【摘要】：目的探討粒細(xì)胞集落刺激因子受體(G-CSFR)在正常人黑素細(xì)胞中的表達(dá)及重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)對人黑素細(xì)胞生物學(xué)作用的影響。方法分別用普通的合成培養(yǎng)基與添加一定濃度rhG-CSF的合成培養(yǎng)基培養(yǎng)正常人的黑素細(xì)胞，并對黑素細(xì)胞的生長情況及形態(tài)進(jìn)行觀察。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測人黑素細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及紅白血病細(xì)胞(HEL92.1.7)中G-CSFR的表達(dá)率；免疫熒光染色檢測G-CSFR在細(xì)胞中的定位；蛋白印跡(Western-Blotting)、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法分別檢測黑素細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及HEL92.1.7中G-CSFR蛋白及G-CSFR mRNA的表達(dá)情況；噻唑藍(lán)比色法(MTT法)檢測不同濃度rhG-CSF(200、400、600、800μg/L)對黑素細(xì)胞增殖作用；多巴氧化法檢測黑素細(xì)胞的酪氨酸酶活性。 結(jié)果1.黑素細(xì)胞G-CSFR的表達(dá)率(76.81±10.70%)較HEL92.1.7細(xì)胞(2.53±1.54%)明顯升高(P0.01)，略低于中性粒細(xì)胞(85.76±15.71%)(P0.05)；2.G-CSFR在中性粒細(xì)胞、黑素細(xì)胞中呈陽性染色，在HEL92.1.7細(xì)胞中為陰性染色，陽性反應(yīng)主要定位在細(xì)胞漿及細(xì)胞膜；3.人黑素細(xì)胞可表達(dá)G-CSFR蛋白和G-CSFR mRNA，其表達(dá)水平與rhG-CSF無關(guān)(P㧐0.05)；黑素細(xì)胞G-CSFR蛋白和G-CSFR mRNA的表達(dá)水平明顯高于HEL92.1.7(P0.01)，低于中性粒細(xì)胞(P0.05或P0.01)；4.200～800μg/L的rhG-CSF具有促進(jìn)人黑素細(xì)胞增殖的能力，其中600μg/L的rhG-CSF效應(yīng)最強(qiáng)(164.04±13.0%)；200～800μg/L的rhG-CSF對黑素細(xì)胞的酪氨酸酶活性無影響(P㧐0.05)。 結(jié)論正常人黑素細(xì)胞可表達(dá)G-CSFR；G-CSFR陽性反應(yīng)主要定位在細(xì)胞漿及細(xì)胞膜。rhG-CSF具有促進(jìn)人黑素細(xì)胞增殖的作用，但對酪氨酸酶活性無影響。 目的探討G-CSF及其受體在人黑素瘤細(xì)胞株中的表達(dá)及臨床意義。方法應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測人黑素瘤細(xì)胞株(M14、A375)、人白血病細(xì)胞株(U937)及紅白血病細(xì)胞(HEL92.1.7)中G-CSFR的表達(dá)率；免疫熒光染色檢測G-CSFR在細(xì)胞中的定位；蛋白印跡(Western-Blotting)、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法分別檢測M14、A375、U937、HEL92.1.7細(xì)胞中G-CSFR蛋白及G-CSFR mRNA的表達(dá)情況；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測M14、A375細(xì)胞中G-CSF的分泌水平。 結(jié)果1. M14細(xì)胞的G-CSFR表達(dá)率為(80.13±10.12%)，明顯高于HEL92.1.7細(xì)胞(2.69±1.74%)(P0.01)，略低于U937細(xì)胞(84.05±7.36%)(P0.05)；A375細(xì)胞的G-CSFR表達(dá)率為(56.29±7.38%)，高于HEL92.1.7細(xì)胞(P0.01)，但低于U937細(xì)胞(P0.05)和M14細(xì)胞(P0.05)。2. G-CSFR在U937、M14和A375細(xì)胞中均呈陽性染色，在HEL92.1.7細(xì)胞中為陰性染色，陽性反應(yīng)主要定位在細(xì)胞漿及細(xì)胞膜。3.G-CSFR蛋白和G-CSFR mRNA在M14細(xì)胞中有表達(dá)，其表達(dá)水平明顯高于HEL92.1.7(P0.01)，，略低于U937細(xì)胞(P0.05)；G-CSFR蛋白和G-CSFR mRNA在A375細(xì)胞中的表達(dá)水平低于U937細(xì)胞(P0.05)和M14細(xì)胞(P0.05)，高于HEL92.1.7細(xì)胞(P0.01)。4. M14細(xì)胞呈時間依賴性分泌G-CSF，A375細(xì)胞未檢測到G-CSF的分泌。 結(jié)論人黑素瘤細(xì)胞株M14和A375均表達(dá)G-CSFR。G-CSFR陽性反應(yīng)主要定位在細(xì)胞漿及細(xì)胞膜。M14細(xì)胞可分泌G-CSF，A375細(xì)胞不能分泌G-CSF。M14細(xì)胞中可能存在G-CSF/G-CSFR自分泌環(huán)路。
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【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R739.5

【引證文獻(xiàn)】

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1 高明霞;粒細(xì)胞集落刺激因子改善子宮內(nèi)膜狀況的臨床及機(jī)理研究[D];蘭州大學(xué);2013年

本文編號：2463235