【摘要】： 目的:通過研究雌激素對體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細胞MMP-1的mRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響,探討雌激素減緩皮膚老化的機制。 方法:首先采用酶消化法進行體外人皮膚成纖維細胞原代培養(yǎng),然后將不同濃度的雌激素(0mol/L,1×10~(-5)mol/L,1×10~(-4)mol/L)加入體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細胞中,待藥物作用后,提取其中的總RNA,通過逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)獲得cDNA,并進行體外擴增,對擴增產(chǎn)物進行瓊脂凝膠電泳,并根據(jù)條帶的亮度來判斷成纖維細胞中MMP-1 mRNA的表達水平。 結(jié)果:經(jīng)酶消化法體外培養(yǎng)的皮膚成纖維細胞,增生活躍,形態(tài)良好,呈典型的梭形、柳葉形,用細胞計數(shù)法進行生長曲線,顯示:潛伏期為0～2天,指數(shù)生長期為2～5天,之后進入平臺期。對細胞進行雌二醇干預(yù),經(jīng)β-actin內(nèi)參校正后,RT-PCR示低劑量組與對照組相比,MMP-1 mRNA表達水平的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義,高劑量組雌激素與對照組相比,MMP-1 mRNA表達水平有所下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論:雌激素可以下調(diào)MMP-1基因的轉(zhuǎn)錄水平,減少后者對膠原的降解,增加真皮的厚度及彈性,逆轉(zhuǎn)或延緩皮膚老化。
【圖文】：

圖2.雌激素通過與其核內(nèi)的受體結(jié)合對代謝和基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)研究發(fā)現(xiàn)，無論是內(nèi)源性老化還是外源性老化過程都伴隨著皮膚數(shù)量和質(zhì)量的改變�；|(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinase，一組由多種鋅離子依賴性酶組成的降解膠原的重要酶類，屬于蛋白酶在已發(fā)現(xiàn)的這些MMPS中，又以MMP一1為最重要，它是降解細胞外基質(zhì)加速皮膚老化的一個關(guān)鍵酶〔8]。Fi:her等1996年提出了日光誘導(dǎo)皮膚子機制，他們的研究表明低劑量的UVB輻射，包括檢測不到日曬傷的快速誘導(dǎo)并維持轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白1(AP一1)和核因子kaPpaB(NF一KB)合上調(diào)，隨后，，由AP幾調(diào)節(jié)的MMP(包括間質(zhì)膠原酶，92kD明膠酶和mRNA表達和蛋白質(zhì)含量均顯著增加。體外實驗研究發(fā)現(xiàn)，用紫外線輻成纖維細胞可導(dǎo)致MMP一1的mRNA高表達〔9，’�！�。用原位雜交技術(shù)和免疫組究發(fā)現(xiàn):在日光損傷的皮膚中有較多的MMP一1沉積L”〕。

圖3.Zllunx5Inln大小的皮片倒置顯微鏡下觀察新分離的成纖維細胞為透亮的圓形細胞，呈單個分狀態(tài);培養(yǎng)3~4小時后開始貼壁，培養(yǎng)24小時后大部分成纖維細胞貼壁，呈體積逐漸增大，形態(tài)逐漸延長;培養(yǎng)2天后絕大多數(shù)細胞已經(jīng)貼壁，形態(tài)改變更加明顯，細胞拉平伸展，緊緊乳附于培養(yǎng)瓶底，呈典型的梭形、柳葉形;培養(yǎng)6~7天，新增生的成纖維細胞明顯增多，長成致密單層，互相連接成網(wǎng)狀(如圖4~7示)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R751

【參考文獻】

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本文編號：2693571