【摘要】：目的 針對皮膚中轉(zhuǎn)錄因子核因子-κB(NF-κB)對角質(zhì)形成細胞增殖所具有的調(diào)控作用，對幾種抗銀屑病藥物的抗增殖活性與NF-κB信號途徑之間的關(guān)系進行了探討，為進一步揭示相關(guān)藥物的作用機制，及為研制新的抗銀屑病藥物提供依據(jù)；同時評價抗銀屑病藥物中某些抑制NF-κB的藥物和活化NF-κB的藥物共同作用時在作用機制和療效方面的相互影響，檢測兩者是否存在協(xié)同作用或者潛在的拮抗作用，為NF-κB是否能作為抗銀屑病的靶位提供一些線索，也為臨床應(yīng)用提供參考。 方法 選取良性永生化角質(zhì)形成細胞株HaCaT作為研究對象，經(jīng)受試藥物處理后，提取所需胞漿和胞核蛋白，采用蛋白印跡法檢測胞漿中NF-κB抑制蛋白α(IκBα)表達量的改變，凝膠遷移阻滯試驗(EMSA)測定胞核中NF-κB與DNA特異性序列結(jié)合活性的變化，以此反映藥物對NF-κB信號途徑的影響。使用四唑鹽比色實驗(MTT)檢測光吸收度的改變，反映相對活細胞數(shù)，作出細胞一周內(nèi)的生長曲線，顯示藥物對細胞生長和增殖的影響。RT-PCR檢測藥物對HaCaT細胞炎癥因子IL-8和ICAM-1mRNA表達的影響。所檢測的藥物包括對NF-κB具有活化作用的藥物如地蒽酚(ATL)以及對NF-κB活化具有抑制作用的藥物如來氟米特(Lf)和雷公藤內(nèi)酯醇(T_0)，并選取水楊酸鈉(NaSal)作為抑制NF-κB活化的陽性對照藥物。 結(jié)果Ⅰ．外用抗銀屑病藥物ATL對角質(zhì)形成細胞HaCaT株IκBα的降解具有促進作用，并呈劑量依賴性，IC_(50)值約為13.8μM，與之相應(yīng)的是，，進一步實驗表明ATL對NF-κB與DNA的結(jié)合活性亦具有增強作用；Lf、T_0則對HaCaT細胞株IκBα蛋白的降解和NF-κB與DNA的結(jié)合活性均沒有影響。Ⅱ．進一步的實驗結(jié)果表明Lf、T_0以及陽性對照藥物NaSal均可抑制ATL對NF-κB信號途徑的活化作用，包括抑制ATL促進IκBα降解的作用以及抑制ATL對NF-κB與DNA結(jié)合活性的增強作用，并呈劑量依賴性，IC_(50)值分別約為9.68βM和8.95×10~1nM。ATL、Lf、T_0和NaSal抑制HaCaT細胞活性的IC_(50)值分別約為5.26×10~(-5)M、1.13×10~(-3)M、1.59×10~(-6)M和1.06×10~(-2)M，所選定的待測濃度分別為20μM、20μM、0.2μM和1mM，均在各藥物和化合物的IC_(50)值以下。在待測濃度的各藥物和化合物作用下，6天內(nèi)細胞的生長曲線與無藥對照組相比，存在不同程度的下降趨勢，表明HaCaT細胞的增殖活性受到了不同程度的抑制；然而在使用Lf或T_0抑制ATL對NF-κB信號途徑的活化后，并沒有
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R758.63

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前5條

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本文編號：2604018