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下調(diào)糖蛋白130基因表達(dá)對(duì)HaCaT細(xì)胞體外增殖及IL-6水平的影響

發(fā)布時(shí)間:2019-01-30 21:21
【摘要】:目的探討下調(diào)糖蛋白(glycoprotein,gp)130基因表達(dá)對(duì)人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞株(human immortal keratinocyte colony HaCaT cells,HaCaT)細(xì)胞體外增殖及IL-6水平的影響。方法設(shè)計(jì)并合成三條gp130的siRNA,轉(zhuǎn)染HaCaT細(xì)胞后,從mRNA表達(dá)、蛋白質(zhì)水平上檢測(cè)gp130,篩選出最適siRNA序列及濃度用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。轉(zhuǎn)染HaCaT細(xì)胞24h,48h,MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況;流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞增殖周期;熒光定量PCR法檢測(cè)mRNA表達(dá);Western blotting印跡法檢測(cè)蛋白水平;酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)細(xì)胞上清液中IL-6水平。結(jié)果 siRNA-1與siRNA-NC、空白對(duì)照組相比,HaCaT細(xì)胞增殖率及增殖周期在24h時(shí)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05),48h時(shí)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05);IL-6mRNA表達(dá)、蛋白水平在轉(zhuǎn)染HaCaT細(xì)胞24h時(shí)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05),48h時(shí)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)。結(jié)論下調(diào)gp130基因可抑制角質(zhì)形成細(xì)胞增殖,影響角質(zhì)形成細(xì)胞增殖周期,并可抑制IL-6的表達(dá)和分泌。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of down-regulation of glycoprotein (glycoprotein,gp) 130 gene expression on the proliferation and IL-6 level of human immortalized keratinocytes (human immortal keratinocyte colony HaCaT cells,HaCaT) cells in vitro. Methods three gp130 siRNA, were designed and synthesized to transfect HaCaT cells. The optimal siRNA sequence and concentration were screened from mRNA expression and detection of gp130, at protein level for subsequent experiments. The proliferation of HaCaT cells was detected by flow cytometry, and the expression of mRNA by; Western blotting was detected by fluorescence quantitative PCR. Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect the level of IL-6 in the supernatant. Results compared with the control group of siRNA-NC, the proliferation rate and cycle of HaCaT cells in siRNA-1 had no significant difference at 24 h (P0.05), but there were significant differences at 48h (P0.05). There was no significant difference in IL-6mRNA expression and protein level at 24 h after transfection of HaCaT cells (P0.05), but there was significant difference at 48h (P0.05). Conclusion down-regulation of gp130 gene can inhibit the proliferation of keratinocytes, affect the proliferation cycle of keratinocytes, and inhibit the expression and secretion of IL-6.
【作者單位】: 河北大學(xué)附屬醫(yī)院皮膚科;滄州市中心醫(yī)院皮膚科;
【分類號(hào)】:R758.63

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本文編號(hào):2418538

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