【摘要】：目的體外觀察sh RNA靶向干擾硒蛋白V(SELV)基因?qū)θ藧盒院谏亓鯝375細胞生物學行為的影響。方法構(gòu)建以SELV為靶基因的sh RNA表達載體,將其轉(zhuǎn)染至體外培養(yǎng)的A375細胞中,并利用嘌呤霉素篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株。采用實時熒光定量反轉(zhuǎn)錄PCR(q RT-PCR)和Western blotting法分別檢測轉(zhuǎn)染細胞SELV的m RNA和蛋白表達水平;采用MTT法檢測轉(zhuǎn)染后細胞的增殖能力,并利用流式細胞術檢測轉(zhuǎn)染細胞的細胞周期和早期凋亡率。采用q RT-PCR和ELISA法對轉(zhuǎn)染細胞的SELV功能相關因子含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族9(ASB9)和O-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶(OGT)的表達情況進行檢測。結(jié)果成功構(gòu)建靶向SELV的sh RNA重組質(zhì)粒,并獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的A375細胞。轉(zhuǎn)染后SELV的表達顯著降低(P0.05),細胞增殖和細胞周期未發(fā)生明顯變化,但細胞早期凋亡率顯著增加(P0.05)。而轉(zhuǎn)染細胞的ASB9和OGT表達量也明顯增加(P0.05)。結(jié)論靶向SELV的sh RNA重組質(zhì)粒能夠下調(diào)SELV在A375細胞中的表達,提高細胞早期凋亡率,并導致ASB9和OGT的表達升高。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of sh RNA targeted interference selenoprotein V (SELV) gene on the biological behavior of human malignant melanoma cell line A375. Methods the sh RNA expression vector targeting SELV gene was constructed and transfected into A375 cells in vitro. The stable transfection cell line was screened by purine mycin. The expression levels of m RNA and protein in transfected SELV cells were detected by real-time quantitative reverse transcription PCR (q RT-PCR) and Western blotting method respectively. The proliferative ability of transfected cells was detected by MTT assay, and the cell cycle and early apoptosis rate of transfected cells were detected by flow cytometry. Q RT-PCR and ELISA methods were used to detect the expression of ASB9 and Oacetylglucosaminyltransferase (OGT) (OGT) in SELV functional related factor containing anchor protein repeats (ASB9) and Oacetylglucosaminyltransferase (OGT) in transfected cells. Results the sh RNA recombinant plasmid targeting SELV was successfully constructed and stable transfected A375 cells were obtained. After transfection, the expression of SELV decreased significantly (P0.05), cell proliferation and cell cycle did not change significantly, but the rate of early apoptosis increased significantly (P0.05). The expression of ASB9 and OGT in transfected cells was also significantly increased (P0.05). Conclusion sh RNA recombinant plasmid targeting SELV can down-regulate the expression of SELV in A375 cells, increase the rate of early apoptosis and increase the expression of ASB9 and OGT.
【作者單位】： 上海交通大學公共衛(wèi)生學院;深圳市慢性病防治中心;
【基金】：supported financially by grants from the National Natural Science Foundation of China (No. 81172669, 81202239 and 81102123)
【分類號】：R739.5

【共引文獻】

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