【摘要】：目的:觀察土茯苓提取物(rhizoma smilacis glabrae extract,RSGE)對黑素細(xì)胞株增殖的抑制作用,并探討其機(jī)制。方法:CCK8法觀察RSGE對黑素細(xì)胞株及正常人黑素細(xì)胞活性影響;流式細(xì)胞儀檢測RSGE對細(xì)胞凋亡及周期的影響;采用反轉(zhuǎn)錄(RT)-PCR法檢測黑素瘤A2058、HT-144等11種細(xì)胞株和正常人黑素細(xì)胞中c-kit m RNA表達(dá)情況;western blot法檢測RSGE對聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、c-kit等蛋白的影響;real-time PCR法檢測RSGE對c-kit基因轉(zhuǎn)錄水平的影響。結(jié)果:RSGE對c-kit m RNA高表達(dá)黑素細(xì)胞株A2058增殖的抑制作用強(qiáng)于低表達(dá)株HT-144,RSGE處理A2058細(xì)胞24 h半抑制濃度(IC50)為(10.55±0.29)g/L;對正常人黑素細(xì)胞生長無影響。結(jié)論:RSGE通過抑制c-kit基因表達(dá),誘導(dǎo)黑素細(xì)胞凋亡,從而發(fā)揮抗癌作用。
【圖文】：

臨床皮膚科雜志2016年45卷第3期JClinDermatol,March2016,Vol．45,No．32結(jié)果2.1RSGE對不同黑素瘤細(xì)胞株增殖抑制影響RSGE0g/L、1g/L、2g/L、5g/L、10g/L及20g/L作用于黑素瘤細(xì)胞株12、24和48h后均具有劑量時間依賴性增殖抑制作用（圖1）。RSGE對A2058、A375.S2、B16和WM-266-4細(xì)胞增殖抑制作用明顯強(qiáng)于HT-144、SK-mel-1、SK-mel-2、WM-115和UACC-62；RSGE對正常人黑素細(xì)胞生長無明顯抑制作用。通過SPSS軟件計(jì)算得出RSGE對黑素瘤A2058細(xì)胞24h的IC50為（10.55±0.295）g/L，對HT-144細(xì)胞的IC50為（21.95±1.345）g/L；比較兩組IC50值，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。黑素瘤化療藥物達(dá)卡巴嗪（DTIC）對A2058細(xì)胞24h的IC50值為（1.89±0.514）g/L（表3）。20g/L為RSGE相對耐受的HT-144細(xì)胞IC50值，敏感株A2058IC50值的2倍，此濃度值對兩株細(xì)胞皆有效，所以以下針對20g/LRSGE進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。2.2RSGE誘導(dǎo)A2058細(xì)胞凋亡20g/LRSGE處理正常人黑素細(xì)胞及黑素瘤細(xì)胞24h后，通過流式細(xì)胞儀檢測正常人黑素細(xì)胞、黑素瘤細(xì)胞株HT-144的亞G1凋亡峰比例分別為（2.33±0.325）%、（2.55±0.014）%；A2058細(xì)胞株無藥物處理組亞G1凋亡峰比例為（6.64±1.047）%，1g/LDTIC處理組為（15.85±3.479）%，20g/LRSGE處理組為（59.80±3.246）%（圖2）。A2058細(xì)胞株RSGE處理組與正常人黑素細(xì)胞、HT-144細(xì)胞株RSGE處理組和A2058細(xì)胞株無藥物處理組比較亞G1期細(xì)胞比例均有顯著性升高（P<0.001）。RSGE可誘導(dǎo)A2058細(xì)胞株凋亡。20g/LRSGE處理黑素瘤細(xì)胞A2058細(xì)胞株12、24、48h后，亞G1凋亡峰比例分別為（39.80±3.246）%，（54.80±3.825）%和（64.30±1.704）%（圖2）。RSGE誘導(dǎo)黑素瘤A2058細(xì)胞株凋亡呈時間依賴性。2.3不同黑素瘤細(xì)胞株c-k

臨床皮膚科雜志2016年45卷第3期JClinDermatol,March2016,Vol．45,No．32結(jié)果2.1RSGE對不同黑素瘤細(xì)胞株增殖抑制影響RSGE0g/L、1g/L、2g/L、5g/L、10g/L及20g/L作用于黑素瘤細(xì)胞株12、24和48h后均具有劑量時間依賴性增殖抑制作用（圖1）。RSGE對A2058、A375.S2、B16和WM-266-4細(xì)胞增殖抑制作用明顯強(qiáng)于HT-144、SK-mel-1、SK-mel-2、WM-115和UACC-62；RSGE對正常人黑素細(xì)胞生長無明顯抑制作用。通過SPSS軟件計(jì)算得出RSGE對黑素瘤A2058細(xì)胞24h的IC50為（10.55±0.295）g/L，對HT-144細(xì)胞的IC50為（21.95±1.345）g/L；比較兩組IC50值，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。黑素瘤化療藥物達(dá)卡巴嗪（DTIC）對A2058細(xì)胞24h的IC50值為（1.89±0.514）g/L（表3）。20g/L為RSGE相對耐受的HT-144細(xì)胞IC50值，敏感株A2058IC50值的2倍，此濃度值對兩株細(xì)胞皆有效，所以以下針對20g/LRSGE進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。2.2RSGE誘導(dǎo)A2058細(xì)胞凋亡20g/LRSGE處理正常人黑素細(xì)胞及黑素瘤細(xì)胞24h后，通過流式細(xì)胞儀檢測正常人黑素細(xì)胞、黑素瘤細(xì)胞株HT-144的亞G1凋亡峰比例分別為（2.33±0.325）%、（2.55±0.014）%；A2058細(xì)胞株無藥物處理組亞G1凋亡峰比例為（6.64±1.047）%，1g/LDTIC處理組為（15.85±3.479）%，，20g/LRSGE處理組為（59.80±3.246）%（圖2）。A2058細(xì)胞株RSGE處理組與正常人黑素細(xì)胞、HT-144細(xì)胞株RSGE處理組和A2058細(xì)胞株無藥物處理組比較亞G1期細(xì)胞比例均有顯著性升高（P<0.001）。RSGE可誘導(dǎo)A2058細(xì)胞株凋亡。20g/LRSGE處理黑素瘤細(xì)胞A2058細(xì)胞株12、24、48h后，亞G1凋亡峰比例分別為（39.80±3.246）%，（54.80±3.825）%和（64.30±1.704）%（圖2）。RSGE誘導(dǎo)黑素瘤A2058細(xì)胞株凋亡呈時間依賴性。2.3不同黑素瘤細(xì)胞株c-k
【作者單位】： 汕頭市皮膚性病防治院皮膚科;汕頭市婦幼保健院門診部;汕頭市中醫(yī)藥技工學(xué)校生物化學(xué)教研室;
【分類號】：R739.5


本文編號：2545756