發(fā)布時間：2020-05-06 12:44

【摘要】： 目的研究臨床分離的耐喹諾酮類解脲支原體(Ureaplasma urealyticum,Uu) gyrA基因和parC基因突變情況。 方法應(yīng)用支原體液體培養(yǎng)及固體培養(yǎng),通過藥敏試劑盒檢測篩選出對喹諾酮類藥物(包括環(huán)丙沙星、氧氟沙星、司帕沙星)耐藥的Uu 15株,提取其DNA,應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)擴(kuò)增gyrA和parC基因的喹諾酮耐藥決定區(qū)(Quinolone-Resistant Determining Region,QRDR),并將擴(kuò)增的目的基因片段進(jìn)行純化測序,測序后采用Blast比對法分析臨床耐藥株與解脲支原體血清3型標(biāo)準(zhǔn)菌株(ATCC700970)的序列差異。 結(jié)果5株單純環(huán)丙沙星耐藥的Uu有3株僅出現(xiàn)了parC的點突變,即248位C突變?yōu)門,致83位絲氨酸變?yōu)榱涟彼?另2株未發(fā)現(xiàn)突變。而10株表現(xiàn)為兩種或三種喹諾酮類藥物交叉耐藥的Uu的gyrA和parC兩個基因片段均出現(xiàn)了點突變,其中9株的parC突變位置同上,另有一株第298位C突變?yōu)門,未發(fā)生氨基酸的改變;gyrA為第336位C突變?yōu)锳,致112位天冬氨酸被谷氨酸取代。 結(jié)論分離到的15株Uu有13株存在QRDR的突變,可能是導(dǎo)致Uu對喹諾酮類耐藥的重要因素;且gyrA和parC兩個基因同時存在突變可能與多種喹諾酮類藥物交叉耐藥相關(guān);此外,臨床分離Uu對喹諾酮類藥物耐藥可能還存在其他耐藥機(jī)制。
【圖文】：

圖1 gyrA和parC基因PCR產(chǎn)物電泳圖（ 此 為 部 分 耐 藥 Uu 的 電 泳 圖 ， M 為 marker ； 2 ， 4 ， 6 ， 8 ， 10 分 別 為Uu2,Uu3,Uu7,Uu11,Uu13的gyrA基因擴(kuò)增產(chǎn)物； 1，3，，5，7，9分別為Uu2,Uu3,Uu7,Uu11,Uu13的parC基因擴(kuò)增產(chǎn)物）2．測序結(jié)果2.1 gyrA 測序結(jié)果：與網(wǎng)上 Genbank 中發(fā)布的解脲支原體標(biāo)準(zhǔn)菌株 ATCC700970(GENEBANK/AF222894)進(jìn)行同源性比較，15 株臨床分離的喹諾酮類抗生素耐藥株中，10 株均有同一位點的突變，為 gyrA 基因第 336 位 C 突變?yōu)?A，致 112 位天冬氨酸被谷氨酸取代。見圖 2A，BLAST 比對結(jié)果見圖 2B。2.2 parC 測序結(jié)果：與網(wǎng)上Genebank中發(fā)布的解脲支原體標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC700970 par（CGENEBANK/

AF222894）進(jìn)行同源性比較，15 株臨床分離喹諾酮類抗生素耐藥菌株中，有 13株出現(xiàn)點突變，其中 12 株為 parC 的 248 位 C 突變?yōu)?T,致 83 位絲氨酸變?yōu)榱涟彼�；另有一株�?298 位 C 變?yōu)?T，因堿基簡并未發(fā)生氨基酸的改變。見圖 3A～4A。BLAST 比對結(jié)果見圖 3B～4B。
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R759;R450

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2651277