【摘要】： 目的 研究CD147分子在銀屑病患者和健康志愿者外周血中性粒細(xì)胞中的表達(dá),以及CD147siRNA干擾對(duì)中性粒細(xì)胞模型趨化功能的影響,旨在進(jìn)一步明確CD147分子在銀屑病發(fā)病機(jī)制和中性粒細(xì)胞趨化過(guò)程中的作用,為開(kāi)辟銀屑病新的研究領(lǐng)域和治療方法提供理想的靶分子。 方法 1、收集經(jīng)臨床與病理活檢確診為銀屑病患者15例以及性別和年齡相匹配的健康志愿者(Control)15例,銀屑病患者病情活動(dòng)性與嚴(yán)重程度用Psoriasis Area and Severity Index(PASI)積分來(lái)評(píng)估;抽取外周血用Ficoll密度梯度離心法分離外周血中性粒細(xì)胞,Wright-Giemsa染色和臺(tái)盼藍(lán)拒染實(shí)驗(yàn)分別鑒定細(xì)胞純度和活性; 2、分別運(yùn)用流式細(xì)胞儀和免疫印跡法檢測(cè)銀屑病患者和健康志愿者外周血中性粒細(xì)胞中CD147的表達(dá)水平;用Spearman相關(guān)性分析來(lái)評(píng)估患者PASI積分與其CD147表達(dá)間的相關(guān)性; 3、用全反式維甲酸(ATRA)誘導(dǎo)人類(lèi)急性早幼粒白血病細(xì)胞株HL-60分化為中性粒細(xì)胞(dHL-60)。顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變;流式細(xì)胞儀檢測(cè)分化標(biāo)記分子CD11b的表達(dá);MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力的變化; 4、將CD147siRNA1及CD147siRNA2分別電轉(zhuǎn)染至dHL-60細(xì)胞中,用空轉(zhuǎn)(blank)和非特異性小干擾RNA(non-specific siRNA)作為對(duì)照。采用半定量RT-PCR法和流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞中CD147的mRNA和蛋白表達(dá)水平的變化; 5、運(yùn)用Transwell系統(tǒng)檢測(cè)抑制CD147表達(dá)對(duì)中性粒細(xì)胞趨化功能的影響。 結(jié)果 1、流式細(xì)胞儀和免疫印跡結(jié)果顯示:與健康對(duì)照組相比,CD147分子在銀屑病患者外周血中性粒細(xì)胞中的表達(dá)顯著增高(P＜0.001);且CD147的表達(dá)與患者PASI積分成正相關(guān)(P＜0.05); 2、經(jīng)ATRA處理96 h后,HL-60細(xì)胞的核漿比值明顯減小,并出現(xiàn)核分葉和染色質(zhì)凝聚;CD11b分子的表達(dá)顯著增高(P＜0.001);細(xì)胞增殖能力顯著下降(P＜0.001); 3、dHL-60細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染CD147siRNA1和CD147siRNA2,其中轉(zhuǎn)染CD147siRNA1 24 h后CD147表達(dá)的抑制率最為顯著(P＜0.001);轉(zhuǎn)染48 h后恢復(fù)至接近轉(zhuǎn)染前水平(P＞0.05); 4、轉(zhuǎn)染CD147siRNA1 24 h后,dHL-60細(xì)胞向fMLP和IL-8趨化的能力顯著降低(P＜0.001)。 結(jié)論 1.復(fù)制了模擬中性粒細(xì)胞的模型,建立了針對(duì)其進(jìn)行siRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的實(shí)驗(yàn)方法; 2.銀屑病患者外周血中性粒細(xì)胞中的CD147表達(dá)增高,且CD147在中性粒細(xì)胞的趨化過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。
【圖文】：

2.3.1不同siRNA劑量的轉(zhuǎn)染效率分別電轉(zhuǎn)染非特異性熒光標(biāo)一記siRNAo、2、4、6和8林L(終濃度 <200nM)，4小時(shí)后流式細(xì)胞儀檢測(cè)中性粒細(xì)胞中陽(yáng)性熒光細(xì)胞數(shù)目，，見(jiàn)圖3a。選取轉(zhuǎn)染效率最高且低于最小細(xì)胞毒性作用的siRNA量8林L為實(shí)驗(yàn)最適劑量。1蘇 900L豁�？趖護(hù)夕，，翻q、聲)〕2368。。父

本文編號(hào)：2650600