【摘要】： 目的 1、構(gòu)建紫外線致小鼠皮膚癌模型,為進一步研究皮膚癌的防治方法和機制提供可靠的動物模型。 2、建立有關(guān)ALA-PDT預(yù)防SKH-1無毛小鼠皮膚癌的最佳治療參數(shù),如最適的照光時間點、ALA濃度以及照光劑量等。 3、探討ALA-PDT對紫外線致小鼠皮膚癌的預(yù)防作用。 4、研究ALA-PDT預(yù)防SKH-1無毛小鼠皮膚癌的機理,探討線粒體凋亡途徑與皮膚癌延遲發(fā)生的關(guān)系。 方法 1、連續(xù)28周的日光紫外線照射建立SKH-1無毛小鼠皮膚鱗癌模型,觀察腫瘤生長情況及其組織病理學(xué)改變。 2、采用熒光光譜儀測定5%ALA敷藥后SKH-1無毛小鼠不同時間點PpIX的熒光強度峰值并繪制曲線圖,明確最適治療時間點。小鼠分為2%、5%、10% 3個ALA濃度組進行敷藥(n=3),3h后將3組小鼠背部皮膚分為四個區(qū)域,分別給予0.6J/cm2、1.2 J/cm2、1.8 J/cm2和2.4 J/cm2紅光照射,24h后觀察局部反應(yīng),以尋找最適濃度、紅光劑量等。 3、雌性SKH-1小鼠(n=100)隨機分為UV(n=30)組、UV/ALA-PDT組(n=30)、ALA-PDT對照組(n=30)和空白對照組(n=10),即A、B、C、D組。實驗開始后每隔4周稱重、測量皮褶厚度。第10周開始觀察各組腫瘤發(fā)生情況,計數(shù)腫瘤數(shù)目并測量直徑,連續(xù)觀察28周。 4、利用Western blot技術(shù)研究ALA-PDT對腫瘤模型小鼠caspase-9\3和cytochrome c表達的影響。 結(jié)果 1、UV照射第1周,小鼠皮膚出現(xiàn)紅斑伴脫屑。照射8周皮膚明顯增厚。連續(xù)照射12周后,陸續(xù)出現(xiàn)針頭大小丘疹,以后逐漸增大呈菜花樣皮損。所有丘疹和腫瘤病理檢查結(jié)果均具有SCC特征。2、荷瘤小鼠皮膚的熒光強度在3h最高;小鼠皮膚在不同濃度ALA霜劑-PDT 后的反應(yīng)未見明顯差異;隨著紅光照射時間的延長(光劑量增加),小鼠皮膚損傷程度加重,選擇小鼠能夠承受的1.2 J/cm2作為本研究的照光劑量。 3、與D組比較,A、B組從第4周開始皮褶厚度明顯增加(P0.05),12周開始體重顯著減輕(P0.05)。A、B組間和C、D組間體重和皮褶厚度的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。首個丘疹(病理證實為AK)于第12周在A組出現(xiàn),B組首個丘疹較A組晚2周出現(xiàn)。無瘤生存率中位數(shù)A組為24周,B組為21周,兩組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。從12周開始,B組小鼠平均丘疹數(shù)目較A組少(P0.05),而A、B兩組腫瘤體積沒有顯著性差異(P0.05)。同時觀察到C組皮膚較D組細嫩的現(xiàn)象。 4、半定量比較Western blot結(jié)果,發(fā)現(xiàn)ALA-PDT后釋放的細胞色素c以及caspase-9和caspase-3及其活化片段的蛋白表達量明顯上調(diào),在治療后3h作用達到高峰。 結(jié)論 1、日光紫外線長期照射可以建立穩(wěn)定的SKH-1無毛小鼠皮膚鱗癌模型,肉眼觀察結(jié)合組織學(xué)分析進一步說明SKH-1無毛小鼠SCC的演變過程。 2、ALA-PDT預(yù)防SKH-1無毛小鼠SCC發(fā)生的最佳封包時間3h、最佳ALA濃度2% ALA和最佳光劑量1.2J/cm2。 3、證實每周一次ALA-PDT明顯延緩皮膚癌出現(xiàn),減少腫瘤的數(shù)目,但是對腫瘤體積無明顯抑制作用。 4、ALA-PDT通過活化線粒體途徑誘導(dǎo)SKH-1無毛小鼠腫瘤細胞凋亡,可能是其預(yù)防皮膚鱗狀細胞癌的作用機制。
【圖文】：

首個新生物呈帽針尖至粟粒大小的丘疹（圖 1-1 C），或者在質(zhì)地較硬的斑塊基礎(chǔ)上出現(xiàn)彌漫性丘疹（圖1-1 A），隨后丘疹生長迅速，角化明顯，逐漸形成菜花樣瘤體（圖 1-1 D）。隨著實驗的進展，荷瘤小鼠的瘤體數(shù)目也逐漸增多（圖 1-1 B），但僅限背部暴露于 UV的區(qū)域。19 周開始 UV 組中 33.3%的小鼠（6/18）出現(xiàn)腫瘤。21 周 UV 組有 2 只小鼠意外死亡。照射 28 周后 UV 組剩余 16 只中每只小鼠都至少產(chǎn)生一個腫瘤，成瘤率達 100%，部分小鼠出現(xiàn)直徑＞10mm 的腫瘤。28 周實驗結(jié)束時，UV 組剩余 16 只小鼠的腫瘤數(shù)目共計 131 個。其中 8 個腫瘤生長迅速，常常在 1 周內(nèi)達到4-5mm 直徑

光源為 405nm 的藍光，每小時記錄 Pp測 1~12h 以及第 24h 的熒光變化。據(jù)此光時間點。b) ALA 濃度和光劑量的選擇隨機選擇 9 只正常雌性小鼠（6-8 周物濃度組（n=3），相應(yīng)濃度 ALA 霜劑均包。3 小時后小鼠經(jīng) 7%水合氯醛麻醉，0.6J/cm2、1.2 J/cm2、1.8 J/cm2和 2.4 J/c余部遮蓋，，肉眼觀察四個劑量下的皮膚痂的最小光毒量（minimal photoxic dose2.2 結(jié)果2.2.1 不同時點 PpIX 熒光強度隨著 ALA 封包時間的延長，PpIX20
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R739.5

【參考文獻】

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本文編號：2583912