發(fā)布時(shí)間：2018-12-15 02:00

【摘要】：背景表皮松解性掌跖角化癥(EPPK)是遺傳性掌跖角化病的一種亞型,主要的臨床表現(xiàn)為掌跖角化過(guò)度,在病灶周?chē)忻黠@的紅斑緣,是一種常染色體顯性遺傳皮膚病,近年來(lái)研究表明絕大部分表皮松懈性掌跖角化癥是由KRT9基因突變引起,小部分是由于KRT1基因突變所引起目的發(fā)現(xiàn)三個(gè)表皮松解性掌跖角化癥家系的遺傳病因,為該病的診斷、預(yù)防和遺傳咨詢提供依據(jù)。方法收集3個(gè)EPPK家系的臨床資料及外周血樣本,采用酚-氯仿法提取基因組DNA,對(duì)其中一大家系進(jìn)行微衛(wèi)星標(biāo)記連鎖分析確定候選基因,對(duì)3個(gè)家系的先證者進(jìn)行Sanger測(cè)序篩查突變位點(diǎn),隨后針對(duì)所檢變異進(jìn)行家系致病突變驗(yàn)證。結(jié)果家系1通過(guò)經(jīng)微衛(wèi)星標(biāo)記連鎖分析和單倍型分析,確定KRT9基因?yàn)樵摷蚁岛蜻x致病基因；在先證者KRT9基因第1外顯子檢出一錯(cuò)義突變c.491TC(p.L164P),利用限制性酶切分析對(duì)家系成員基因分型顯示該家系的患者均攜帶該突變；對(duì)家系2和3先證者KRT9基因測(cè)序,分別在第1外顯子區(qū)檢出一雜合錯(cuò)義突變c.488 GA(p.R163Q)和c.482 AG(p.N161S)。結(jié)論確定KRT9基因變異c.491TC(p.L164P), c.488 GA (p.R163Q)和c.482 AG (p.N161S)分別為這三個(gè)家系的致病突變；3個(gè)突變均位于KRT9基因第1外顯子區(qū),分別為KRT9基因第1外顯子c.491TC(p.L164P), c.488GA (p.R163Q)和c.482AG (p.N161S),其中c.491TC (p.L164P)為新生突變,而c.488GA (p.R163Q)和c.482AG (p.N161S)這兩個(gè)突變已被HGMD數(shù)據(jù)庫(kù)收錄,為已知致病突變,本研究擴(kuò)充了EPPK致病突變數(shù)據(jù)庫(kù)并進(jìn)一步證實(shí)該區(qū)域是EPPK突變熱點(diǎn)區(qū)域。目的在三個(gè)中國(guó)人成骨不全家系中進(jìn)行致病基因突變檢測(cè),明確致病原因。方法酚-氯仿法提取三個(gè)家系先證者及家系成員外周全血基因組DNA, PCR擴(kuò)增I型膠原基因COL1A1和COL1A2編碼區(qū)及外顯子／內(nèi)含子交界區(qū),PCR產(chǎn)物直接進(jìn)行Sanger測(cè)序；通過(guò)PCR-高分辨熔解曲線法進(jìn)行家系樣本突變鑒定。結(jié)果在三個(gè)家系的先證者的COL1A1基因序列中分別檢測(cè)到突變c.2560GA (p.G854S), c.358CT(p.R120*)和c.814GA(p.G272S),其中c.358CT(p.R120*)和c.814GA (p.G272S)為新生突變；HRM家系突變驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)每個(gè)家系內(nèi)的患者均攜帶相同的突變,但家系非OI患者和群體正常對(duì)照不攜帶突變,HRM基因分型結(jié)果與測(cè)序鑒定結(jié)果一致。結(jié)論本研究發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)新生突變c.358CT (p.R120*)和c.814GA (p.G272S)并建立基于PCR-DNA測(cè)序和PCR-高分辨熔解曲線分析的成骨不全癥基因診斷技術(shù)平臺(tái),為突變的家系驗(yàn)證和產(chǎn)前基因診斷奠定了基礎(chǔ)。目的：在一個(gè)肝豆?fàn)詈俗冃?WD)家系中進(jìn)行致病突變鑒定,為該家系提供產(chǎn)前基因診斷。方法：酚-氯仿法提取外周全血或妊13周胎兒絨毛組織基因組DNA；利用PCR-Sanger測(cè)序技術(shù)對(duì)先證者ATP7B基因外顯子及外顯子/內(nèi)含子銜接區(qū)序列進(jìn)行突變分析；針對(duì)先證者攜帶的突變位點(diǎn),應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)-高分辨熔解曲線(HRM)方法對(duì)先證者家系4名成員進(jìn)行突變鑒定,并在此基礎(chǔ)上為患兒母親提供產(chǎn)前基因診斷。結(jié)果：先證者ATP7B基因第8外顯子存在純合致病突變c.2333GT(p. R778L);該家系5名成員和4名群體正常樣本分屬于3種不同熔解曲線。HRM分析結(jié)果與測(cè)序結(jié)果一致,即：患兒本人為R778L的純合子,其父母、姐姐和母親產(chǎn)前診斷的胎兒均為突變雜合子,4名群體正常對(duì)照為純合野生型。結(jié)論：在一個(gè)WD家系中檢測(cè)到ATP7B基因熱點(diǎn)突變c.2333GT(p. R778L),并針對(duì)該突變建立了一種基于PCR-HRM技術(shù)的快速突變鑒定方法,成功為家系提供產(chǎn)前基因診斷。
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【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R758.5

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1 周飛紅;;合并內(nèi)臟惡性腫瘤的掌跖角化癥[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).皮膚病學(xué)分冊(cè);1988年04期

2 周沛華,蔣喬倉(cāng);點(diǎn)狀掌跖角化癥一例[J];中華皮膚科雜志;1995年03期

3 李明山;掌跖角化癥2例[J];醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐;1995年06期

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本文編號(hào)：2379743