【摘要】： 研究背景： 自體游離毛發(fā)移植術(shù)已成為臨床治療毛發(fā)缺損特別是雄激素性禿發(fā)最常用的手術(shù)方法,但存在許多問(wèn)題,如供區(qū)不足、供區(qū)瘢痕、移植密度低,移植成活率低,明顯影響手術(shù)效果,毛囊組織工程的研究成為了解決這些問(wèn)題的關(guān)鍵。毛囊中各類(lèi)細(xì)胞的分離是整個(gè)毛囊組織工程研究的基礎(chǔ),毛囊是由上皮成分(包括毛母質(zhì)、內(nèi)外根鞘)和真皮成分(包括毛乳頭、結(jié)締組織鞘)組成的,其中毛乳頭細(xì)胞是構(gòu)成毛乳頭的主要間質(zhì)細(xì)胞,它們是一簇特化的成纖維細(xì)胞。所有的毛乳頭細(xì)胞在外觀上都呈成纖維細(xì)胞樣,而且在含有小牛血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的毛乳頭細(xì)胞有著聚集性生長(zhǎng)的特性。隨著毛囊的周期性循環(huán),毛乳頭的形態(tài)也發(fā)生著周期性的改變。它在毛囊的生長(zhǎng)發(fā)育形成及周期調(diào)控中起著重要的作用。因此建立毛乳頭細(xì)胞體外培養(yǎng)模型,對(duì)于詳盡地了解毛乳頭細(xì)胞體外培養(yǎng)生長(zhǎng)特點(diǎn),以及如何誘導(dǎo)毛囊的發(fā)生,具有重要的意義。毛囊中的上皮成分是毛發(fā)纖維產(chǎn)生的基礎(chǔ),對(duì)于毛囊組織工程的構(gòu)建是必不可少的種子細(xì)胞,目前的實(shí)驗(yàn)主要是以動(dòng)物觸須毛囊和人頭皮毛囊為研究材料,分離毛囊中各類(lèi)細(xì)胞。但目前對(duì)于這兩類(lèi)細(xì)胞的分離方法也只適用于實(shí)驗(yàn)室的少量制備,不適合于組織工程對(duì)細(xì)胞分離的大規(guī)模高效快速的要求。目前已經(jīng)成功建立了多種毛囊重建的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,但對(duì)于影響毛囊重建方向的因素還未見(jiàn)相關(guān)研究報(bào)道。 目的： (1)研究小鼠皮膚毛囊細(xì)胞的分離方法。 (2)研究表皮細(xì)胞、毛囊細(xì)胞、移植部位對(duì)毛囊重建的影響。 (3)研究可降解支架材料對(duì)毛囊重建的影響。 (4)研究毛囊重建方向的決定因素。 方法： (1)小鼠皮膚毛囊細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定方法 取3～5d C57BL/6J近交系乳鼠5只,置無(wú)菌培養(yǎng)皿中,安爾碘消毒3遍,PBS充分沖洗,轉(zhuǎn)移至另一無(wú)菌培養(yǎng)皿中,剪下背部全層皮膚,平鋪于培養(yǎng)皿中,加入0.2% Dispase,充分浸沒(méi)組織塊,置37℃水浴消化2h,倒掉消化液,用鑷子小心提起全層皮膚平鋪于另一干燥的無(wú)菌培養(yǎng)皿中,真皮面朝上,把真皮從表皮上剝離,表皮行常規(guī)石蠟切片HE染色。PBS沖洗真皮,用剪刀修剪成小塊,取一小塊行常規(guī)石蠟切片HE染色,其余置離心管中,在37℃緩慢攪拌的條件下加入0.2%Ⅰ型膠原酶消化30分鐘,加入適量完全培養(yǎng)基稀釋消化液,充分振蕩,經(jīng)250μm篩網(wǎng)(60 TYLER MESH)過(guò)濾后收集濾液,150g離5分鐘,收集沉淀重懸于完全培養(yǎng)基,20g離心3分鐘,重復(fù)2次,沉淀再次重懸于適量完全培養(yǎng)基,加等量9% Ficoll。在15ml錐形離心管中加入5ml 9% Ficoll,再緩慢加入10ml上述制備的沉淀-Ficoll混懸液(約含8～10只乳鼠真皮消化物),40g離心5分鐘,去上清液。沉淀重懸于完全培養(yǎng)基,40g離心5分鐘,重復(fù)3次,收集沉淀加入適量0.2%Ⅰ型膠原酶置37℃水浴消化1h,用吸管間斷吹打,消化完畢,加PBS稀釋消化液,450g離心5分鐘,去消化液,再加入0.125%胰蛋白酶37℃水浴消化10分鐘,加入完全培養(yǎng)基,充分振蕩,經(jīng)25μm篩網(wǎng)(500 TYLER MESH)過(guò)濾后收集濾液,450g離心5分鐘,重復(fù)3次,收集細(xì)胞備用。調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106個(gè)／ml,臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測(cè)細(xì)胞存活率,行流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD34、CD117表達(dá)。 細(xì)胞沉淀重懸于完全培養(yǎng)基,調(diào)整細(xì)胞濃度1×105個(gè)／ml。取1 ml細(xì)胞懸液接種于35mm培養(yǎng)皿(預(yù)先把清潔無(wú)菌的蓋玻片平鋪于皿底),置培養(yǎng)箱1h,去掉培養(yǎng)基,重新加入新鮮培養(yǎng)基置5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24h更換一次培養(yǎng)液。細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)進(jìn)行傳代培養(yǎng)。小心吸出舊培養(yǎng)液,用PBS清洗(沖洗)3次,加入適量0.125%胰蛋白酶,使消化液的量能蓋住細(xì)胞,倒置顯微鏡下觀察消化細(xì)胞,若多數(shù)細(xì)胞出現(xiàn)胞質(zhì)回縮,細(xì)胞之間不再連接成片,棄去胰蛋白酶液,加入新鮮的培養(yǎng)液。用吸管將已經(jīng)消化細(xì)胞吹打成細(xì)胞懸液,置10ml離心管中,500g離心5min,棄上清液,重復(fù)離心洗劑2次,棄去清液,加入2ml培養(yǎng)液,用滴管輕輕吹打細(xì)胞制成細(xì)胞懸液,按1：2進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)原代培養(yǎng)細(xì)胞及傳代培養(yǎng)細(xì)胞按試劑盒操作說(shuō)明行α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)和堿性磷酸酶(ALP)染色鑒定。 (2)毛囊細(xì)胞注射移植方法 取3～5d C57BL/6J近交系乳鼠5只,置無(wú)菌培養(yǎng)皿中,安爾碘消毒3遍,PBS充分沖洗,轉(zhuǎn)移至另一無(wú)菌培養(yǎng)皿中,剪下背部全層皮膚,平鋪于培養(yǎng)皿中,加入0.2% Dispase,充分浸沒(méi)組織塊,置37℃水浴消化2h,倒掉消化液,用鑷子小心提起全層皮膚平鋪于另一干燥的無(wú)菌培養(yǎng)皿中,真皮面朝上,把真皮從表皮上剝離備用。在含表皮的培養(yǎng)皿中加入適量0.125%胰蛋白酶室溫消化10分鐘,用吸管間斷吹打,使表皮細(xì)胞充分游離,加入適量完全培養(yǎng)基。消化液經(jīng)25μm篩網(wǎng)(500 TYLER MESH)過(guò)濾后收集濾液,450g離心5分鐘,重復(fù)3次,收集細(xì)胞備用。 取10mg Dil置離心管中,加入5ml DMSO,避光,37℃水浴,間斷振蕩至充分溶解,無(wú)菌過(guò)濾分裝至PCR反應(yīng)管中,每管10μl,-20℃凍存。調(diào)整表皮細(xì)胞濃度為1×107個(gè)／ml,取1ml細(xì)胞懸液置離心管中,加入10μl DiI儲(chǔ)存液,吸管吹打混勻。置5%CO2培養(yǎng)箱中標(biāo)記30分鐘。450g離心5分鐘,棄上清,重懸于完全培養(yǎng)基中,重復(fù)上述離心過(guò)程3次以去掉多余的熒光探針。重懸于完全培養(yǎng)基中備用。按同樣濃度對(duì)毛囊細(xì)胞行DiO標(biāo)記。 取表皮細(xì)胞(1×107個(gè))+毛囊細(xì)胞(1×107個(gè))制成1ml細(xì)胞懸液,在裸鼠背部標(biāo)記5個(gè)點(diǎn),用1ml注射器行皮內(nèi)注射,形成一小水泡,按住進(jìn)針點(diǎn)出針。每點(diǎn)注射0.1ml,每點(diǎn)注射細(xì)胞數(shù)目為1×106個(gè)。按同樣注射方法行表皮細(xì)胞(1×106個(gè))、毛囊細(xì)胞(1×106個(gè))、毛囊細(xì)胞(1×105個(gè))、毛囊細(xì)胞(1×104個(gè))、毛囊細(xì)胞(1×103個(gè))、1代培養(yǎng)毛囊細(xì)胞(1×106個(gè))、2代培養(yǎng)毛囊細(xì)胞(1×106個(gè))、3代毛囊細(xì)胞(1×106個(gè))、表皮細(xì)胞(1×106個(gè))+大鼠足底成纖維細(xì)胞(1×106個(gè))注射。3周后取材行冷凍切片熒光檢測(cè)和石蠟切片HE染色。 按上述同樣注射方法,行毛囊細(xì)胞(1×106個(gè))皮內(nèi)注射,分別在在2d、4d、1周、3周、6周后取材行冷凍切片熒光檢測(cè)和石蠟切片HE染色。 毛囊細(xì)胞(1×107個(gè))制成1ml細(xì)胞懸液,在裸鼠背部標(biāo)記5個(gè)點(diǎn),用20ml注射器針頭穿刺至筋膜,用移液器吸取0.1ml細(xì)胞懸液沿穿刺點(diǎn)平行插入皮下,把細(xì)胞注射在筋膜表面,每點(diǎn)注射0.1ml。3周后取材行冷凍切片熒光檢測(cè)和石蠟切片HE染色。。 (3)毛囊細(xì)胞與材料的復(fù)合移植方法 把Ⅰ型膠原海綿置無(wú)菌培養(yǎng)皿中,修剪成1×lcm大小。調(diào)整毛囊細(xì)胞濃度為1×107個(gè)／ml,每塊膠原海綿滴加0.1ml細(xì)胞懸液。取裸鼠3只,腹腔注射戊巴比妥鈉0.4ml/100g(10mg/ml),麻醉成功后,安爾碘消毒背皮膚3遍,在頭部和尾部分別切開(kāi)長(zhǎng)約1cm切口,深達(dá)筋膜,將膠原海綿置入皮下,縫合切口。4W取材行石蠟切片HE染色。 取PLGA微管,剪成長(zhǎng)1.5cm小段,浸75%酒精消毒1h,PBS沖洗3遍,浸PBS過(guò)夜備用。取裸鼠3只,腹腔注射戊巴比妥鈉0.4ml／100g(10mg/ml),麻醉成功后,安爾碘消毒背皮膚3遍,在頭部和尾部分別切開(kāi)長(zhǎng)約0.5cm切口,深達(dá)筋膜,將PLGA微管插入皮下。調(diào)整毛囊細(xì)胞濃度為1×107個(gè)／ml,在每個(gè)微管中注入細(xì)胞懸液0.1ml。縫合切口。4w取材行石蠟切片HE染色。 Ⅰ型膠原海綿、PLGA微管直接裝臺(tái)鍍膜進(jìn)行掃描。毛囊細(xì)胞與Ⅰ型膠原海綿復(fù)合培養(yǎng)1w后,棄培養(yǎng)液,加入PBS清洗3遍,經(jīng)固定、干燥行掃描電鏡檢測(cè)。 (4)毛囊細(xì)胞小室移植方法 毛囊細(xì)胞開(kāi)放小室移植取5ml耐高溫的塑料離心管,去掉中央部分,在蓋子下端貼一層透明膠帶,固定后在膠帶中央扎數(shù)個(gè)小孔,高壓消毒備用。取5只裸鼠,腹腔注射戊巴比妥鈉0.4ml/100g(10mg/ml),麻醉成功后,安爾碘消毒背皮膚3遍,在背部切除一加圓形皮膚,深達(dá)筋膜,直徑為離心管蓋直徑的一半。把制備好的離心管蓋子插入皮下,蓋子下端朝向皮膚表面,暴露于空氣中,把皮膚縫合在蓋子周邊固定,形成一個(gè)可以容納細(xì)胞懸液的開(kāi)放小室。調(diào)整毛囊細(xì)胞濃度為1×107個(gè)／ml,在每個(gè)小室內(nèi)注入細(xì)胞懸液0.1ml。同時(shí)行單獨(dú)小室移植作為對(duì)照組。4w取材行石蠟切片HE染色和冷凍切片熒光檢測(cè)。 毛囊細(xì)胞封閉小室移植取5ml耐高溫的塑料離心管,去掉中央部分,高壓消毒備用。取5只裸鼠,腹腔注射戊巴比妥鈉0.4ml/100g(10mg/ml),麻醉成功后,安爾碘消毒背皮膚3遍,在背部切開(kāi)全層皮膚,切口長(zhǎng)度為離心管蓋直徑的一半,深達(dá)筋膜,把制備好的離心管蓋子完全插入皮下,使皮膚完全覆蓋整個(gè)蓋子,切口縫合固定,形成一個(gè)可以容納細(xì)胞懸液的皮下封閉小室。調(diào)整毛囊細(xì)胞濃度為1×107個(gè)／ml,在每個(gè)小室內(nèi)注入細(xì)胞懸液0.1ml。4w取材行石蠟切片HE染色和冷凍切片熒光檢測(cè)。 結(jié)果： (1)小鼠皮膚毛囊細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定結(jié)果 C57BL／6J乳鼠出生后3d皮膚毛囊大多已經(jīng)發(fā)育完整,5d時(shí)多數(shù)毛干已經(jīng)穿出皮膚表面。經(jīng)Dispase消化后,表皮極易從真皮上剝離,組織切片可見(jiàn)真皮含有大量毛囊,結(jié)構(gòu)完整,毛囊與周?chē)M織間隙變得疏松,真皮與表皮交界部位未見(jiàn)表皮成份殘留。真皮消化液經(jīng)過(guò)濾、低速離心、密度梯度離心后可收集大量毛囊及毛囊組織塊,經(jīng)膠原酶、胰蛋白酶消化后可獲得毛囊單細(xì)胞懸液,細(xì)胞存活率在85%以上。 流式細(xì)胞儀檢測(cè)表明,分離的毛囊細(xì)胞中含有2.5% CD34陽(yáng)性細(xì)胞,8.3%CD117陽(yáng)性細(xì)胞。原代培養(yǎng)細(xì)胞呈現(xiàn)自發(fā)聚集性生長(zhǎng)特性,隨著傳代次數(shù)增加,聚集性生長(zhǎng)特性逐漸消失。3代以后不再呈現(xiàn)聚集性生長(zhǎng)特性。聚集性生長(zhǎng)區(qū)細(xì)胞呈ALP陽(yáng)性,周?chē)?xì)胞有少量陽(yáng)性表達(dá),隨傳代次數(shù)增加ALP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)逐漸減少,4代以后的細(xì)胞無(wú)ALP陽(yáng)性表達(dá)。所有培養(yǎng)的細(xì)胞均呈α-SMA陽(yáng)性,表達(dá)穩(wěn)定,不隨傳代次數(shù)增加而變化。 (2)毛囊細(xì)胞注射移植結(jié)果 表皮細(xì)胞皮內(nèi)注射移植組3周后所有注射點(diǎn)外觀稍隆起,形成一個(gè)內(nèi)含灰白色內(nèi)容物的囊,冷凍切片熒光檢測(cè)見(jiàn)皮內(nèi)少量紅色熒光,組織切片HE染色無(wú)可見(jiàn)的毛囊結(jié)構(gòu)。足底成纖維細(xì)胞皮內(nèi)注射移植組3周后所有注射點(diǎn)均無(wú)外觀可見(jiàn)的變化,冷凍切片熒光檢測(cè)見(jiàn)皮內(nèi)密集綠色熒光,組織切片HE染色無(wú)可見(jiàn)的毛囊結(jié)構(gòu)。表皮細(xì)胞+足底成纖維細(xì)胞皮內(nèi)注射移植組3周后所有注射點(diǎn)外觀稍隆起,形成一個(gè)內(nèi)含灰白色內(nèi)容物的囊,冷凍切片熒光檢測(cè),見(jiàn)皮內(nèi)以綠色熒光為主,散在分布少量紅色熒光,組織切片HE染色無(wú)可見(jiàn)的毛囊結(jié)構(gòu)。 毛囊細(xì)胞皮內(nèi)注射移植后2d,組織切片HE染色見(jiàn)移植區(qū)形成一個(gè)皮內(nèi)囊,囊壁較厚,由大量長(zhǎng)梭形成纖維樣細(xì)胞構(gòu)成,囊內(nèi)含有大量圓形、橢圓形細(xì)胞,核大、胞質(zhì)不明顯,囊內(nèi)同時(shí)可見(jiàn)大量均質(zhì)紅染無(wú)細(xì)胞成份。囊內(nèi)側(cè)壁見(jiàn)大量細(xì)胞密集排列,散在分布排列稀疏的細(xì)胞團(tuán),細(xì)胞外基質(zhì)明顯增多,中央見(jiàn)均質(zhì)紅染的角化物,局部可見(jiàn)腺樣細(xì)胞。冷凍切片熒光檢測(cè)見(jiàn)囊內(nèi)呈密集的綠色熒光,囊壁呈稀疏的散在分布的綠色熒光。移植后4d,注射部位輕微隆起,外表呈灰色,鏡下可見(jiàn)大量再生的毛囊,毛球部呈黑色,無(wú)明顯毛干。移植后1周,注射點(diǎn)均可見(jiàn)明顯隆起,外表呈現(xiàn)黑色,鏡下可見(jiàn)大量毛囊伴有明顯的黑色毛干,局部見(jiàn)密集分布的血管,管徑增粗。移植后3周注射部位形成一個(gè)含有灰白色內(nèi)容物的囊腫,鏡下可見(jiàn)密集的黑色毛發(fā),冷凍切片熒光檢測(cè)見(jiàn)明亮綠色熒光。整個(gè)組織塊行石蠟切片HE染色,見(jiàn)囊壁較薄,結(jié)構(gòu)完整,外壁為致密的纖維組織,有粗大的血管穿行,內(nèi)襯有類(lèi)似表皮的角化上皮樣結(jié)構(gòu),囊內(nèi)含有大量均質(zhì)紅染無(wú)細(xì)胞成份,新生毛囊朝向中心,毛球部朝向外側(cè),有些毛囊周?chē)梢?jiàn)排列有序的腺樣細(xì)胞,類(lèi)似皮脂腺樣結(jié)構(gòu)。移植后6周,見(jiàn)囊內(nèi)充滿大量毛干,鏡下可見(jiàn)大量脫落的杵狀毛干及處于生期的毛囊。 表皮細(xì)胞和毛囊細(xì)胞的復(fù)合皮內(nèi)注射移植后3周,注射部位形成一個(gè)含有灰白色內(nèi)容物的囊腫,鏡下可見(jiàn)密集的毛發(fā),石蠟切片HE染色結(jié)果同毛囊細(xì)胞單獨(dú)皮內(nèi)注射移植。冷凍切片熒光檢測(cè),見(jiàn)囊內(nèi)容物以綠色熒光為主,散在分布少量紅色熒光。新生毛囊呈綠色熒光,毛乳頭部位最為明顯。 當(dāng)毛囊細(xì)胞濃度1×106個(gè)／ml時(shí),即每個(gè)注射點(diǎn)含細(xì)胞數(shù)1×105個(gè),再生毛囊的數(shù)量急劇減少,當(dāng)毛囊細(xì)胞濃度低于1×106個(gè)／ml時(shí),注射部位只會(huì)形成一個(gè)灰白色囊腫,但無(wú)新生毛囊形成。經(jīng)快速貼壁培養(yǎng)的1代、2代、3代毛囊細(xì)胞細(xì)胞皮內(nèi)注射移植后均無(wú)新生毛囊形成。 毛囊細(xì)胞皮下注射移植3周后,見(jiàn)皮下散亂分布大小不等的灰白色囊腫,新生毛囊數(shù)量少,方向雜亂。 (3)毛囊細(xì)胞與材料的復(fù)合移植結(jié)果 掃描電鏡可見(jiàn)PLGA微管內(nèi)徑1.5mm,管壁厚lmm。管壁中含大量連通的微孔,直徑10-50um。Ⅰ型膠原海綿材料孔徑較粗,直徑100-500um,與毛囊細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng)1w后可見(jiàn)有少量細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)。PLGA降解檢測(cè)表明,4w時(shí)開(kāi)始出現(xiàn)材料降解,可見(jiàn)有血管長(zhǎng)入。 毛囊細(xì)胞與Ⅰ型膠原海綿復(fù)合移植4w,組織取材行石蠟切片HE染色,可見(jiàn)少量新生毛囊結(jié)構(gòu)形成,毛干不明顯,方向雜亂,冷凍切片呈明亮綠色熒光。毛囊細(xì)胞與PLGA微管復(fù)合移植4w,見(jiàn)微管開(kāi)始降解,管腔塌陷,表面有新生血管長(zhǎng)入,但未見(jiàn)新生毛囊。 (4)毛囊細(xì)胞小室移植結(jié)果 小室單獨(dú)行開(kāi)放創(chuàng)面移植1w,見(jiàn)創(chuàng)面收縮明顯,小室邊緣已經(jīng)開(kāi)始脫離皮膚,去除小室后3w,見(jiàn)直徑1cm的圓形創(chuàng)面收縮至直徑2mm。在小室中加入毛囊細(xì)胞,開(kāi)放創(chuàng)面移植后1w,見(jiàn)創(chuàng)面無(wú)明顯收縮,小室中央見(jiàn)淡紅色半透明組織形成,局部可見(jiàn)黑色沉積物。4w后小室周邊創(chuàng)面已愈合,創(chuàng)面無(wú)收縮,表面見(jiàn)大量新生黑色毛發(fā)垂直于皮膚表面生長(zhǎng)。石蠟切片HE染色見(jiàn)皮膚結(jié)構(gòu)發(fā)育完整,表皮、真皮層次清晰,絕大多數(shù)毛囊均垂直于皮膚表面生長(zhǎng),毛囊上、中1／3交界處可見(jiàn)皮脂腺,但未見(jiàn)立毛肌結(jié)構(gòu)。冷凍切片熒光檢測(cè),見(jiàn)毛發(fā)生長(zhǎng)區(qū)的表皮及毛囊均呈明亮的綠色熒光,毛囊周?chē)慕M織無(wú)明顯熒光。 毛囊細(xì)胞封閉小室移植4w,打開(kāi)小室,底面可見(jiàn)新生毛囊平行于皮膚表面生長(zhǎng),方向排列雜亂,伴有大量新生血管。冷凍切片熒光檢測(cè),見(jiàn)毛囊及周?chē)M織均呈明亮的綠色熒光。 結(jié)論 (1)本研究首次采用小鼠皮膚制備了毛囊單細(xì)胞懸液。其細(xì)胞成份主要為毛乳頭細(xì)胞,含有2.5% CD34陽(yáng)性的毛囊干細(xì)胞,8.3%CD117陽(yáng)性的黑色素細(xì)胞。 (2)本研究中所分離的毛囊細(xì)胞裸鼠皮內(nèi)注射能夠重新進(jìn)行發(fā)育,形成大量結(jié)構(gòu)完整的正常毛囊和皮脂腺。這種毛囊的再生依賴于所移植細(xì)胞的密切接觸。 (3)Ⅰ型膠原海綿和PLGA微管不支持毛囊細(xì)胞的定向重建。 (4)毛囊的發(fā)育空間為再生毛囊的定向提供了可能性,而氣液界面則決定了最終新生毛囊的方向。毛囊細(xì)胞開(kāi)放小室移植可以實(shí)現(xiàn)新生毛囊的正常體表分布,構(gòu)建結(jié)構(gòu)、功能完整的皮膚組織,與注射移植法相比,更具有臨床應(yīng)用的前景。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R758.7

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8 萬(wàn)睿;;毛發(fā)移植:讓毛發(fā)重新“長(zhǎng)”出來(lái)[J];家庭醫(yī)學(xué)(下半月);2011年09期

9 鄭衛(wèi)生;;謹(jǐn)防夏天常見(jiàn)皮膚病[J];農(nóng)家參謀;2011年07期

10 康深松;張棟益;謝峰;李磊;張正文;翟宏峰;丑海燕;;基于病理定位的腋窩橫皺襞切口大汗腺修剪根治腋臭[J];醫(yī)藥論壇雜志;2011年14期

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1 仵敏娟;郭曉燦;劉厚奇;;人胚源性間充質(zhì)干細(xì)胞分化為毛囊過(guò)程中細(xì)胞遷移問(wèn)題的研究[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2011年年會(huì)論文文摘匯編[C];2011年

2 羅洋;郝飛;杜華;鞠英;王潔;;人毛乳頭細(xì)胞條件培養(yǎng)液治療女性雄激素源性脫發(fā)的臨床觀察[A];2011全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

3 呂中法;李偉;;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2在人毛乳頭細(xì)胞中的表達(dá)及功能研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第16次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)摘要集[C];2010年

4 李偉;呂中法;滿孝勇;李春明;鄭敏;;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2在人毛乳頭細(xì)胞中的表達(dá)及功能研究[A];2009年浙江省皮膚病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

5 李中明;范衛(wèi)新;;采用體外培養(yǎng)毛乳頭細(xì)胞誘導(dǎo)毛囊再生的動(dòng)物模型概況[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

6 馬會(huì)云;陳學(xué)榮;殷致宇;汪晨;肖益民;馬春燕;;中西醫(yī)結(jié)合治療毛囊閉鎖三聯(lián)征一例[A];2011全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

7 李梅云;范衛(wèi)新;;HIF-1α在人毛囊及體外培養(yǎng)的人毛乳頭細(xì)胞中的表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第14次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

8 楊鵬高;方勇;;毛囊干細(xì)胞的研究及應(yīng)用進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)燒傷外科學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

9 李偉;周炯;陳佳琦;李春明;蔡綏R，

本文編號(hào)：2351652