本文關(guān)鍵詞：腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞對皮膚惡性黑素瘤生物學(xué)行為的影響及作用機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景和目的 皮膚惡性黑素瘤（cutaneous malignant melanoma，CMM）是一類惡性程度極高的皮膚腫瘤，其發(fā)病率和死亡率有逐漸上升趨勢。近3年經(jīng)我院確診的黑素瘤相關(guān)病例也明顯增多，，隨訪發(fā)現(xiàn)患者不僅預(yù)后差，生存期也較其他皮膚腫瘤明顯縮短，嚴(yán)重危害人類生命。皮膚惡性黑素瘤細(xì)胞極具早期侵襲和轉(zhuǎn)移特性，且與腫瘤轉(zhuǎn)歸差密切相關(guān)。腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程中有諸多因素和環(huán)節(jié)參與，如：機體免疫細(xì)胞、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、腫瘤微環(huán)境中各種細(xì)胞因子等。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tumor-associated macrophages，TAMs)是指浸潤于腫瘤間質(zhì)中的巨噬細(xì)胞，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，是多數(shù)實體腫瘤組織中數(shù)量最多的炎癥細(xì)胞群。然而，TAMs在腫瘤侵襲進展中的作用及機制目前尚存爭議。不同研究提示，TAMs可能兼有促進或抑制腫瘤細(xì)胞生長的雙重作用。TAMs在腫瘤中進展中的作用可能受其分布、數(shù)量和表型三方面的影響，其中表型差異可能是影響腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素。研究者根據(jù)巨噬細(xì)胞激活途徑及激活后作用的不同將其分為兩類：經(jīng)干擾素-γ（Interferon-γ，INF-γ）及細(xì)菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）等激活的巨噬細(xì)胞稱為經(jīng)典激活的巨噬細(xì)胞（classical activated macrophage， caMφ或M1)，為一類“抑癌細(xì)胞”；經(jīng)白介素-4（interleukin-4，IL-4)，白介素-13（interleukin-13，IL-13)等激活的巨噬細(xì)胞稱為替代激活的巨噬細(xì)胞(alternative activated macrophage，aaMφ或M2)，為一類“促癌細(xì)胞”。TAMs在黑素瘤細(xì)胞侵襲進展中的作用和影響機制目前尚不明確，值得進一步研究。近年來隨著對腫瘤細(xì)胞間信號通路在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的影響有了更多了解，人們發(fā)現(xiàn)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子3（Signaltransducer and activator of transcription，STAT3）是STATs家族的重要成員，是多種致癌途徑的焦點，參與調(diào)控相關(guān)靶基因的表達，其中就包括了血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）。有研究表明VEGF是最重要的血管生成因子,可直接由STAT3信號通路調(diào)控，促進腫瘤新生血管的生成，是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞遠(yuǎn)處侵襲轉(zhuǎn)移的重要因素之一。TAMs對惡性黑素瘤的發(fā)生和發(fā)展具有重要作用，TAMs是否通過調(diào)節(jié)惡性黑素瘤中蛋白如STAT3、VEGF的表達，對惡性黑素瘤細(xì)胞的各種生物學(xué)行為造成影響，值得我們進一步探究。 在本實驗中，我們主要采用佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate，PMA)在體外成功誘導(dǎo)成巨噬細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測CD68的表達；隨后分別用LPS、IL-4刺激成M1型和M2型巨噬細(xì)胞，ELISA法檢測IL-12p70和IL-10表達水平；建立巨噬細(xì)胞與惡性黑素瘤A375細(xì)胞體外共培養(yǎng)體系，分別運用MTT法、Transwell小室法觀察不同激活途徑的巨噬細(xì)胞對A375細(xì)胞增殖、侵襲、遷移等生物學(xué)行為的影響；采用免疫組化法檢測CMM組織中CD68（標(biāo)記TAMs）及VEGF、STAT3蛋白的表達情況，并分析其與臨床病理特征之間的關(guān)系，進一步明確TAMs在CMM侵襲、轉(zhuǎn)移中的作用，探討其可能的作用機制。 方法 1巨噬細(xì)胞的誘導(dǎo)及表型鑒定 采用PMA將人單核細(xì)胞株U937誘導(dǎo)為巨噬細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測巨噬細(xì)胞CD68的表達情況；分別采用細(xì)胞因子LPS和IL-4誘導(dǎo)為M1和M2型巨噬細(xì)胞，ELISA法檢測M1和M2型巨噬細(xì)胞IL-12p70和IL-10表達水平。 2TAMs對人惡性黑素瘤細(xì)胞A375生物學(xué)行為的影響 將處于對數(shù)生長期的A375細(xì)胞接種于Transwell培養(yǎng)板（濾膜孔徑0.4μm）下層小室中孵育24h；將不同激活途徑的巨噬細(xì)胞與接種于Transwell小室（濾膜孔徑0.4μm）上層小室，建立體外共培養(yǎng)體系，每24小時采用MTT法檢測A375細(xì)胞增殖情況，共3天；將與不同激活途徑的巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)48小時后的A375細(xì)胞用無血清培養(yǎng)基重懸，接種于Transwell小室（濾膜孔徑8μm）的上室面培養(yǎng)24小時，觀察濾膜下表面藍(lán)紫色胞漿的細(xì)胞，檢測不同激活途徑的巨噬細(xì)胞對A375細(xì)胞侵襲力和遷移力的影響。 3TAMs在皮膚惡性黑素瘤中的浸潤及與STAT3、VEGF蛋白表達間的關(guān)系 采用免疫組化法分別檢測CMM組織和色素痣組織中CD68（標(biāo)記TAMs）及VEGF、STAT3蛋白的表達情況，并分析其與臨床病理特征之間的關(guān)系。 結(jié)果 1巨噬細(xì)胞的誘導(dǎo)及表型鑒定 1) PMA誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞經(jīng)流式檢測表達巨噬細(xì)胞抗原CD68。 2) LPS及IL-4激活后的巨噬細(xì)胞分別表現(xiàn)為IL-12p70~(high)IL-10~(low)和IL-12p70~(low)IL-10~(high)，表明M1型和M2型巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)成功。 3) PMA誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞（Mφ）IL-12p70、IL-10的分泌水平與M2型巨噬細(xì)胞更為接近。 2TAMs對人惡性黑素瘤細(xì)胞A375生物學(xué)行為的影響 1) IL-4激活的M2型巨噬細(xì)胞促進A375細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移；LPS激活的M1型巨噬細(xì)胞抑制A375細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移。 2) PMA誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞（Mφ）更傾向于M2細(xì)胞的表型，對A375細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移起促進作用。 3TAMs在皮膚惡性黑素瘤中的浸潤及與STAT3、VEGF蛋白表達間的關(guān)系 1) CMM組織中TAMs浸潤與STAT3、VEGF蛋白的表達密切相關(guān)，且三者均與Clark分級和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。 2) TAMs可能通過調(diào)節(jié)STAT3、VEGF蛋白的表達，對CMM的發(fā)生和發(fā)展起促進作用，有望為CMM的靶向性治療提供新思路。 結(jié)論 巨噬細(xì)胞可以在體外被成功誘導(dǎo)激活成不同表型，為巨噬細(xì)胞體外相關(guān)性研究帶來了可能。M2型巨噬細(xì)胞促進A375細(xì)胞增殖、侵襲和遷移，起“促癌”作用，而M1型巨噬細(xì)胞則起相反作用。CMM組織中TAMs浸潤與STAT3、VEGF蛋白的表達密切相關(guān)，且三者均與Clark分級和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。TAMs可能通過調(diào)節(jié)STAT3、VEGF蛋白的表達，對CMM的發(fā)生和發(fā)展起促進作用，有望成為CMM的靶向性治療提供新思路。我們推測：在惡性黑素瘤組織中TAMs可能主要是以替代激活的M2型巨噬細(xì)胞表型存在，起“促癌”作用；TAMs可能通過上調(diào)STAT3、VEGF蛋白的表達，促進CMM的侵襲和轉(zhuǎn)移。
【關(guān)鍵詞】：皮膚惡性黑素瘤 腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞 STAT3 VEGF 侵襲
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R739.5
【目錄】：

• 英文縮略語注釋7-8
• 摘要8-12
• Abstract12-17
• 前言17-21
• 第一部分 巨噬細(xì)胞的體外誘導(dǎo)及表型鑒定21-32
• 引言21
• 材料與方法21-26
• 結(jié)果26-29
• 討論29-31
• 第一部分小結(jié)31-32
• 第二部分 TAMs 對人惡性黑素瘤細(xì)胞 A375 生物學(xué)行為的影響32-44
• 引言32
• 材料與方法32-37
• 結(jié)果37-40
• 討論40-43
• 第二部分小結(jié)43-44
• 第三部分 TAMs 在皮膚惡性黑素瘤中的浸潤及與 STAT3、VEGF 蛋白表達間的關(guān)系44-55
• 引言44
• 材料與方法44-48
• 結(jié)果48-51
• 討論51-54
• 第三部分小結(jié)54-55
• 全文小結(jié)55-57
• 參考文獻57-65
• 綜述65-74
• 參考文獻71-74
• 附錄74-76
• 致謝76

【參考文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞對皮膚惡性黑素瘤生物學(xué)行為的影響及作用機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：260632