【摘要】：背景:大皰性類天皰瘡(BP)是皮膚科常見的一種自身免疫性水皰病,病理特點為表皮下水皰,皮損有嗜酸性粒細胞、中性粒細胞等炎細胞浸潤和基底膜帶自身抗體和補體的沉積。自身反應(yīng)性B細胞活化后產(chǎn)生針對真表皮基底膜帶半橋�？乖�(BP180和BP230)的致病性自身抗體是BP發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。目前認為在體液免疫中,自身抗體的產(chǎn)生依賴于B細胞受到抗原刺激后,在輔助性T細胞(Th)的輔助下發(fā)生活化、增殖,進而分化為漿細胞,從而合成多種免疫球蛋白(Ig)。在自身抗體產(chǎn)生的過程中,一方面B細胞表面受體(BCR)捕獲抗原為B細胞活化提供了第一信號,另一方面Th細胞與B細胞的相互作用為B細胞的活化提供了必不可少的第二信號。與此同時,B細胞膜表面存在協(xié)同刺激分子,共同參與調(diào)控B細胞的活化。因此,探究影響B(tài)細胞活化的協(xié)同刺激分子,有助于深入解析B細胞活化和抗體生成的關(guān)鍵環(huán)節(jié),對闡明BP發(fā)病機制并探討新的治療策略具有重要意義。CD100(Semaphorin 4D)屬于信號素(Semaphorin)家族成員之一,是首個被發(fā)現(xiàn)具有免疫調(diào)節(jié)功能的信號素蛋白,為I型膜分子。CD100分子是一種細胞膜表面蛋白,全長150-kDa,可被多種蛋白水解酶剪切后從細胞膜表面脫落,形成120-kDa的游離型分子(sCD100),并且這種游離形式的CD100具有和膜型CD100同樣的生物活性。CD100的受體包括CD72,Plexin-B1和Plexin-B2,其中CD72主要表達于B淋巴細胞表面。研究表明CD72是B淋巴細胞表面重要的負向協(xié)同刺激分子之一,可通過負向調(diào)控BCR信號抑制B淋巴細胞的活化和增殖。CD100與B細胞表面的CD72結(jié)合可“關(guān)閉”CD72對BCR的抑制信號,參與B細胞活化、增殖、分化和成熟。因此我們提出如下假說:BP患者血清及皰液中的sCD100可以通過作用于B細胞表面的負向協(xié)同刺激分子CD72,促進B細胞的活化、增殖和分化,進而促進致病性自身抗體產(chǎn)生,參與BP的發(fā)生與發(fā)展。目的:1.分析BP患者血清、皰液及局部皮損中CD100的表達情況,明確CD100與BP的相關(guān)性;2.明確CD100對BP患者致病性自身抗體產(chǎn)生的作用,并闡明其具體機制。方法:1.收集BP患者血清、皰液和皮損組織,利用ELISA、Western blot、免疫組化及組織免疫熒光技術(shù)檢測CD100在BP患者血清、皰液及局部皮損中的表達情況。2.評估BP患者BPDAI評分,測定BP患者抗BP180及抗BP230的抗體滴度,作為反映患者病情活動性和嚴(yán)重程度的臨床依據(jù),進而與BP患者血清和皰液中的sCD100的濃度進行病情相關(guān)性分析。3.用不同濃度CD100重組蛋白刺激BP患者PBMC,于不同時間節(jié)點收集刺激后細胞培養(yǎng)上清,ELISA檢測細胞培養(yǎng)上清抗BP180抗體滴度,篩選CD100重組蛋白刺激PBMC產(chǎn)生抗體的最佳濃度及刺激時間;在此基礎(chǔ)上,用CD100重組蛋白最佳濃度刺激BP患者PBMC,于最佳刺激時間ELISA檢測細胞培養(yǎng)上清抗BP180及抗體BP230抗體滴度,明確CD100對BP患者致病性自身抗體產(chǎn)生的作用。4.用CD100重組蛋白刺激BP患者PBMC,離心收集細胞沉淀,流式細胞術(shù)檢測CD100刺激前后B細胞的分化情況;胞內(nèi)細胞因子染色及流式細胞術(shù)篩選CD100刺激PBMC活化的下游通路;小分子通路抑制劑驗證CD100活化B細胞的下游通路。5.收集BP患者PBMC、粒細胞、皰液細胞,流式細胞術(shù)檢測不同細胞亞群膜表面CD100表達情況,明確BP患者游離型sCD100的細胞來源;使用不同蛋白水解酶處理粒細胞,明確剪切細胞膜表面CD100的蛋白水解酶,并使用蛋白水解酶特異性抑制劑驗證其剪切功能。結(jié)果:1.BP患者血清和皰液中的sCD100水平較健康對照組顯著升高,并與BP患者的疾病嚴(yán)重程度及活動性呈正相關(guān);免疫組化、組織免疫熒光結(jié)果顯示,BP患者表皮下水皰及真皮淺層血管周圍有大量表達CD100嗜酸性粒細胞、中性粒細胞等炎細胞浸潤。2.CD100重組蛋白可誘導(dǎo)BP180~+BP230~-的患者PBMC產(chǎn)生抗BP180抗體,誘導(dǎo)BP180~+BP230~+的患者PBMC產(chǎn)生抗BP180和BP230抗體,而CD100抗體可顯著抑制CD100蛋白刺激PBMC產(chǎn)生致病性自身抗體。3.CD100重組蛋白通過Akt/NF-κB/Erk通路活化PBMC產(chǎn)生致病性自身抗體,Akt/NF-κB/Erk的小分子抑制劑可顯著抑制CD100重組蛋白刺激PBMC產(chǎn)生致病性自身抗體。4.CD100重組蛋白可刺激PBMC中CD19~+CD138~-B細胞向CD19~+CD138~+漿母細胞分化。5.BP患者血清及皰液中高水平sCD100來源于ADAM10蛋白水解酶對CD15~+粒細胞膜表面CD100的剪切。結(jié)論:在BP發(fā)病過程中,ADAM10剪切BP患者CD15~+細胞表面CD100,是BP患者血清和皰液中高水平sCD100的重要來源。升高的sCD100通過與B細胞表面CD72結(jié)合,活化Akt/NF-κB/Erk信號通路,誘導(dǎo)CD19~+CD138~-初始B細胞向具備抗體分泌功能的CD19~+CD138~+漿母細胞分化,導(dǎo)致抗BP180及抗BP230抗體的產(chǎn)生,進而引發(fā)皮膚免疫損傷。我們的研究首次發(fā)現(xiàn)BP患者血清及皰液中存在高水平的sCD100,并且明確了sCD100來源于ADAM10對CD15~+粒細胞的剪切作用,證實了CD100參與BP致病性自身抗體的產(chǎn)生。研究結(jié)果豐富了BP致病性自身抗體產(chǎn)生的免疫學(xué)機制,為探索BP新的治療策略提供理論基礎(chǔ)。
【圖文】：

類天皰瘡概述性類天皰瘡(BP)是一種常見的自身免疫性大皰性皮膚病，Lever BP 是一種不同于天皰瘡和皰疹樣皮炎的獨立性疾病[1]。BP 好統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示每年新發(fā)病例約為 2.4-42.8 例/100 萬人[2-5]。中國為 12.9%，低于歐洲的 19%—41%[6,7]。BP 臨床表現(xiàn)為水腫性紅正常皮膚或水腫性紅斑基礎(chǔ)上出現(xiàn)水皰、大皰和血皰，皰壁緊張圖 1.A）；BP 組織病理學(xué)特點為表皮下水皰形成，皰內(nèi)及真皮淺細胞為主的炎性細胞浸潤（圖1.B）；直接免疫熒光（DIF）可見基膜或）C3 呈均質(zhì)或線狀沉積（圖 1.C-D）；鹽裂間接免疫熒光（IIF者血清表現(xiàn)為抗 BMZ 的 IgG 沉積于表皮側(cè)[8]。BP 病情慢性遷患者的生活質(zhì)量和身心健康造成極大影響，但其發(fā)病機制尚未完賴于系統(tǒng)應(yīng)用糖皮質(zhì)激素和免疫抑制劑，尚缺乏特異性治療手段P 發(fā)病機制，尋找潛在的特異性治療靶點一直是學(xué)科領(lǐng)域關(guān)注的

圖 2 真表皮連接蛋白結(jié)構(gòu)（Schmidt E. Lancet, 2013）[3]理因素。目前文獻已報道的與 BP 發(fā)病相關(guān)的物理因素有紫外線（U和紫外線 A（PUVA）、放射療法，熱或電灼傷以及外科手術(shù)，這些物理接損傷 BMZ 區(qū)域的蛋白，改變該區(qū)域蛋白的正常抗原結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致致病和暴露因素，進而引起的泛發(fā)全身或僅局限于局部的皮膚免疫損傷[2染因素。有研究認為感染可以誘發(fā) BP，尤其是皰疹病毒感染，因其損大量存在，而被認為與 BP 發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。相關(guān)研究認為病毒插入宿主細胞，或病毒釋放的游離抗原與宿主細胞的蛋白碎片相融合好與宿主細胞有相似的抗原表位，以上原因可導(dǎo)致在機體暗藏的致病[24]。 自身抗原的提呈
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R758.66

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 彭安發(fā);;淺談高致病性豬藍耳病防治[J];農(nóng)民致富之友;2016年22期

2 任素芳;郭立輝;李為棟;張召坤;李興光;崔寶玉;吳家強;張玉玉;;一個豬場高致病性PRRSV的分離鑒定[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2016年12期

3 郭華生;;豬高致病性藍耳病的診斷與防治分析[J];農(nóng)業(yè)與技術(shù);2017年06期

4 鄧煒;歐陽芬;申虹;董偉;;六種致病性大腸桿菌單克隆抗體的制備[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2017年08期

5 唐海波;陳鳳蓮;饒桂波;姜佳佳;孟菲;白安斌;楊磊;吳健敏;;竹鼠源致病性雷氏普羅威登斯菌的分離鑒定[J];中國獸醫(yī)雜志;2017年07期

6 任雪楓;;高致病性豬藍耳病的防治(上)[J];農(nóng)家致富;2017年15期

7 王學(xué)英;;高致病性豬藍耳病的診斷與防治[J];當(dāng)代畜牧;2014年23期

8 王雪芳;劉以水;宋小勇;敖禮林;;高致病性豬蘭耳病及其綜合防制技術(shù)[J];農(nóng)村實用科技信息;2009年06期

9 馬曉春;;高致病性豬藍耳病的防控[J];畜牧與飼料科學(xué);2009年05期

10 鄒學(xué)剛;吳繼先;侯國帥;樊靜;趙麗娟;歐洋;鄒華;鄒智勇;;高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒引發(fā)高熱綜合征病因分析與防治措施[J];中國獸藥雜志;2007年10期

相關(guān)會議論文 前10條

1 肖一紅;馬利宏;李曉靜;邱洪凱;劉岳;于穎;劉寧寧;周恩民;;山東省高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分離與鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)病理學(xué)分會第十六次學(xué)術(shù)研討會、中國病理生理學(xué)會動物病理生理專業(yè)委員會第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

2 肖一紅;呂軍華;聶力;馬曉春;周恩民;;高致病性與傳統(tǒng)型PRRSV鑒別診斷間接ELISA方法的建立及初步應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

3 肖一紅;聶麗;楊鳳;王彤彤;王莉莉;高繼明;呂軍華;劉寧寧;劉思當(dāng);周恩民;;高致病性PRRSV對妊娠母豬致病性的研究[A];2012年中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)病理學(xué)分會暨中國病理生理學(xué)會動物病理生理專業(yè)委員會學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2012年

4 郭亞輝;郭堅華;;水稻條斑病菌保藏13年的致病性檢驗[A];中國植物病理學(xué)會2005年學(xué)術(shù)年會暨植物病理學(xué)報創(chuàng)刊50周年紀(jì)念會論文摘要集[C];2005年

5 郭亞輝;郭堅華;;水稻條斑病菌保藏13年的致病性檢驗[A];中國植物病理學(xué)會2005年學(xué)術(shù)年會暨植物病理學(xué)報創(chuàng)刊50周年紀(jì)念會論文集[C];2005年

6 陳仕龍;黃梅清;林天龍;江斌;莊向生;陳少鶯;;應(yīng)用單抗鑒別高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會第三屆豬病防控學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

7 鄭杰;寧宜寶;劉業(yè)兵;邱立新;;高致病性豬繁殖與呼吸綜合征的診斷與防制[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會第三屆豬病防控學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

8 肖燕;安同慶;田志軍;韋天超;姜一峰;周艷君;彭金美;仇華吉;童光志;;高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染后豬肺泡巨噬細胞的差異轉(zhuǎn)錄基因文庫的構(gòu)建[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第七次研討會論文集[C];2008年

9 程旭;沈欣悅;劉加圣;劉梅;徐玲霞;韋玉勇;周生;戴亞斌;;鴨源坦布蘇病毒對不同禽種的致病性初步觀察[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會禽病學(xué)分會第十六次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2012年

10 趙明軍;吳志明;閆若潛;王東方;趙雪麗;劉梅芬;;鑒別高、低致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒二重?zé)晒舛縍T-PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 李惠鈺;抗擊致病性流感 我國已做好藥物儲備[N];科學(xué)時報;2011年

2 記者 田帆;歐盟宣布暫停從加拿大進口家禽[N];新華每日電訊;2004年

3 張亞麗;H7N9病毒的高致病性分析[N];醫(yī)學(xué)參考報·災(zāi)害救援醫(yī)學(xué)頻道;2015年

4 晏國政;山西采取多種措施應(yīng)對高致病性豬藍耳疫情[N];瓜果蔬菜報.農(nóng)業(yè)信息周刊;2009年

5 晉江市動物疫病預(yù)防控制中心供稿;加強督促檢查 抓好高致病性疫病[N];福建科技報;2008年

6 ;高致病性動物病原微生物實驗室生物安全管理審批辦法[N];農(nóng)民日報;2005年

7 李慶輝 楊麗雪;嚴(yán)看死守 確保不發(fā)生疫情[N];唐山勞動日報;2006年

8 山西恒豐強動物藥業(yè)有限公司廣州公司 高懷濤;高致病性豬藍耳病的防控[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2007年

9 高彥生;馬來西亞半島發(fā)生高效致病性禽流感（續(xù)報6）[N];中國畜牧報;2004年

10 通訊員 何秉寧;我州高致病性禽流感防控工作扎實開展[N];大理日報(漢);2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 盧萌;中國Treacher Collins綜合征病例表型分析和遺傳學(xué)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2018年

2 袁靜;H9N2亞型禽流感北京燕雀分離株的致病性及傳播力研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2017年

3 張亞妮;谷胱甘肽與銅綠假單胞菌致病性及抗生素抗性的關(guān)系研究[D];西北大學(xué);2009年

4 何青;PRRSV不同致病性毒株非結(jié)構(gòu)蛋白誘導(dǎo)靶細胞細胞因子差異表達的分子基礎(chǔ)[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 徐鳳琴;高致病性PRRSV雙抗夾心ELISA抗原檢測試劑盒的研制及基因工程疫苗的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

6 袁率珍;高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒及其非結(jié)構(gòu)蛋白調(diào)控細胞凋亡的分子機制[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

7 姜一峰;高致病性豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒強弱毒毒力差異的分子基礎(chǔ)研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2012年

8 王琦;J亞群禽白血病病毒致病性增強的分子機制[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2014年

9 趙巖;Ⅳ型分泌系統(tǒng)在高致病性2型豬鏈球菌引發(fā)鏈球菌中毒性休克綜合征中作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

10 王立林;豬繁殖與呼吸綜合征病毒不同致病性毒株抑制β-干擾素表達的差異及其分子機制[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李汀;雞致病性沙門氏菌分離鑒定及毒力島核心基因多重PCR方法建立[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

2 沈盛縣;CD100促進大皰性類天皰瘡致病性自身抗體產(chǎn)生的作用及其機制研究[D];中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué);2018年

3 高嘉聰;我國部分地區(qū)PRRSV遺傳變異分析及NSP9氨基酸突變對PRRSV致病性的影響[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2018年

4 司冠;向日葵黑莖病病菌鑒定及種質(zhì)資源抗性篩選[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

5 劉優(yōu)招;香港海鷗菌感染宿主的流行病學(xué)調(diào)查、致病性及基因組序列分析[D];南方醫(yī)科大學(xué);2017年

6 李麗琴;高致病性豬藍耳病弱毒疫苗與滅活苗免疫特性的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2010年

7 郝曉芳;高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分離鑒定及分子流行病學(xué)分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2008年

8 林海云;青枯雷爾氏菌（Ralstonia solanacearum）致病性差異及其相關(guān)基因的分析[D];福建農(nóng)林大學(xué);2012年

9 趙澤坤;高致病性PRRSV的RT-PCR鑒別診斷方法的建立及應(yīng)用[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

10 白延杰;高、低致病性PRRSV的分離鑒定和二重RT-PCR鑒別診斷方法的建立及應(yīng)用[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

，

本文編號：2624660