發(fā)布時間：2020-05-08 08:58

【摘要】： 研究背景營養(yǎng)不良型大皰性表皮松解癥(dystrophic epidermolysis bullosa,DEB)是一組單基因遺傳性疾病,表現(xiàn)為皮膚黏膜脆性增加,容易出現(xiàn)水皰、大皰,愈后留有萎縮性瘢痕,并伴有甲的改變。根據(jù)遺傳方式的不同,可將DEB分為常染色體顯性遺傳(DDEB)和常染色體隱性遺傳(RDEB),兩型均由編碼Ⅶ型膠原的COL7A1基因發(fā)生突變所致,Ⅶ型膠原在表皮和真皮間的粘附過程中起重要作用。迄今共發(fā)現(xiàn)COL7A1基因突變320余個。 癢疹樣營養(yǎng)不良型大皰性表皮松解癥(dystrophic epidermolysis bullosa pruriginosa,DEB-Pr)是營養(yǎng)不良型大皰性表皮松解癥的一種少見類型,表現(xiàn)為出生時或出生后皮膚黏膜出現(xiàn)水皰、糜爛,瘙癢劇烈,成年后主要表現(xiàn)為大量的抓痕、癢疹樣丘疹、結(jié)節(jié)等。DEB-Pr由COL7A1基因突變所致,目前報(bào)道本型COL7A1基因突變位點(diǎn)近30個,其中大部分為甘氨酸替代突變。 目的對癢疹樣營養(yǎng)不良型大皰性表皮松解癥兩家系進(jìn)行COL7A1基因突變分析,回顧國內(nèi)報(bào)道的DEB家系的臨床特點(diǎn)和所有病例的相關(guān)突變篩查,以期獲得更多的基因型和表型的相關(guān)信息。 方法提取2個癢疹樣DEB家系中的患者及其家庭成員和100名正常對照的外周血白細(xì)胞基因組DNA,采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增COL7A1基因的118個外顯子及側(cè)翼序列,用直接測序的方法對所有病例進(jìn)行COL7A1基因突變檢測。對1995年以來國內(nèi)報(bào)道的DEB家系和所有病例的相關(guān)突變篩查進(jìn)行檢索,對其臨床及突變特點(diǎn)進(jìn)行分析總結(jié)。 結(jié)果通過對癢疹樣DEB兩家系進(jìn)行突變檢測,檢測到一個國外曾報(bào)道過的突變c. 6859G A (p. G2287R)和一個國內(nèi)外首次報(bào)道的突變c. 6860G A (p. G2287E)。而這兩個家系的18例健康者及無親緣關(guān)系的100例正常對照均未發(fā)現(xiàn)同樣的突變位點(diǎn)�？偨Y(jié)了自1995年以來中國報(bào)道的20個DEB家系,發(fā)現(xiàn)本病發(fā)病年齡多在出生時～5歲間,皮損好發(fā)于脛前、前臂、背部。不同家系甚至同一家系中不同患者的臨床表現(xiàn)有差異。甘氨酸替代突變是大多數(shù)DEB的致病突變。 結(jié)論本研究證實(shí)甘氨酸替代突變p. G2287R和p. G2287E是引起癢疹樣DEB兩家系臨床癥狀的特征性突變,而不是正常多態(tài)性。營養(yǎng)不良型大皰性表皮松解癥具有多種臨床類型,不同類型臨床表現(xiàn)嚴(yán)重程度不一,突變類型亦因表型而異。本研究進(jìn)一步探討了DEB和COL7A1基因突變之間的關(guān)系,有助于今后開展基因治療和遺傳咨詢。
【圖文】：

DNA 原液濃度配成濃度為 100ng/μl 的模板 DNA。.5.4 COL7A1 基因引物合成、稀釋和保存.5.4.1 基因的序列獲取在NCBI的網(wǎng)頁（http://www.ncbi.nlm.nih.gov）輸入COL7A1基因的名稱，可該基因的mRNA序列。.5.4.2 基因的Human BLAT Search在UCSC 的數(shù)據(jù)庫（www.genome.ucsc.edu）中，將基因的mRNA的編碼序列行human BLAT 搜尋，從而得到COL7A1基因的基因組序列（圖1）。

始及中止位置限定設(shè)計(jì)條件，從輸出結(jié)果中挑選合適的引物�？紤]到測序結(jié)準(zhǔn)確性和測序儀機(jī)器的誤差，以及外顯子/內(nèi)含子交界 50 個堿基以內(nèi)序列可響 mRNA 剪切，一般要超出目標(biāo)序列邊界 50～100bp 左右。引物設(shè)計(jì)主要是針對基因的編碼區(qū)進(jìn)行的，引物設(shè)計(jì)參照以下原則：1) 引物的長度控制在16～24 bp。2) GC含量控制在40%～60%之間。3) 引物自身不能有連續(xù)4個堿基的互補(bǔ)，引物間不能有連續(xù)4個堿基的互補(bǔ)4) 引物二聚體及發(fā)夾結(jié)構(gòu)的能值不能過高（通常不超過4.5kcal/mol），，二聚及發(fā)夾結(jié)構(gòu)的能值過高易導(dǎo)致產(chǎn)生引物二聚體帶，并且將降低引物有效度而使PCR反應(yīng)不能正常進(jìn)行。5) 對于某些相鄰的片段較短的外顯子且兩外顯子間的內(nèi)含子亦較短的片段可合并設(shè)計(jì)成一對引物（如外顯子3、4設(shè)計(jì)成一對引物等）。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R758.5

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本文編號：2654436