【摘要】： 腹側(cè)黃色被毛小鼠是中國科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心工作人員在小鼠正常生產(chǎn)繁殖過程中發(fā)現(xiàn)的一種突變種小鼠,其遺傳背景為C57BL/6J(簡稱B6),最顯著的可見表型為頭頸軀干腹側(cè)面(從下頜至肛門)被覆黃色被毛,腹側(cè)與背側(cè)交界線清楚。本實(shí)驗(yàn)對腹側(cè)黃色被毛小鼠的生物學(xué)特性進(jìn)行了研究,并對突變基因進(jìn)行了染色體定位。具體研究內(nèi)容分為以下兩部分: 1腹側(cè)黃色被毛小鼠的生物學(xué)特性 本實(shí)驗(yàn)所研究的腹側(cè)黃色被毛小鼠來源于自發(fā)性突變,經(jīng)遺傳試驗(yàn)證實(shí)該突變符合單基因顯性遺傳的模式。組織病理學(xué)及組織化學(xué)研究發(fā)現(xiàn)腹側(cè)黃色被毛小鼠腹部表皮黑色素細(xì)胞數(shù)目及毛囊內(nèi)黑色素較其背景品系B6少,而背部與B6無明顯差別;黃色被毛小鼠毛發(fā)直接鏡檢,可見腹部毛發(fā)的顏色較B6淺,結(jié)構(gòu)正常,背部與B6無明顯差別;腹側(cè)黃色被毛小鼠腎臟臟器系數(shù)較正常B6小鼠大,差異呈極顯著性(P0.01);突變小鼠的血糖值,雄性為7.64±0.820mmol/L,雌性為7.46±0.992mmol/L,而背景品系的雄性為2.14±0.532mmol/L,雌性為2.59±0.896mmol/L,兩者間差異呈極顯著性,其余指標(biāo)包括體重、各重要臟器病理切片及血液生理學(xué)未發(fā)現(xiàn)明顯異常,盡管我們尚未確定這些變化之間的內(nèi)部聯(lián)系,但腹側(cè)黃色被毛小鼠由于具有高血糖的特征,有可能被開發(fā)成為一個(gè)新型的糖尿病模型。到目前為止,腹側(cè)黃色被毛小鼠的模型特征與對應(yīng)的人類疾病尚未明確,但這些生物學(xué)數(shù)據(jù)將為突變基因的鑒定提供非常有用的線索。 2黃色被毛小鼠突變基因的染色體定位 通過文獻(xiàn)查閱,參考前人的研究結(jié)果,本實(shí)驗(yàn)首先選取用于對突變基因進(jìn)行初步定位的39個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記,這些標(biāo)記基本平均分布于小鼠基因組,在B6及D2小鼠之間呈多態(tài)性且差異至少在4bp以上。同時(shí),大量繁殖F2代小鼠并且優(yōu)先從第2、8號(hào)染色體開始對樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增,在對擴(kuò)增結(jié)果逐一連鎖分析后,將突變基因定位于第2號(hào)染色體上。然后,我們在靠近突變基因的附近選取新的微衛(wèi)星標(biāo)記,通過這些微衛(wèi)星標(biāo)記將突變基因所在區(qū)域進(jìn)一步減小到D2Mit307和D2Mit310之間約2.7 cM的范圍內(nèi),在確定小鼠基因數(shù)據(jù)庫中已沒有合適的微衛(wèi)星位點(diǎn)可供使用之后,我們開始選擇SNP標(biāo)記,這些標(biāo)記必須在B6小鼠及D2小鼠間有堿基多態(tài)性,這種多態(tài)性能夠通過對PCR產(chǎn)物的測序進(jìn)行區(qū)分。在本實(shí)驗(yàn)中我們共使用了11個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記和3個(gè)SNP標(biāo)記,最終通過對196只F2小鼠的連鎖分析,將腹側(cè)黃色被毛小鼠的突變基因定位于第2號(hào)染色體距著絲粒149804749bp到155060764bp內(nèi)大約5.3Mb之內(nèi),為進(jìn)一步克隆鑒定突變基因奠定了基礎(chǔ)。
【圖文】：

圖 1 腹側(cè)黃色被毛小鼠外觀A 為背景品系 C57BL/6J 小鼠正面觀，頭部及背部黑色； B 為腹側(cè)黃色被毛小鼠正面觀；C 為腹側(cè)黃色被毛小鼠側(cè)面觀，黃色被毛小鼠整個(gè)腹側(cè)面從下頜、頸部延伸至胸腹部均被覆黃色被毛。2.2 腹側(cè)黃色被毛小鼠皮膚組織病理學(xué)將7日齡的腹側(cè)黃色被毛小鼠與其背景品系B6小鼠背部皮膚組織行多巴染色石蠟切片后，黑色素細(xì)胞的數(shù)量及毛囊內(nèi)黑色素含量并無明顯差異；而兩者腹部皮膚組織有明顯差距，B6小鼠腹部皮膚多巴染色顯示毛囊黑色素含量較多，分布均勻，表皮內(nèi)多巴（+）黑色素細(xì)胞散在分布；而腹側(cè)黃色被毛小鼠腹部皮膚多巴染色見毛囊內(nèi)黑色素含量少，，分布稀疏，大部分表皮內(nèi)多巴（－）（見圖 2）。26

圖 2 腹側(cè)黃色被毛小鼠、B6及 BALB/c 小鼠皮膚組織（多巴染色）說明：A 為 B6小鼠背部皮膚組織(×400)，B 為腹側(cè)黃色被毛小鼠背部皮膚組織(×400)，C 為 BALB/c 小鼠背部皮膚組織(×400)；D 為 B6小鼠腹部皮膚組織(×400)，E 為腹側(cè)黃色被毛小鼠腹部皮膚組織(×400)，F(xiàn) 為 BALB/c 小鼠腹部皮膚組織(×400)，黃色箭頭指示為黑色素細(xì)胞。2.3 腹側(cè)黃色被毛小鼠被毛的鏡下觀察B6小鼠背部毛發(fā)內(nèi)由各種細(xì)胞組成的結(jié)構(gòu)排列規(guī)則、致密，顏色深；B6小鼠腹部毛發(fā)內(nèi)的結(jié)構(gòu)亦規(guī)則，顏色較背部稍淺。腹側(cè)黃色被毛小鼠背部毛發(fā)顏色及結(jié)構(gòu)與 B6無明顯差別，但腹部毛發(fā)明顯較 B6淺，結(jié)構(gòu)正常（見圖 3）。27
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R758.5

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本文編號(hào)：2542612