【摘要】： 銀屑病等炎癥性皮膚病是一組與免疫紊亂密切相關的疾病,多種免疫細胞和細胞因子共同參與了炎癥性皮膚病的發(fā)病過程。細胞因子復雜的網絡系統以及相互調控機制均提示單一治療靶點的藥物已不適合此類疾病的治療,目前多靶點藥物在炎癥性皮膚病治療方面的研究日益成為重點。 TLR-4是Toll樣受體家族的重要成員,近來研究證實TLR-4與銀屑病中天然免疫紊亂的現象相關聯,樹突狀細胞以及巨噬細胞在銀屑病炎癥反應過程中起到重要的調節(jié)作用。以樹突狀細胞及巨噬細胞作為銀屑病治療靶點的前景也越來越明朗。THP-1細胞是利用白血病患者血液中的單核細胞建立的細胞株,能夠分泌炎性細胞因子,并且經誘導后可轉變?yōu)榫奘杉毎HP-1細胞是體外研究人單核-巨噬細胞功能的良好替代細胞,已在相關研究中廣泛使用。研究相關化合物對單核細胞TLR-4信號傳導通路的干預作用,對銀屑病等炎癥性皮膚病的治療及探究其抗炎-免疫機理具有一定意義。 姜黃素是姜黃的主要活性成分,其藥理作用廣、毒性低具有廣闊的藥用前景姜黃素的多種藥理活性提示其具有作為治療銀屑病等炎癥性皮膚病藥物的潛力；鹽酸13-己基小檗堿(HB-13)和鹽酸13-己基巴馬汀(HP-13)是具有顯著抗炎作用的化合物,先前實驗已經證實：HB-13和HP-13對角質形成細胞中INF-y信號轉導途徑的多個環(huán)節(jié)有明顯抑制作用。本研究以人單核細胞株THP-1細胞為靶細胞,探究姜黃素、HB-13和HP-13三個化合物對人單核-巨噬細胞TLR-4信號轉導通路中相關信號分子及其下游因子表達的干預作用。 第一章化合物對小鼠非特異性炎癥反應的影響 采用佛波酯(TPA)致小鼠鼠耳腫脹非特異急性炎癥模型,檢測姜黃素、HB-13、HP-13局部外用給藥和系統給藥的體內抗炎活性。結果顯示：小鼠腹腔注射姜黃素(100mg/kg),HB-13(10mg/kg),HP-13(20mg/kg)對小鼠未產生無明顯毒性反應。局部外用姜黃素(0.30 mg)、HB-13(0.38 mg)、HP-13(0.36 mg),以及腹腔注射姜黃素(50、100mg/kg)、HB-13(5、10mg/kg)、HP-13(10、20mg/kg)對TPA誘導的小鼠鼠耳腫脹急性炎癥反應有明顯的抑制作用,抑制率均達到50%以上。本章結果表明：無論局部外用或系統給予一定劑量的姜黃素、HB-13和HP-13均能產生明顯的抗炎作用。 第二章化合物對THP-1細胞TLR-4信號傳導通路中信號分子表達的影響 通過體外培養(yǎng)的THP-1細胞,用外源性LPS作為刺激劑,用RT-PCR法檢測LPS刺激THP-1細胞后TLR-4信號傳導通路中IRAK1、TRAF6、NF-κB、TNF-α、IL-1p等信號分子mRNA表達情況,同時研究化合物對LPS刺激THP-1細胞后上述目的基因mRNA表達的影響。結果顯示：1μg/mL LPS處理THP-1細胞4小時后,可明顯上調TRAF6、IRAK1、NF-κB、TNF-α、IL-1βmRNA的表達。藥物影響試驗結果表明,姜黃素(25、50μg/ml)、HB-13 (0.39、0.78μg/ml)和HP-13(1.56、3.12μg/ml)可以明顯抑制LPS誘導的上述目的基因mRNA的高表達,抑制率可達到90%以上。本章結果表明：1μg/ml LPS處理THP-1細胞4小時可形成TLR-4信號通路相關信號蛋白的體外誘導高表達模式,姜黃素、HB-13、HP-13均可干預THP-1細胞TLR-4通路中IRAK1和TRAF6基因的轉錄,進而下調下游NF-κB mRNA的表達,最終影響下游細胞因子TNF-α和IL-1βmRNA的表達。 第三章化合物對THP-1細胞TLR-4信號傳導通路下游分子表達的影響 ELISA法測定化合物對LPS刺激THP-1細胞后TNF-α、IL-8、IL-1β分泌的影響。結果顯示：未經刺激的THP-1細胞低水平表達TNF-α、IL-8、IL-1β,1μg/mL LPS刺激24h后,TNF-α、IL-8、IL-1β的表達顯著上升。姜黃素、HB-13和HP-13均能明顯抑制LPS刺激引起的TNF-α、IL-8和IL-1β的表達(P0.05,P0.01),IC50值約為：TNF-α：姜黃素：30.4671μg/mL, HB-13:0.2924μg/mL, HP-13:2.0182μg/mL; IL-8:姜黃素：19.0561μg/mL, HB-13:0.5132μg/mL, HP-13:1.7766μg/mL; IL-1β:姜黃素：32.9003μg/mL, HB-13:0.4547μg/mL, HP-13:2.3403μg/mL。本章結果表明：用1μg/mLLPS刺激24h可使THP-1細胞中TNF-α、IL-8、IL-1β表達提高,姜黃素、HB-13和HP-13對THP-1單核細胞TLR-4信號傳導通路中下游控制的炎癥因子的蛋白表達有明顯的干預功能。
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【學位授予單位】：中國協和醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R758.63

【參考文獻】

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本文編號：2343202