【摘要】： 以減毒沙門氏菌作為載體的腫瘤疫苗,可以有效地把特異性腫瘤抗原遞呈給免疫細(xì)胞,激發(fā)機(jī)體對腫瘤細(xì)胞的特異性免疫反應(yīng),從而為抑制和治療腫瘤提供了新的思路。熱休克蛋白Hsp70可以有效將抗原肽遞呈至抗原遞呈細(xì)胞(APC)并將其激活,打破機(jī)體對腫瘤相關(guān)性抗原的免疫耐受。本實(shí)驗(yàn)將編碼熱休克蛋白Hsp70和小鼠黑色素瘤特異性抗原酪氨酸酶相關(guān)蛋白2基因(Trp2)的重組質(zhì)粒(pcDNA3.1-Hsp70-Trp2)導(dǎo)入減毒鼠傷寒沙門氏菌SL3261菌株。該重組減毒沙門氏菌疫苗以口服形式免疫小鼠C57BL/6后,有效提高了黑色素瘤細(xì)胞特異性毒性T細(xì)胞反應(yīng),并顯著激活了自然殺傷細(xì)胞。CTL反應(yīng)活性達(dá)到44.6%(P＜0.01),是PBS對照組(8.4%)的5倍多,自然殺傷細(xì)胞占脾臟細(xì)胞比例達(dá)到4.0%(P＜0.01),是PBS對照組(0.8%)的5倍。在免疫預(yù)防實(shí)驗(yàn)中,發(fā)現(xiàn)減毒沙門氏菌介導(dǎo)的口服DNA疫苗能夠明顯延緩C57BL/6小鼠B16F10黑色素移植腫瘤的生長(P＜0.01)。
【圖文】：

在氨節(jié)青霉素抗性平板上篩選出陽性克隆DHS。 /PcDNA3.1一Hsp70一TrpZ和 DH5a/PeDNA3.1一Hsp7o后，peR鑒定Hsp7o基因(1923bp)和TrpZ基因(792bp)，結(jié)果見圖4和圖5，，從圖中可見結(jié)果與已知基因大小相符。圖4:PeR鑒定Hsp70基因 (1923bP) 1.DNAMarkerDL20002一 3.DH5a/PeDNA3.l一Hsp7o.T甲 2pCR產(chǎn)物4一5.oH5a/pcoNA3.l一 Hsp7opCR產(chǎn)物

1.1pCR擴(kuò)增Hsp7o基因和腸pZ基因分別以pET-28b一Hsp7o和pSK一TrpZ質(zhì)粒為模板設(shè)計(jì)引物，pCR擴(kuò)增Hsp7o基因和TrpZ基因，PCR結(jié)果見圖3，從結(jié)果可見已經(jīng)從原先質(zhì)粒中分別擴(kuò)增出相應(yīng)的基因片段。圖3:PCR擴(kuò)增目標(biāo)基因Hsp70和TrPZ 1.DNAM盯 kerDL20002.Hsp7o基因的pCR產(chǎn)物3.TrpZ基因的PcR產(chǎn)物4.陰性對照 1.2DH5a轉(zhuǎn)化子鑒定在氨節(jié)青霉素抗性平板上篩選出陽性克隆DHS。 /PcDNA3.1一Hsp70一TrpZ和 DH5a/PeDNA3.1一Hsp7o后，peR鑒定Hsp7o基因(1923bp)和TrpZ基因(792bp)，結(jié)果見圖4和圖5，從圖中可見結(jié)果與已知基因大小相符。圖4:PeR鑒定Hsp70基因 (1923bP) 1.DNAMarkerDL20002一 3.DH5a/PeDNA3.l一Hsp7o.T甲 2pCR產(chǎn)物4一5.oH5a/pcoNA3.l一 Hsp7opCR產(chǎn)物
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R739.5

【參考文獻(xiàn)】

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2 李文桂,陳雅棠;細(xì)菌重組減毒鼠傷寒沙門氏菌疫苗研究進(jìn)展[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2004年02期

3 彭健,王R

本文編號：2675419