【摘要】：目的探討肉桂醛對UVA照射后體外皮膚成纖維細(xì)胞表達(dá)基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-3(MMP-3)和絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)的影響。方法皮膚成纖維細(xì)胞在體外培養(yǎng)后,在培養(yǎng)基中加入不同濃度(0,5,10,20和40μM)肉桂醛,24h后MTT法檢測細(xì)胞活性。皮膚成纖維細(xì)胞經(jīng)肉桂醛預(yù)處理24h后再予UVA照射,Western blot法檢測MMP-1,MMP-3,ERK,JNK,p38磷酸化蛋白水平。結(jié)果 0~40μM肉桂醛對成纖維細(xì)胞的活性無明顯影響(P均0.05)。肉桂醛能抑制UVA照射后成纖維細(xì)胞MAPK信號蛋白ERK,JNK,p38的活化,其也能抑制成纖維細(xì)胞表達(dá)MMP-1和MMP-3,且各濃度間作用差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05)。結(jié)論肉桂醛可能通過抑制UVA照射后成纖維細(xì)胞MAPK信號蛋白的活化來抑制MMP-1和MMP-3的表達(dá),減少膠原降解,延緩皮膚光老化。
【圖文】：

?MMP-3水平成纖維細(xì)胞處理和UVA照射同1．2．4，UVA照射24h后提取細(xì)胞蛋白，定量后－70℃保存。蛋白樣品變性后上樣、電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉，參照說明書加入抗人MMP-1和MMP-3一抗、二抗孵育，行蛋白顯影和水平檢測。1．3統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS20．0軟件進行分析，各組數(shù)據(jù)以(x±s)表示，UVA作用前、后比較采用t檢驗，不同濃度肉桂醛作用組間比較采用方差分析，P＜0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2結(jié)果2．1肉桂醛對成纖維細(xì)胞生長活性的影響5～40μΜ的肉桂醛作用后，成纖維細(xì)胞生長良好，形態(tài)正常，其生長活性未受到明顯影響(圖1)，各濃度間其生長活性差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(F=1．025，P均＞0．05)。圖1肉桂醛對成纖維細(xì)胞生長活性的影響Fig．1Theeffectofcinnamicaldehydeonprolifera-tiveactivityoffibroblasts2．2肉桂醛對UVA照射后成纖維細(xì)胞MAPK信號蛋白水平的影響UVA照射后，成纖維細(xì)胞內(nèi)p-JNK(t=15．875，P＜0．01)，p-EＲK(t=15．448，P＜0．01)和p-p38(t=16．742，P＜0．01)表達(dá)均較照射前顯著增強，但經(jīng)肉桂醛預(yù)處理后再予UVA照射，成纖維細(xì)胞內(nèi)上述MAPK信號蛋白磷酸化減弱(圖2)，肉桂醛濃度為10μΜ時，p-EＲK，p-JNK和p-p38表達(dá)強度均顯著降低。隨肉桂醛濃度增高，表達(dá)強度逐漸降低，各濃度間p-JNK(F=67．648，P均＜0．05)，p-EＲK(F=58．919，P均＜0．05)和p-p38(F=84．946，，P均＜0．05)的水平具有濃度依賴效應(yīng)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(圖3)。2．3肉桂醛對UVA照射后成纖維細(xì)胞表達(dá)MMP-1和MMP-3的影響UVA照射后，成纖維細(xì)胞MMP-1(t=6．155，P＜0．01)和MMP-3(t=8．239，P＜0．01)表達(dá)均顯著增強，但經(jīng)肉桂醛預(yù)處理后再予UVA照射，成纖維細(xì)胞MMP-1和MMP-3表達(dá)減弱(圖4)，肉桂醛濃度為5μM時，MMP-3表達(dá)即開始減弱。肉桂醛濃度為1

#:comparedto0μMgroupP＜0．01;*:comparedtoUVA+0μMgroupP＜0．05圖2肉桂醛作用后成纖維細(xì)胞MAPK信號蛋白的磷酸化;圖3肉桂醛對成纖維細(xì)胞MAPK信號蛋白磷酸化的影響Fig．2ThephosphorylationlevelofMAPKsignalinfibroblastsaftertreatedwithcinnamicaldehydefor24h;Fig．3TheeffectofcinnamicaldehydeonthephosphorylationlevelofMAPKsignalinfibroblasts#:comparedto0μMgroupP＜0．01;*:comparedtoUVA+0μMgroupP＜0．05圖4肉桂醛作用后成纖維細(xì)胞MMP-1和MMP-3蛋白水平;圖5肉桂醛對成纖維細(xì)胞MMP-1和MMP-3蛋白水平的影響Fig．4TheMMP-1andMMP-3expressionoffibroblastsaftertreatedwithcinnamicaldehydefor24h;Fig．5TheeffectofcinnamicTheeffectofcinnamicaldeydeonMMP-1andMMP-3expressionoffibroblasts3討論UVA能穿透表皮，作用于真皮的膠原纖維和彈力纖維，在皮膚光老化進程中起著重要作用。UVA照射后引起相關(guān)信號傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄因子的活化，進而降解膠原和抑制膠原蛋白的合成，是UVA照射導(dǎo)致皮膚光老化的主要機制之一。成纖維細(xì)胞是UVA照射的主要效應(yīng)細(xì)胞，予UVA照射后，氧化應(yīng)激使真皮成纖維細(xì)胞損傷的同時，能促進相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，活化相關(guān)MMP，降解真皮中的Ⅰ型和Ⅲ型膠原［5］，使膠原變性崩解，排列紊亂，造成皮膚皺紋加深和彈性喪失等。MAPK信號通路是細(xì)胞外信號引起細(xì)胞核反應(yīng)的共同通路，在基因表達(dá)調(diào)控和細(xì)胞質(zhì)功能活動中發(fā)揮關(guān)鍵作用，主要包括EＲK，JNK和p38通路。研究發(fā)現(xiàn)UVA照射可以通過活化這3條通路作用于成纖維細(xì)胞，最終造成膠原降解［6-7］。本研究發(fā)現(xiàn)UVA照射后成纖維細(xì)胞內(nèi)p-EＲK，p-JNK和p-p38的蛋白水平較照射前顯著增高，說明UVA照射能促進成纖維細(xì)胞內(nèi)MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)蛋白增加。MMP-1和MMP-3是皮

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3 黃勤,張家慶,鄒大進;人眼球后和其它部位成纖維細(xì)胞的差異[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2001年01期

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