【摘要】：第一部分先天性角化不良基因突變研究 先天性角化不良(dyskeratosis congenita, DC)是一種少見(jiàn)的具有臨床特征和遺傳異質(zhì)性的遺傳綜合征。其典型臨床表現(xiàn)為皮膚粘膜三聯(lián)征：甲營(yíng)養(yǎng)不良、口腔粘膜白斑、網(wǎng)狀色素沉著。除上述表現(xiàn)外,本病尚有骨髓衰竭、再生障礙性貧血、肺纖維化、腫瘤易感性等。DC患者一般幼年起病,80%以上DC患者在30歲之前表現(xiàn)為骨髓衰竭,此為DC最主要的死亡原因。Hoyeraal-Hreidarsson(HH)綜合征為DKC1突變DC的一種嚴(yán)重表型,臨床特點(diǎn)為再生障礙性貧血、免疫功能缺陷、小頭顱、小腦發(fā)育不全、生長(zhǎng)遲緩等。目前已發(fā)現(xiàn)DC有三種遺傳方式：X-連鎖隱性遺傳、常染色體顯性遺傳、常染色隱性遺傳；但目前仍約有50%患者遺傳特性不明確。其中以第一種遺傳方式最為多見(jiàn),致病基因?yàn)镈KC1,位于Xq28。 DKC1基因編碼角化不良蛋白(dyskerin),此蛋白為核仁蛋白,包含514個(gè)氨基酸,是snoRNAs口端粒酶復(fù)合體的必要結(jié)構(gòu)成分。DKC1基因包含15個(gè)外顯子,總長(zhǎng)度為15kb。X連鎖隱性遺傳DC主要是因DKC1(?)義突變所致。以小鼠為研究對(duì)象定向裂解DKC1基因可導(dǎo)致小鼠胚胎死亡。11號(hào)外顯子的p.A353V是一個(gè)突變熱點(diǎn),為1058位核苷酸的CT錯(cuò)義突變,約30%X連鎖隱性遺傳DC男性患者可檢測(cè)到p.A353V突變。端粒酶包括端粒酶RNA (TERC)和端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(TERT)。在常染色體顯性遺傳DC和骨髓衰竭、再生障礙性貧血患者發(fā)現(xiàn)TERC和TERT雜合子突變。TERC和TERT均可導(dǎo)致端粒酶功能障礙和端�？s短。我們收集的一個(gè)DC家系的20名家系成員中2人為患者。先證者為16歲男性,自4歲起頸部、前胸、四肢末端出現(xiàn)網(wǎng)狀色素沉著。體格檢查：典型的舌粘膜白斑,軀干、四肢異常色素沉著,雙手足甲板萎縮變薄。血常規(guī)、胃鏡、胸片、心電圖、骨髓涂片及骨髓病理均未見(jiàn)明顯異常。根據(jù)其皮膚黏膜三聯(lián)征確診為DC。此家系中2個(gè)患者均為男性,父母無(wú)任何臨床表現(xiàn),根據(jù)遺傳信息考慮X連鎖隱性遺傳可能性大,故選擇DKC1進(jìn)行基因突變篩查。抽取患者和家系中健康成員、健康對(duì)照50例外周血4m1,提取DNA。采用Oligo6.0軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì)。對(duì)DKC1基因15個(gè)外顯子及側(cè)翼進(jìn)行PCR擴(kuò)增及DNA測(cè)序。結(jié)果表明在DKC1基因第12號(hào)外顯子中發(fā)現(xiàn)一個(gè)新的突變位點(diǎn)：c.1192C＞G (p.L398V)。兩患者均表現(xiàn)為此位點(diǎn)的突變,母親為同一位點(diǎn)的雜合突變,家系中正常人和健康對(duì)照組未發(fā)現(xiàn)此突變。 第二部分先天性角化不良患者端粒長(zhǎng)度測(cè)量 在1999年,Mitchell JR發(fā)現(xiàn)DC細(xì)胞端粒酶RNA水平下降,導(dǎo)致端粒酶活性降低和端粒的縮短。DC發(fā)病機(jī)制可能為端粒酶功能的缺陷導(dǎo)致端粒長(zhǎng)度維持的受損,這樣限制了上皮和血液中未分化干細(xì)胞的增殖能力。Dyskerin不僅是snoRNAs成分,而且是端粒酶RNA所必需。Dyskerin突變可減少端粒酶RNA蓄積,降低端粒酶RNA活性,導(dǎo)致端粒酶無(wú)法維持端粒長(zhǎng)度。端粒酶復(fù)合體(TERC、TERT, NHP2, NOP10)和shelterin(TINF2)中多個(gè)基因的突變均可導(dǎo)致端粒的縮短。近10年的部分研究表明DC的主要致病原因?yàn)槎肆５貌坏奖Ｗo(hù)和維持。DKC1和TINF2突變患者較TERC和TERT突變患者發(fā)病早且臨床表現(xiàn)多樣,但這兩組之間端粒長(zhǎng)度無(wú)明顯差別。此外,一些遺傳特性不明確的DC患者端粒長(zhǎng)度也未見(jiàn)縮短。DC與端粒之間的關(guān)系仍不明確�；蛲蛔兒投肆？s短難以解釋DC臨床表現(xiàn)異質(zhì)性。為此,我們研究一X連鎖先天性角化不良家系患者端粒長(zhǎng)度與臨床表型輕重關(guān)系。實(shí)驗(yàn)對(duì)象分三組：DC患者、DC家系正常人以及健康對(duì)照組。采用熒光定量PCR方法,對(duì)所有研究對(duì)象進(jìn)行端粒長(zhǎng)度測(cè)量。本研究選取單拷貝基因3684為內(nèi)參基因,其編碼酸性核糖體磷蛋白,位于第12染色體。端粒(T)和單拷貝基因(S)分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增。對(duì)每個(gè)研究對(duì)象均進(jìn)行多次T/S測(cè)量,T/S平均相對(duì)比值即為每個(gè)研究對(duì)象相對(duì)端粒長(zhǎng)度。此外我們對(duì)患者體格檢查、血液系統(tǒng)及肺功能檢查等�；颊叨肆ｉL(zhǎng)度與家系中正常人及正常對(duì)照組相比均無(wú)明顯縮短。DC家系中正常人與健康對(duì)照組結(jié)果進(jìn)行兩樣本間的t檢驗(yàn)；此兩組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=0.847,P=0.412)。最后結(jié)果表明此家系DC患者端粒長(zhǎng)度與正常對(duì)照組相比無(wú)明顯差異。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R758.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 常小麗;王培光;張學(xué)軍;楊森;;先天性角化不良1例[J];中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志;2006年01期

2 王建琴;王漢平;吳玉才;謝健晉;許志萍;許劍榮;孫廣政;方瑞華;毛平;曾仁山;;先天性角化不良的一個(gè)新的基因突變[J];中華皮膚科雜志;2006年06期

3 王愛(ài)平;陳喜雪;朱學(xué)駿;李冠群;張國(guó)軍;郝春梅;;先天性角化不良一例[J];中華皮膚科雜志;1998年06期

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