【摘要】：惡性黑色素瘤是一種惡性腫瘤,起源于人類正常皮膚細(xì)胞或者原有痣細(xì)胞。目前的治療手段具有靶向性差、對中晚期無能為力等缺點(diǎn)。研究表明,近紫外光輔助抗癌藥物治療方法具有靶向性好、高選擇性和低毒性等優(yōu)點(diǎn)。其中,4-硫胸腺嘧啶脫氧-β-核苷(S4TdR)與UVA協(xié)同作用,可以靶向性地殺死數(shù)種癌細(xì)胞及其組織。本研究將探討S4TdR/UVA對人惡性黑色素瘤細(xì)胞是否具有靶向抑制效應(yīng),及其可能的分子機(jī)制。采用S4TdR/UVA對人惡性黑色素瘤細(xì)胞A375及人正常皮膚永生化角質(zhì)細(xì)胞HaCat分別進(jìn)行體外(invitro)暴露處理,檢測其對細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的影響。通過對p53通路和chop通路中基因和蛋白表達(dá)的定量分析,探討S4TdR/UVA引起細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。結(jié)果表明,10-6M和10-5M濃度的S4TdR與UVA協(xié)同作用能夠抑制A375細(xì)胞的增殖,但對HaCat細(xì)胞的活性無顯著性影響。10-5MS4TdR/UVA可導(dǎo)致A375細(xì)胞的G1期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)增加,細(xì)胞增殖指數(shù)僅為2.86%,細(xì)胞增殖受到嚴(yán)重抑制。對相關(guān)分子機(jī)制的研究發(fā)現(xiàn),S4TdR/UVA可引起A375細(xì)胞中p53表達(dá)的上調(diào),并激活P53通路,一方面通過上調(diào)p21的表達(dá),調(diào)控G1/S期的轉(zhuǎn)換,抑制細(xì)胞增殖;另一方面,通過上調(diào)bax/bcl-2比值,激活Caspase-3表達(dá),促進(jìn)細(xì)胞凋亡。進(jìn)一步研究表明,S4TdR/UVA可激活A(yù)375細(xì)胞中的應(yīng)激感受分子ATF6、IRE1和PERK,并通過上調(diào)chop的表達(dá),激活CHOP/GADD153通路,誘發(fā)細(xì)胞凋亡。本論文的研究結(jié)果為近紫外光輔助硫胸苷治療惡性黑色素瘤提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：大連海事大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R739.5
【圖文】：

逑１．２．邋２胸苷激酶介導(dǎo)的靶向性機(jī)制逡逑Ｓ４ＴｄＲ可靶向特異進(jìn)入癌細(xì)胞的原理如圖１．３所示，在胸苷激酶（ＴＫ）的作逡逑用下，５位０Ｈ？發(fā)生磷酸化變成核苷單磷酸，之后在激酶的作用之下聚合形成三逡逑磷酸，核苷三磷酸做為ＤＮＡ合成的基底原料嵌入到癌細(xì)胞ＤＮＡ中。由于ＴＫ的逡逑含量與細(xì)胞分裂的快慢密切相關(guān)，分裂越快速，產(chǎn)生越高的ＴＫ。癌細(xì)胞的分裂速逡逑度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于正常的細(xì)胞［３５］，因此高濃度的ＴＫ可靶向特異性地將Ｓ４ＴｄＲ導(dǎo)入癌細(xì)逡逑胞中。Ｓ４ＴｄＲ具有較強(qiáng)的親脂特性和強(qiáng)紫外長段波長，可以與近紫外的ＵＶＡ協(xié)同逡逑作用。與傳統(tǒng)光動力治療方法相比，Ｓ４ＴｄＲ／ＵＶＡ協(xié)同作用具有以下三個有點(diǎn)。逡逑（１）毒性低：Ｓ４ＴｄＲ是對近紫外光敏感的化學(xué)物質(zhì)，當(dāng)它不與近紫外光協(xié)同，逡逑而單獨(dú)作用于細(xì)胞時無毒性作用。在構(gòu)建的動物模型實(shí)驗中

圖１．邋３邋Ｐ５３凋亡信號通路［５５］逡逑Ｆｉｇ．邋１．３邋Ｐ５３邋ａｐｏｐｔｏｔｉｃ邋ｓｉｇｎａｌｉｎｇ邋ｐａｔｈｗａｙ．逡逑體通路中的第一條途徑Ｃｙｔｃ的釋放對于線粒體通路是最為重要的透化反應(yīng)（ＭＯＭＰ）引發(fā)細(xì)胞色素Ｃ的解離是凋亡激活的一個重表明Ｃｙｔｃ的釋放是依靠Ｂｃｌ－２家族來控制ＭＯＭＰ，邋Ｂｃｌ－２蛋白家族促凋亡蛋白共同組成。通常狀態(tài)下，抗凋亡相關(guān)蛋白抑制促凋亡作用。在細(xì)胞受到損傷或者外界的刺激之后，促凋亡蛋白開始發(fā)凋亡蛋白有Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｄ、Ｂｉｍ、Ｂｉｋ等，抗凋亡蛋白有Ｂｃｌ－２、Ｂｃｌ－１邋等［５６丨。逡逑公認(rèn)Ｂｃｌ－２家族對ＭＯＭＰ的調(diào)節(jié)有兩種主要生物模型［５７］。第一種－２蛋白調(diào)控膜上通透性轉(zhuǎn)換通道（Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｉｔｙ邋Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ邋Ｐｏｒｅ，Ｐ制ＭＯＭＰ，進(jìn)而調(diào)控Ｃｙｔｃ從膜間隙到胞質(zhì)的釋放。Ｂｃｌ－２家族的

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本文編號：2726692