發(fā)布時間：2020-04-25 18:25

【摘要】： 從1993～2001年，在我國的西安、湛江和長春三個地區(qū)共收集604株淋病奈瑟氏菌(NG)，對耐藥性表型、質(zhì)粒譜表型、營養(yǎng)型、PEN／TET耐藥表型以及β-內(nèi)酰胺酶表型進(jìn)行了流行病學(xué)研究。用瓊脂稀釋法測定了其對8種抗生素的最小抑菌濃度(MIC)。通過質(zhì)粒抽提和瓊脂糖凝膠電泳確定NG耐藥株的質(zhì)粒譜，并用PCR方法鑒定了部分耐藥株。使用直線相關(guān)與回歸分析、t檢驗(yàn)和χ~2檢驗(yàn)進(jìn)行耐藥相關(guān)性分析。結(jié)果顯示，全部604株中，產(chǎn)青霉素酶淋球菌(PPNG)有6株(1.0％)；116(19.2％)屬于產(chǎn)青霉素酶-質(zhì)粒介導(dǎo)四環(huán)素耐藥淋球菌(PP／TRNG)；168株(27.8％)為質(zhì)粒介導(dǎo)四環(huán)素耐藥株(TRNG)。三種喹諾酮類藥物中，環(huán)丙沙星(CIP)耐藥率最低，62％(417／604)菌株對其敏感；13.2％(80／604)的NG對壯觀霉素(SPE0耐藥；13.4％(81／604)的分離株出現(xiàn)了對頭孢三嗪(CRO)的敏感性降低，2.2％(13／604)表現(xiàn)完全耐藥。耐藥性最小抑菌濃度(MIC)相關(guān)性分析表明，CIP和氧氟沙星(OFL)、諾氟沙星(NOR)耐藥性呈正相關(guān)P＜0.05；非PPNG株，青 第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文 霉素（＊＊N）和四環(huán)素（拈T）呈負(fù)相關(guān)P＜O．0卜 阿奇霉素（A二1）與 ＊RO呈負(fù)相關(guān)P＜隊(duì)05。不同地區(qū)耐藥性分析表明，我國湛江地區(qū)對喳 諾酮類的敏感性明顯底于西安和長春地區(qū)（P＜0．05）；西安地區(qū)分離的菌 株對TET和AZI的耐藥性檢出率高于長春和湛江地區(qū)；對其他藥物的 敏感性則沒有顯著性差異。我們還分析了質(zhì)粒譜表型、營養(yǎng)型、PEN／TET 耐藥表型以及p－內(nèi)酞胺酶表型與耐藥性的關(guān)系。我們認(rèn)為過去曾廣泛使 用的某些抗生素己經(jīng)不再適用于淋病的治療：臨床常用的頭抱曲松、鐘E 及AZI的耐藥株的出應(yīng)引起重視。 為了探討DNA螺旋酶A亞單位基因（gyTA）和拓?fù)洚悩?gòu)酶IVA亞 單位基因中raC）與喳諾酮耐藥性形成的關(guān)系，，我們篩選出76株對CIP 高水平耐藥的 QMG株，通過 PCR擴(kuò)增了其中的 18株 NG的 gyTA和 praC基因喳諾酮耐藥決定區(qū)（QRDR人并對擴(kuò)增子直接測序。通過Whel 酶切、脈沖電場凝膠電泳（PFEG）分析了這些菌株的遺傳關(guān)系。結(jié)果表 明，對照組中的 18株敏感菌只有兩株發(fā)生了 gyTA的單一突變，未發(fā) 現(xiàn) praC變異。而耐藥組中 89％門）菌株的 gytA發(fā)生了 Ser習(xí)－Phe 的單一突變株和／或praC的雙突變。88．9％門5）的菌株的gyTA發(fā)生了 Ser習(xí)—Phe和 Asp95—Gly的突變。在發(fā)生 praC突變中 72％屬于 Asp86—Asn突變丁FEG分析發(fā)現(xiàn)10株具有完全一致的gyTA和PraC 突變模式。同時也發(fā)現(xiàn)來自不同地區(qū)的菌株的PFEG指紋圖是不同的。 這個研究表明，NG中國流行株對喳諾酮產(chǎn)生耐藥性與gpA和praC基 因的單一或雙重突變有著密切的關(guān)系。 NG對紅霉素和 Triton X－100的抗性，是由多重傳遞耐藥性調(diào)控基 因（mtrR）基因介導(dǎo)的、多重耐藥基因復(fù)合體（m汀CDE）編碼的外排泵 的過表達(dá)有關(guān)htrR編碼可調(diào)節(jié)m汀CDE操縱子表達(dá)的轉(zhuǎn)錄抑制劑）。 6 第四軍醫(yī)大學(xué)博土學(xué)位論文 我們?yōu)榱舜_定臨床分離株對AZI敏感性的降低是否與mtrR的變異有關(guān)。 我們選擇了 4株AZI耐藥的NG株，提取染色體DNA，PCR擴(kuò)增 mtrR 基因，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行序列分析。結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)在被檢菌3株NG在 mtrR 45位氨基酸 出現(xiàn)甘氨酸一天冬氨酸置換和 mtrR啟動子中 13hp 反向重復(fù)序列內(nèi)有一個單堿基缺失，成功地把其中的1株染色體DNA 轉(zhuǎn)化到野生型標(biāo)準(zhǔn)株，使后者出現(xiàn)mtrR啟動子突變，同時其阿奇霉素 敏感性降低了9倍；l株在mtrR啟動子中，含有一個迄今為止尚未描述 過的突變，這個突變表現(xiàn)為在13hp反向重復(fù)序列內(nèi)有一個雙核昔酸的 插入（TT）。通過轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)的方法成功地造成mud基因的插入突變，致 使 mrtDE轉(zhuǎn)錄失活，轉(zhuǎn)化子對 AZI的敏感性提高了 10倍。由此我們 認(rèn)為，mdDE轉(zhuǎn)錄阻遏物的基因（mrR）的轉(zhuǎn)錄失活的突變或抑制編 碼基因失去功能的突變，可導(dǎo)致NG過度表達(dá)mndDE外排泵，從而增 加其泵出HAs的能力。這些疏水性試劑包括染料（如結(jié)晶紫），清潔劑 （如 Tition X．100）和藥物（如紅霉素和 AZI）我們認(rèn)為，mtheDE編碼 的外排泵可識別AZI，對AZI敏感性降低的原因，至少有一部分可以被 mtrR的變異解釋。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號】：R759.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 楊曉燕,朱道銀;淋球菌質(zhì)粒及其與耐藥性關(guān)系的研究[J];中國皮膚性病學(xué)雜志;1997年03期

2 李國明,陳群,王勝春;淋球菌耐藥現(xiàn)狀與耐藥質(zhì)粒的研究[J];中國公共衛(wèi)生;2000年11期

3 秦亞恬,朱道銀;4種抗菌藥物對淋球菌體外抗菌活性的研究[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1991年02期

本文編號：2640553