【摘要】： 人的皮膚老化是一個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程，影響皮膚老化的因素主要包括遺傳因素和環(huán)境因素。有相當(dāng)多的因素可以影響皮膚老化的過(guò)程及速度，這些因素之間相互影響、相互作用，錯(cuò)綜復(fù)雜。由于面部長(zhǎng)期受到日光、溫度、濕度等外界環(huán)境因素的作用，變化較大，所以面部皮膚在衰老時(shí)較其他部位的皮膚有明顯的臨床表現(xiàn)。本課題首先調(diào)查了中國(guó)人面部皮膚老化時(shí)的特點(diǎn)和其相關(guān)影響因素，然后又從細(xì)胞學(xué)角度分析了香煙致皮膚老化的作用和其相關(guān)機(jī)制。 本研究第一部分主要調(diào)查了中國(guó)人面部皮膚衰老的特征及其之間的關(guān)系，并研究了中國(guó)人面部皮膚老化時(shí)皺紋發(fā)生的危險(xiǎn)因素。本研究共調(diào)查了195名不同年齡階段、不同職業(yè)的健康人群。采集完圖像后，按照J(rèn)in Hochung的圖像冊(cè)對(duì)每個(gè)調(diào)查者的圖像進(jìn)行對(duì)比分級(jí)。然后在SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件包下對(duì)各相關(guān)因素進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果顯示皺紋同色素變化一樣是中國(guó)人面部皮膚光老化的主要特征；色素變化在兩性中的改變是有區(qū)別的，脂溢性角化是男性人群中的主要色素改變，，而色素斑則是女性的主要色素變化；光暴露時(shí)間、吸煙以及女性性別是中國(guó)人皺紋發(fā)生的危險(xiǎn)因素。 根據(jù)第一部分研究的結(jié)論以及眾多流行病學(xué)的研究結(jié)果，本課題后兩部分著重從細(xì)胞學(xué)角度研究香煙煙霧致皮膚衰老損傷作用和機(jī)制。主要包括：1．研究香煙煙霧提取物和尼古丁致原代體外培養(yǎng)皮膚成纖維細(xì)胞的衰老作用；2．研究香煙煙霧提取物對(duì)原代體外培養(yǎng)皮膚成纖維細(xì)胞膠原代謝的影響和致細(xì)胞衰老損傷的機(jī)制。 本課題研究目的： 1、研究中國(guó)人面部皮膚衰老過(guò)程中皺紋和色素變化的特點(diǎn)，調(diào)查光暴露時(shí)間、吸煙和性別等因素與中國(guó)人面部皮膚衰老的關(guān)系。 2、探討香煙煙霧提取物(CSE)和尼古丁對(duì)原代培養(yǎng)的皮膚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的影響作用。 3、觀察CSE對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞膠原合成的影響；明確CSE致皮膚成纖維細(xì)胞的氧化損傷機(jī)制。 研究方法： 1、采用面對(duì)面的現(xiàn)場(chǎng)問(wèn)卷調(diào)查方式進(jìn)行隨機(jī)的調(diào)查，對(duì)被調(diào)查者的年齡、性別、吸煙和光暴露時(shí)間等信息進(jìn)行采集。被調(diào)查者需進(jìn)行面部拍照，采集圖像。按照J(rèn)in Hochung的東亞人面部圖像冊(cè)對(duì)每個(gè)調(diào)查者的面部圖像進(jìn)行比對(duì)分級(jí)。然后采用按照?qǐng)D像比對(duì)的方法對(duì)每個(gè)調(diào)查者的面部圖像的皺紋和色素變化情況進(jìn)行評(píng)分和分級(jí)。然后在SPSS 11.5軟件包下對(duì)各影響因素進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 2、采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測(cè)CSE和尼古丁對(duì)體外皮膚成纖維細(xì)胞存活力的影響，并在光鏡下和透射電鏡下觀察CSE作用后的細(xì)胞形態(tài)和顯微結(jié)構(gòu)變化；繪制不同濃度的CSE和尼古丁作用于成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線；β—半乳糖苷酶染色方法檢測(cè)CSE連續(xù)作用5代后成纖維細(xì)胞β—半乳糖苷酶的變化情況，并繪制正常培養(yǎng)5代和CSE連續(xù)作用5代后細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線；流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度的CSE作用于成纖維細(xì)胞后細(xì)胞周期的變化情況。 3、用分光光度檢測(cè)法及逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT—PCR)法測(cè)定CSE對(duì)成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基中分泌的膠原含量和Ⅰ型前膠原表達(dá)的影響；用分光光度法檢測(cè)胞漿內(nèi)活性氧(ROS)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。 研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)： 1、色素斑和脂溢性角化的數(shù)目隨著年齡的增長(zhǎng)而增多；在50歲年齡段以上女性人群中色素斑的數(shù)目要比男性多，而在60歲以上男性人群中脂溢性角化的數(shù)目要比女性更為普遍；年齡與皺紋改變、色素變化成正相關(guān)。在控制了年齡和性別之后，皺紋與色素改變存在著正相關(guān)。除年齡外，吸煙、光暴露時(shí)間和女性性別均是發(fā)生嚴(yán)重皺紋的危險(xiǎn)因素。 2、CSE作用細(xì)胞后成纖維細(xì)胞呈典型的損傷形態(tài)；隨著CSE濃度的增大和作用時(shí)間的延長(zhǎng)細(xì)胞存活力明顯下降，高濃度的尼古丁可以使成纖維細(xì)胞的存活力下降，而低濃度的尼古丁則促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖能力；細(xì)胞生長(zhǎng)曲線示CSE各染毒組細(xì)胞的生長(zhǎng)速度較對(duì)照組明顯減慢，而低濃度的尼古丁作用的各組細(xì)胞生長(zhǎng)速度較對(duì)照組明顯增快；CSE染毒作用五代后的細(xì)胞經(jīng)β—半乳糖苷酶呈顯著陽(yáng)性；CSE長(zhǎng)期連續(xù)作用后的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線示細(xì)胞的生長(zhǎng)速度明顯減慢，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期消失；細(xì)胞周期動(dòng)力學(xué)顯示隨著CSE作用濃度的加大和作用時(shí)間的延長(zhǎng)，G_1期、G_2期細(xì)胞數(shù)增加，S期細(xì)胞數(shù)減少。 3、CSE能夠顯著降低成纖維細(xì)胞分泌的可溶性膠原含量，上述抑制作用隨著藥物濃度的增高而增強(qiáng)；采用RT—PCR法對(duì)成纖維細(xì)胞Ⅰ型前膠原的mRNA進(jìn)行檢測(cè)，顯示隨著CSE濃度的增高其表達(dá)量降低；CSE作用于細(xì)胞后，細(xì)胞胞漿內(nèi)ROS含量升高，SOD活性降低。 結(jié)論： 1、皺紋變化同色素改變一樣是中國(guó)人皮膚老化的主要特征。吸煙，光暴露和女性性別是皺紋發(fā)生的危險(xiǎn)因素。 2、CSE對(duì)體外培養(yǎng)的皮膚成纖維細(xì)胞具有損傷作用，對(duì)細(xì)胞的增殖和生長(zhǎng)有一定的抑制作用；高濃度的尼古丁對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞具有損傷作用，低濃度尼古丁對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞的增殖有促進(jìn)作用；CSE引起細(xì)胞DNA復(fù)制和有絲分裂障礙，對(duì)細(xì)胞的G_1期、G_2期有不同程度的阻滯。低濃度CSE長(zhǎng)期的作用，可以促使原代培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞迅速衰老。 3、CSE能夠抑制皮膚成纖維細(xì)胞膠原的合成；CSE對(duì)成纖維細(xì)胞的損傷作用與氧自由基生成及其抑制細(xì)胞抗氧化能力有關(guān)。
【圖文】：

行相關(guān)變量的均數(shù)比較，男性、女性觀察者中49歲以下和50一69歲年齡段皺紋與色素變化的級(jí)別有相關(guān)性。圖1.4皺紋、色素變化程度與年齡的關(guān)系皺紋價(jià)球性別.男性.女性皺紋

3光鏡下CSE作用成纖維細(xì)胞24小時(shí)的形態(tài)(10x20倍)
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R751

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本文編號(hào)：2699441