【摘要】：目的:本研究針對骨髓間充質干細胞培養(yǎng)上清可能對毛囊從休止期進入生長期產生影響展開,建立小鼠動物模型,探究這種影響機制與Wnt信號通路激活的關系。為進一步研究提供方向。研究方法:本研究對骨髓間充質干細胞進行提取和體外培養(yǎng),在培養(yǎng)細胞的特定時間點獲取培養(yǎng)上清。將C57BL/6小鼠隨機分為3組,每組10只,分別在背部剃毛區(qū)注射BMSCs培養(yǎng)12天上清、培養(yǎng)15天上清或未培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基,隔日注射1次,共處理5次,隔日觀察小鼠生存狀況及大體皮膚變化,根據小鼠毛囊從休止期進入生長期的速度,選擇較快者為最優(yōu)模型。確定最優(yōu)模型后,分別在處理后7、10、14天取對應試驗組與對照組皮膚組織進行HE染色光學顯微鏡觀察,驗證模型建立成功。建模成功后,分別取對應試驗組與對照組處理后7、14天皮膚組織,qPCR檢測Wnt/β-catenin信號通路關鍵目的基因mRNA表達水平,對比試驗組與對照組間是否存在差異,并應用SPSS20.0統(tǒng)計軟件進行數據統(tǒng)計分析,雙側p0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。結果:排除麻醉死亡及有明確干擾因素的小鼠3只,共27只小鼠完成建模處理,觀察至處理后4周時27只小鼠仍存活。處理后第6天開始,注射BMSCs培養(yǎng)12天上清的試驗1組小鼠毛囊最先進入生長期,至第14天共6只小鼠毛囊進入生長期;注射BMSCs培養(yǎng)15天上清的試驗2組小鼠從第12天開始毛囊逐漸進入生長期,至第14天共2只小鼠毛囊進入生長期;觀察對照組小鼠至處理后第14天,未見小鼠毛囊進入生長期。HE染色顯示第7天時試驗1組小鼠毛囊進入生長期IIIa階段,第10天時試驗1組小鼠毛囊進入生長期IIIc階段,第14天時試驗1組小鼠毛囊進入生長期VI階段;第14天時對照組小鼠毛囊仍處于休止期。處理后7天,與對照組相比,試驗1組β-catenin mRNA的表達水平較對照組升高,差異有統(tǒng)計學意義;處理后14天,與對照組相比,試驗組β-catenin、Lef1、Tcf1 mRNA表達水平較高,差異有統(tǒng)計學意義,抑制因子DKK1 mRNA表達水平在組間無統(tǒng)計學差異,其余所檢目的基因mRNA在試驗組與對照組間無統(tǒng)計學差異。結論:在小鼠皮內注射小鼠原代BMSCs培養(yǎng)上清可促進小鼠毛囊從休止期加速進入生長期,應用BMSCs培養(yǎng)第12天上清時促進作用更顯著,并且對于小鼠生存狀態(tài)沒有明確影響;BMSCs培養(yǎng)上清處理后Wnt/β-catenin信號通路關鍵影響因子中β-catenin、Lef1、Tcf1 mRNA表達水平升高,而DKK1表達水平不變,提示其影響機制可能與促進Wnt/β-catenin信號通路激活有關。
【圖文】：

圖 3. 處理后 14 天各組小鼠大體觀察A：處理前；B：試驗 1 組處理后 14 天；C：試驗 2 組處理后 14 天；D：對照組處理后 14 天3.2 小鼠皮膚組織 HE 染色觀察通過大體觀察可明確試驗 1 組與對照組間差異大于試驗 2 組與對照組間差異，即試驗 1 組處理后小鼠毛囊從休止期進入生長期的速度更快，而試驗 1 組與 2 組間差異僅在細胞培養(yǎng)上清收取時間點不同，可以認為選擇培養(yǎng)原代BMSCs 12 天的培養(yǎng)上清的試驗 1 組是最優(yōu)模型，故選擇試驗 1 組（以下稱“試驗組”）方案完成建模，并且與對照組進行后續(xù)驗證試驗。不同時間點每組小鼠選擇 3 只進行取材及染色，每個標本觀察 20 個毛囊。組織 HE 染色在光學顯微鏡下觀察，結果顯示：處理后第 7 天時，試驗組毛囊已經進入生長期 IIIa 階段，表現為真皮變厚，毛囊球部增大，部分突破真皮與皮下組織交界，向下延伸，，毛乳頭結構松散，內毛根鞘呈錐形位于其上

圖 2. 處理后 7 天各組小鼠大體觀察A：處理前；B：試驗 1 組處理后 7 天；C：試驗 2 組處理后 7 天；D：對照組處理后 7 天圖 3. 處理后 14 天各組小鼠大體觀察A：處理前；B：試驗 1 組處理后 14 天；C：試驗 2 組處理后 14 天；D：對照組處理后 14 天A B CD
【學位授予單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R758.71

【參考文獻】

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2 袁媛;王前;司維柯;;Wnt信號轉導通路及其與腫瘤相關的調節(jié)因素研究進展[J];實用醫(yī)藥雜志;2014年10期

3 劉青;翟煒;吳華;金鑫;李杭;王婷琳;王曉艷;周城;張建中;;山東淄博地區(qū)雄激素源性禿發(fā)流行病學調查[J];中國皮膚性病學雜志;2013年05期

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1 楊希川;;雄激素禿發(fā)的診斷與鑒別診斷[A];2017全國中西醫(yī)結合皮膚性病學術年會論文匯編[C];2017年

本文編號：2672995