發(fā)布時(shí)間：2020-03-21 17:15

【摘要】：隨著社會(huì)的發(fā)展,人們?cè)絹碓阶非笞陨淼慕】岛屯昝?擁有黑亮的頭發(fā)是許多人所渴望的,而白發(fā)脫發(fā)作為影響外表的最常見的原因之一,往往給患者帶來精神上的很大煩惱。據(jù)文獻(xiàn)記載,傳統(tǒng)中藥何首烏具有烏須發(fā)、延年益壽的功效。黑色素產(chǎn)生于皮膚的黑色素細(xì)胞,其生物合成過程需多種酶介導(dǎo),酪氨酸酶是其中重要的酶,它能夠?qū)⒗野彼嵫趸癁槎喟?DoPA),進(jìn)一步氧化成多巴醌(DoPA quinone),在別的酶的催化下氧化聚合成黑色素。 本文以小鼠B16F1黑素瘤細(xì)胞為材料,以不同終濃度的何首烏水提取液處理細(xì)胞,分別為0mg/ml、0.1mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml。采用MTT法、體外氧化L-多巴反應(yīng)法、NaOH法分別檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞增殖、細(xì)胞中酪氨酸酶活性、細(xì)胞中黑素生成量的影響;采用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)的方法檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞中酪氨酸酶基因、酪氨酸酶相關(guān)蛋白-1(TRP-l)基因、酪氨酸酶相關(guān)蛋白-2(TRP-2)基因及MITF基因mRNA表達(dá)的影響;采用Western blot免疫印跡法檢測(cè)其對(duì)上述四種基因的蛋白質(zhì)表達(dá)的影響。研究發(fā)現(xiàn),何首烏水提取物能夠激活B16F1黑素瘤細(xì)胞中酪氨酸酶的活性,并增加黑色素的合成量,同時(shí)還具有促進(jìn)黑素細(xì)胞增殖的作用。何首烏水提取物可以提高上述黑色素合成相關(guān)的四種基因及其蛋白質(zhì)的表達(dá)量。而且,從結(jié)果可以看出,在0—1mg/ml的濃度范圍內(nèi),隨著何首烏水提取物濃度增大,細(xì)胞增殖、酪氨酸酶的活性和基因表達(dá)、蛋白質(zhì)表達(dá)也會(huì)隨之上調(diào)。通過實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn):何首烏水提液促進(jìn)黑素瘤細(xì)胞生成黑素作用的可能機(jī)制之一是它能夠在基因轉(zhuǎn)錄和翻譯水平促進(jìn)黑素合成相關(guān)基因mRNA的表達(dá)。 本文運(yùn)用水提法提取何首烏中烏發(fā)有效成分,從細(xì)胞和分子水平驗(yàn)證何首烏烏發(fā)的作用機(jī)理。為深入探討何首烏的促黑素生成功能及更詳細(xì)的機(jī)理、進(jìn)一步研究何首烏的藥理提供了理論基礎(chǔ)。為傳統(tǒng)中藥的現(xiàn)代化功效評(píng)價(jià)提供了有力的參考證據(jù)。
【圖文】：

圖 1.1 二苯乙烯苷結(jié)構(gòu)式Fig.1.1 Structure of stilbene glycoside根據(jù)以往的參考文獻(xiàn)得知，二苯乙烯苷具有多種生理活性，，作為抗衰老的非常有研究的價(jià)值。日本的 Hata[ 10 ]在 1975 年第一次從何首烏中分離測(cè)定出二苯乙烯苷組分。 80 年代開始，國(guó)內(nèi)中醫(yī)界逐漸對(duì)何首烏中這一水溶性組分表示關(guān)注。到目二苯乙烯苷主要還是采用萃取、柱層析這樣的手段來分離。邊秀娟[ 11 ]對(duì) Ha

圖 1.2 黑色素的合成機(jī)制Fig.1.2 The mechanism of melanin biosynthesis in the melanocyte.1.4.2 黑素生成的調(diào)節(jié)的相關(guān)細(xì)胞因子和信號(hào)途徑在黑素生成過程中，調(diào)節(jié)黑素合成的速度和黑素種類的因素有很多：體內(nèi)的多種激素、細(xì)胞因子、無機(jī)離子及黑素細(xì)胞周圍環(huán)境的物理化學(xué)性質(zhì)改變，它們是共同發(fā)揮作用的。而酪氨酸酶則是其中最重要的決定黑色素合成的因素。酪氨酸酶是一種氧化還原酶，它結(jié)構(gòu)復(fù)雜且含有銅離子，具多個(gè)亞基。TYE 首先催化 L-酪氨酸羥基化生成 L-多巴，然后使 L-多巴氧化生成多巴醌，因此是一種具雙重催化作用的酶。多巴醌經(jīng)一系列反應(yīng)后，生成由 5,6-二羥吲哚和 5,6-二羥吲哚-羧酸單元一起構(gòu)成的異聚體-黑色素。酪氨酸酶是黑色素生成的主要限速酶，它的表達(dá)和活性對(duì)黑素生成的速度和產(chǎn)量有決定作用[ 27,28 ]。新合成的酪氨酸酶是沒有催化活性的，它結(jié)合上一個(gè)-30kD 的蛋白質(zhì)之后，就變成了一個(gè)異源二聚體復(fù)合物，加入
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R285.5;R739.5

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4 白明慧;聯(lián)鄰苯二酚結(jié)構(gòu)的DNA交聯(lián)劑的設(shè)計(jì)合成研究及其對(duì)黑素腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷作用[D];武漢大學(xué);2011年

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本文編號(hào)：2593663