66, P=0.420.05)。改良ELISA法結(jié)果顯示,經(jīng)變性劑8M尿素溶液處理過的樣本, 15例一期梅毒樣本中,7例吸光度出現(xiàn)下降,8例則反而有所增加;21例潛伏梅毒只有6例出現(xiàn)下降,15例增加,說明這種方法不宜用作TP抗體親和力試驗(yàn),與文獻(xiàn)報(bào)道一致。改良WB結(jié)果顯示,在15例一期梅毒樣本中,有14例產(chǎn)生陽性反應(yīng),8M尿素處理試驗(yàn)后,15、17、45、47kDa等4條抗原區(qū)帶的顏色強(qiáng)度都出現(xiàn)明顯下降,經(jīng)wilcoxon檢驗(yàn),均有顯著性差異。而在對(duì)照組21例潛伏梅毒樣本的常規(guī)WB試驗(yàn)和親和力試驗(yàn),所得到的數(shù)據(jù)經(jīng)wilcoxon檢驗(yàn),4條抗原帶顏色強(qiáng)度的降低也出現(xiàn)相同的顯著性差異,無法確定哪一特異抗體為低親和力抗體,與Woznicova V等報(bào)道的針對(duì)17kDa的抗體可作為區(qū)分早期或晚期梅毒感染的低親和力抗體不相符,原因有待進(jìn)一步的研究。 綜合以上結(jié)果,巢式PCR對(duì)一期梅毒潰瘍組織液的TP-DNA檢測(cè)具有較高的敏感性和特異性,比傳統(tǒng)的DF方法敏感,可以替代DF方法用于一期梅毒的早期診斷。血清巢式PCR雖然陽性率低,但其結(jié)果揭示,在病程約1周的極早期梅毒,血液中有梅毒螺旋體存在,此時(shí)正是血清學(xué)可能呈陰性的時(shí)間,如果獻(xiàn)血員處于此時(shí)間內(nèi)極容易造成血液梅毒傳播,應(yīng)引起重視。本研究在國(guó)內(nèi)首次應(yīng)用改良WB對(duì)梅毒血清進(jìn)行低親和力抗體檢測(cè),結(jié)果表明通過該方法未能區(qū)分梅毒早期和晚期感染。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R759.1
【圖文】：

TPPA試驗(yàn)結(jié)果示意圖

伏梅毒血清分別采用常規(guī) WB 和 8M尿素處理 WB 進(jìn)行平行試驗(yàn)條帶顏色強(qiáng)度出現(xiàn)明顯下降,差異有顯著性（wilcoxon 檢驗(yàn)-IgG 蛋白印跡法常規(guī)試驗(yàn)及親和力試驗(yàn)結(jié)果示意圖L17P47KD常規(guī)WB和8M尿素處理結(jié)果比較0204060801001201401601 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21標(biāo)本號(hào)

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前9條

1 黃進(jìn)梅;鄭和平;;梅毒螺旋體特異性IgM抗體檢測(cè)的臨床評(píng)價(jià)[J];國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2006年02期

2 武明昌,朱慧蘭,顏景蘭,葉興東,楊日東,鄧建華;熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)在一期梅毒診斷中的臨床意義探討[J];臨床皮膚科雜志;2002年03期

3 劉愛英,尹躍平,孫建方,陳祥生,余艷華,尤永燕,徐敏,王書崎;聚合酶鏈反應(yīng)對(duì)一期梅毒患者的診斷[J];臨床皮膚科雜志;2004年07期

4 鄭利雄,李放娟,吳育慶,張桂梅,何桂蓉,熊峰;應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)梅毒患者血清TP-DNA[J];延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)學(xué)報(bào);2005年02期

5 曾志良,段逸群,陳春梅;一期梅毒患者梅毒螺旋體和血清學(xué)檢測(cè)[J];中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志;2002年02期

6 曾鐵兵,吳移謀,黃澍杰,吳志周;巢式PCR擴(kuò)增梅毒螺旋體polA及其臨床應(yīng)用的研究[J];中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志;2004年02期

7 顧偉鳴,張皓,王學(xué)民;梅毒硬下疳實(shí)驗(yàn)室檢查策略初探[J];中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志;2005年10期

8 龔向東,葉順章,張君炎,張國(guó)成,邵長(zhǎng)庚,梁國(guó)鈞,姜文華,夏強(qiáng),王全佩;1991～2001年我國(guó)性病流行病學(xué)分析[J];中華皮膚科雜志;2002年03期

9 呂曉萍;季卉;許小莊;房思寧;熊峰;黃小芳;李放娟;杜小紅;;1200例早期梅毒臨床病理分析及誤診體會(huì)[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2006年02期

本文編號(hào)：2727782