【摘要】：目的：不同條件下，對銀屑病患者表皮干細(xì)胞（Epidermal Stem Cells，ESCs）體外進(jìn)行分離、純化、培養(yǎng)及鑒定，，探索找出最佳培養(yǎng)體系，并對銀屑病患者表皮干細(xì)胞生物學(xué)特性進(jìn)行初步研究，為銀屑病皮損形成的深入研究提供依據(jù)。 方法：銀屑病皮損標(biāo)本37例、正常人皮膚標(biāo)本15例。ESCs分離、篩選、培養(yǎng)：①Dispase酶、胰酶分別4℃過夜或37℃3小時四種消化條件隨機選擇，進(jìn)行真表皮分離效率比較；②制備單細(xì)胞懸液，比較單位面積銀屑病皮損與正常皮膚表皮細(xì)胞總數(shù)、活細(xì)胞數(shù)；③IV型膠原不同濃度、不同黏附時間黏附法分選表皮干細(xì)胞，計算表皮細(xì)胞黏附率；④倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。⑤ESCs表面標(biāo)志物檢測：a.免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法檢測原代12h、6d、12d的ESCs角蛋白19（K19）、角蛋白10（K10）的表達(dá)；b.流式細(xì)胞儀檢測初黏附細(xì)胞、原代12天、P1代7天ESCs CD29（整合素β1）、CD71、P63的表達(dá)。細(xì)胞計數(shù)法繪制ESCs細(xì)胞生長曲線。 結(jié)果：ESCs分離、篩選、培養(yǎng)：①2.5g/L Dispase II酶5%CO2、4℃過夜條件下真表皮分離效率高，總高效率達(dá)100%。②單位面積的銀屑病皮損表皮細(xì)胞的數(shù)量及活細(xì)胞量均大于正常皮膚標(biāo)本，結(jié)果具有顯著差異（P＜0.05）。③a.IV型膠原黏附表皮細(xì)胞10min，可獲得純度較高的ESCs；b.50mg/L與100mg/L濃度IV型膠原表皮細(xì)胞黏附率未見顯著性差異（P＞0.05）。④倒置顯微鏡下，銀屑病ESCs三到四天后開始快速生長，單個銀屑病ESCs形成的最大克隆遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于正常皮膚組，培養(yǎng)數(shù)天后，銀屑病ESCs易于分化。⑤ESCs表面標(biāo)志物檢測：a.免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法檢測：K19顯示為亮熒光綠色顆粒沉積在細(xì)胞表面及胞漿中，陽性表達(dá)；K10未見熒光顆粒沉積；b.流式細(xì)胞儀檢測CD29、P63高表達(dá)，CD71低表達(dá)，結(jié)合免疫熒光細(xì)胞法，認(rèn)定所培養(yǎng)細(xì)胞為表皮干細(xì)胞。細(xì)胞計數(shù)法繪制ESCs生長曲線，結(jié)果顯示銀屑病ESCs短時間內(nèi)細(xì)胞倍增速度快。 結(jié)論：①成功分離、篩選、培養(yǎng)銀屑病ESCs，條件如下：2.5g/L Dispase II酶4℃過夜消化分離真表皮，2.5g/L胰蛋白酶消化制細(xì)胞懸液，50mg/L IV型膠原黏附10min篩選，可成功分選穩(wěn)定生長的ESCs；②銀屑病皮損表皮細(xì)胞數(shù)量、ESCs增殖能力、細(xì)胞生長形態(tài)、與正常皮膚存在差異；③銀屑病ESCs單細(xì)胞克隆能力強，生長迅速，易于分化。
[Abstract]:Objective: to isolate, purify, culture and identify psoriatic epidermal stem cells (Epidermal Stem Cells,ESCs) in vitro under different conditions, and to find out the best culture system. A preliminary study on the biological characteristics of epidermal stem cells in patients with psoriasis was carried out in order to provide a basis for further study on the formation of skin lesions in psoriasis. Methods: Escs was isolated from 37 psoriatic lesions and 15 normal skin specimens. Escs was isolated and cultured. 1Dispase enzyme and trypsin were randomly selected under four digestive conditions: 4 鈩

本文編號：2432453