痤瘡患者的痤瘡丙酸桿菌對大環(huán)內(nèi)酯類和四環(huán)素類抗生素耐藥性分析
【圖文】:
鈇錛衢嬋?Americantypeculturecollection)。四環(huán)素(批號:U8IML)、多西環(huán)素(7BSTH)、米諾環(huán)素(78G4G)、紅霉素(VWDPD-HH)、克拉霉素(OF5RK-OF)、阿奇霉素(FCKPD-SR)均購于日本TCI公司,為試劑級產(chǎn)品。1.3方法1.3.1標(biāo)本采集患者用清水及洗面奶清潔面部,去除面部灰塵、化妝品等后,,取仰臥位,用75%酒精對取材處皮損進(jìn)行常規(guī)消毒3次,待酒精完全揮發(fā)后,用粉刺針刺破丘疹或膿皰表面,再用滅菌粉刺環(huán)擠壓出丘疹或膿皰內(nèi)容物;挑取內(nèi)容物,迅速接種到厭氧血瓊脂平板上。1.3.2痤瘡丙酸桿菌分離、培養(yǎng)與鑒定操作流程見圖1。圖1痤瘡丙酸桿菌分離、培養(yǎng)與鑒定Fig.1Isolation,cultureandidentificationofPropionibacteriumacnes1.3.3痤瘡丙酸桿菌的保存和復(fù)蘇挑取純化后培養(yǎng)得到的菌落3滿環(huán)懸浮于EP保存管(主要成分為脫脂奶粉)中,5min內(nèi)置于-70℃冰箱內(nèi)冷凍保存。將保存于-70℃冰箱內(nèi)的菌種保存管置于36℃恒溫箱內(nèi)復(fù)溫0.5h,以無菌接種環(huán)輕微攪拌脫脂牛奶菌懸液,取適量菌懸液于厭氧血瓊脂培養(yǎng)基上,以無菌接種環(huán)沾取菌懸液或者磁珠劃線涂布平板,將平板迅速放入?yún)捬豕拗,放入(yún)捬踔甘緞┖痛呋瘎?鈀粒),密閉厭氧罐,使用多功能微生物培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行換氣,最終成為厭氧環(huán)境,置于36℃恒溫箱中培養(yǎng)48h。1.3.4體外藥敏試驗(yàn)按照瓊脂稀釋法[3]分別配制紅霉素、阿奇霉素、克拉霉素、四環(huán)素、多西環(huán)素和米諾環(huán)素藥物濃度從0.0625~256μg/mL濃度梯度藥敏平板。每一種抗菌藥物均有空白對照及需氧平板對照。菌懸液的制備:從厭氧血瓊脂平板上選擇經(jīng)48h孵育產(chǎn)生的菌落,15min內(nèi)用0.9%生理鹽水稀釋,調(diào)整濁度等于0.5麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)(相當(dāng)于105CFU/點(diǎn))。將所有P.acnes菌懸液用多點(diǎn)加液儀接種到瓊脂表面。將接種好的平板放入?yún)捬?
【作者單位】: 暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬東莞醫(yī)院;
【基金】:東莞市社會科技發(fā)展項(xiàng)目(2013108101042)
【分類號】:R758.733
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