【摘要】： 背景和目的 惡性黑色素瘤(malignant melanoma)是來源于黑色素細胞的惡性腫瘤。雖然我國發(fā)病率較低，為全身惡性腫瘤的1％～2％，但其惡性程度高，易發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，預(yù)后差，大多數(shù)患者在10年內(nèi)死亡。它對常規(guī)的輔助放療、化療不敏感，療效差。隨著人們對惡性黑色素瘤病因的研究，我們認識到只有尋找到新的作用靶點治療該病，才能提高療效，改善預(yù)后。 目前證實直徑超過1-2mm~3的實體腫瘤生長依賴于腫瘤新生血管的生成，它是決定惡性黑色素瘤大小、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)和預(yù)后的重要因素。1971年，F(xiàn)olk man首先提出腫瘤的持續(xù)生長和轉(zhuǎn)移有賴于新生血管形成的假說，之后，針對腫瘤血管內(nèi)皮的治療方法和治療藥物不斷涌現(xiàn)。隨著Avastin的上市，血管抑制劑成為治療惡性腫瘤的熱點。 反應(yīng)停(沙利度胺，酞咪哌啶酮，thalidomide)曾用于鎮(zhèn)靜止吐，1961年因其可導(dǎo)致胎兒海豹畸型而被禁用。近年來發(fā)現(xiàn)其具有抑制血管生成，免疫調(diào)節(jié)等作用，而用于多發(fā)性骨髓瘤等多種腫瘤的治療。但國內(nèi)尚無反應(yīng)停治療惡性黑色素瘤的文獻報道，故本文觀察了反應(yīng)停對小鼠B16黑色素瘤的抑制作用，并探討其作用機制，為反應(yīng)停更好的應(yīng)用于臨床提供實驗依據(jù)。 方法 1．建立小鼠B16黑色素瘤模型，將荷瘤小鼠隨機分為5組，每組10只：反應(yīng)停高、中、低劑量組(按400mg／kg／d、200mg／kg／d、50mg／kg／d的標準，用0.2ml生理鹽水溶解不同濃度反應(yīng)停灌胃，連續(xù)給藥14天)；陽性對照組(經(jīng)腹腔注射CTX 100mg／kg／d，僅第一天給藥)；陰性對照組(等容量無菌生理鹽水灌胃，連續(xù)14天)。隔日測腫瘤體積，第15天處死荷瘤鼠，剝離瘤體稱重，計算抑瘤率。同樣方法建立模型，分組，給藥，記錄各組荷瘤鼠平均生存時間。 2．留取腫瘤組織標本，應(yīng)用HE染色法對反應(yīng)停各劑量組及陰性對照組的腫瘤組織進行病理形態(tài)學(xué)對比觀察。 3．免疫組化法檢測反應(yīng)停各劑量組及陰性對照組腫瘤血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和微血管密度(MVD)的表達。 4．RT-PCR法檢測反應(yīng)停各劑量組及陰性對照組VEGF mRNA的表達。 5．應(yīng)用統(tǒng)計軟件SPSS10.0進行統(tǒng)計學(xué)處理，統(tǒng)計方法采用方差分析。以α=0.05作為檢驗水準。 結(jié)果 1．反應(yīng)停低、中、高劑量組平均瘤重(2.1307±0.5018g、1.9813±0.6578g、2.0986±0.5549g)均小于陰性對照組(2.4995±0.8081g)，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；反應(yīng)停各劑量組之間平均瘤重比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。CTX組平均瘤重(0.4208±0.0719g)明顯小于陰性對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。抑瘤率分別為：反應(yīng)停低劑量組14.75％，中劑量組20.73％，高劑量組16.04％，CTX組83.17％。 2．反應(yīng)停低、中、高劑量組及CTX組荷瘤鼠的平均生存時間(27.3±5.2天、29.8±3.3天、25.6±3.4天、34.1±4.2天)明顯長于陰性對照組荷瘤鼠的平均生存時間(21.5±3.6天)，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，但反應(yīng)停各劑量組之間荷瘤鼠的平均生存時間相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0．05)。CTX組荷瘤鼠的平均生存時間長于反應(yīng)停各劑量組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 3．HE染色組織病理學(xué)觀察可見反應(yīng)停各劑量組有不同程度的腫瘤壞死區(qū)。 4．免疫組化法觀察到反應(yīng)停低、中、高劑量組的VEGF平均灰度值(172.33±5.1109、129.43±7.2954、124.68±8.6643)低于陰性對照組。(183.29±2.2651)，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。反應(yīng)停高、中劑量組VEGF平均灰度值低于低劑量組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。高、中劑量組之間VEGF平均灰度值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 5．免疫組化法計數(shù)反應(yīng)停低、中、高劑量組MVD(11±4.8條、9±2.3條、7+2.1條)少于陰性對照組(23±5.7條)，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。但反應(yīng)停各劑量組之間微血管計數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 6．RT-PCR法檢測反應(yīng)停低、中、高劑量組VEGF mRNA的相對表達量(0.23±0.113、0.13±0.079、0.09±0.068)低于陰性對照組(0.35±0.105)，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。反應(yīng)停高、中劑量組VEGF mRNA的相對表達量低于低劑量組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。高、中劑量組之間VEGF mRNA的相對表達量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 結(jié)論 1．單獨應(yīng)用反應(yīng)停不能抑制小鼠B16惡性黑色素瘤生長。 2．反應(yīng)�？裳娱L荷瘤小鼠的平均生存時間。 3．反應(yīng)�？梢种菩∈驜16惡性黑色素瘤VEGF的表達。 4．反應(yīng)�？蓽p少小鼠B16惡性黑色素瘤腫瘤微血管密度。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R739.5
【圖文】：

反應(yīng)停低劑量組瘤體組織病理形態(tài)圖像(400義)

陰性對照組瘤體病理形態(tài)圖像(400“)

【參考文獻】

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本文編號：2727131