【摘要】：觀察研究5-氨基酮戊酸光動力療法(5-aminolevulinic acid photodynamic therapy, ALA-PDT)對體外培養(yǎng)的健康人及銀屑病患者外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)的生物效應(yīng),探討ALA-PDT治療銀屑病的免疫作用機(jī)制、可行性及其最佳的治療參數(shù),為這一療法的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 l、分離和培養(yǎng)銀屑病患者及健康人外周血單個核細(xì)胞。 2、MTT比色法檢測健康人PBMCs分別經(jīng)0.1 mmol/L、0.6 mmol/L 1.2mmol/L、1.8 mmol/L、3.6mmol/L ALA避光孵育0.5h、1h、3h、5hPDT后的存活情況,并篩選出最佳藥物濃度和最適避光孵育時間。 3、Annexin V/PI雙染色法結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測健康人PBMCs分別經(jīng)0.1 mmol/L、0.6 mmol/L 1.2mmol/L、1.8mmol/L、3.6mmol/L ALA避光孵育0.5h、1h、3h、5hPDT后的凋亡情況,進(jìn)一步驗(yàn)證最佳藥物濃度和最適避光作用時間。 4、透射電子顯微鏡下觀察健康人PBMCs經(jīng)0.6mmol/L ALA避光孵育1h PDT后細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。 5、RT-PCR檢測ALA-PDT對銀屑病患者及健康人PBMCs表達(dá)Th1、Th2相關(guān)細(xì)胞因子的影響。 1、MTT法顯示,健康人PBMCs分別經(jīng)0.1 mmol/L、0.6mmol/L、1.2mmol/L、1.8mmol/L 3.6mmol/LALA避光孵育0.5h、1h、3h和5h后PDT,結(jié)果以0.6mmol/L ALA避光孵育1h的ALA-PDT組細(xì)胞存活率最低,與空白對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 2、與空白對照組相比,健康人PBMCs經(jīng)0.6mmol/L ALA避光孵育1h PDT后明顯凋亡Annexin V/PI染色法結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測顯示該組細(xì)胞早期凋亡率為8.5±0.5%(P0.05)。 3、透射電子顯微鏡下觀察到健康人PBMCs經(jīng)0.6mmol/L ALA避光孵育1h PDT后呈現(xiàn)典型凋亡改變,而空白對照組未見凋亡細(xì)胞。 4、RT-PCR法檢測顯示尋常型銀屑病患者PBMCs的IFN-γ、TNF-αmRNA表達(dá)量與健康人相比顯著升高,經(jīng)0.6 mmol/L ALA避光孵育1h PDT后表達(dá)量顯著下降,其中IFN-ymRNA表達(dá)量降至正常水平；患者PBMCs的IL-4 mRNA表達(dá)量較健康人顯著降低,經(jīng)ALA-PDT后顯著升高,但未達(dá)到健康人水平；患者PBMCs的IL-10mRNA表達(dá)量較健康人略有減低,經(jīng)ALA-PDT后有所升高,但均無統(tǒng)計學(xué)意義。 1、健康人PBMCs經(jīng)0.6mmol/L ALA避光孵育1h后PDT為最佳藥物濃度和最適宜避光時間。 2、健康人PBMCs經(jīng)0.6mmol/L ALA避光孵育1h后PDT可明顯促進(jìn)人外周血單個核細(xì)胞的凋亡。 3、銀屑病患者外周血單個核細(xì)胞經(jīng)ALA-PDT后由Thl優(yōu)勢應(yīng)答向Th1/Th2平衡方向轉(zhuǎn)變。
[Abstract]:To observe the effects of 5-aminolevulinic acid photodynamic therapy (5-aminolevulinic acid photodynamic therapy, ALA-PDT) on (peripheral blood mononuclear cells, PBMCs) of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in healthy subjects and psoriatic patients in vitro. To explore the immunological mechanism, feasibility and optimal treatment parameters of ALA-PDT in the treatment of psoriasis, and to provide a theoretical basis for the clinical application of this therapy. L, isolation and culture of peripheral blood mononuclear cells in patients with psoriasis and healthy persons. 2MTT colorimetric assay was used to detect the survival of PBMCs in healthy persons after 0. 1 mmol/L,0.6 mmol/L 1. 2 mmol / L 1. 8 mmol/L,3.6mmol/L ALA incubated with 0. 5 mmol/L,0.6 mmol/L, 1 h, 1 h, 3 h and 5 h PDT, respectively. The best drug concentration and the best incubation time without light were screened out. 3Annexin V/PI double staining and flow cytometry were used to detect the apoptosis of PBMCs in healthy persons after incubated with 0.1 mmol/L,0.6 mmol/L 1.2 mmol / L 1.8mmol / L ALA for 0.5 h and 3 h / L ALA for 5 h respectively. To further verify the optimal concentration of the drug and the optimal time to avoid light. 4. The ultrastructural changes of PBMCs cells were observed under transmission electron microscope (TEM) after being incubated with 0.6mmol/L ALA for 1 h without light for 1 h. The effect of ALA-PDT on the expression of Th1,Th2 related cytokines in PBMCs of psoriatic patients and healthy persons was detected by RT-PCR. PBMCs was incubated with 0. 1 mmol/L,0.6mmol/L,1.2mmol/L,1.8mmol/L 3.6mmol/LALA for 0. 5 mmol/L,0.6mmol/L,1.2mmol/L,1.8mmol/L 3.6mmol/LALA for 3 h and 5 h for PDT, respectively. Results the survival rate of ALA-PDT treated with 0.6mmol/L ALA for 1 h was the lowest, which was significantly different from that of control group (P0.05). 2Compared with the blank control group, the early apoptosis rate of PBMCs was 8.5 鹵0.5% (P0.05) after being incubated with 0.6mmol/L ALA for 1 h without light for 1 h. The results of Annexin V/PI staining and flow cytometry showed that the apoptosis rate was 8.5 鹵0.5% (P0.05). 3. The typical apoptotic changes of PBMCs were observed under transmission electron microscope (TEM) after being incubated with 0.6mmol/L ALA for 1 h, but no apoptotic cells were found in the blank control group. 4 RT-PCR assay showed that the expression of IFN- 緯 and TNF- 偽 mRNA in PBMCs of psoriasis vulgaris was significantly higher than that in healthy persons, and the expression of PDT decreased significantly after 0. 6 mmol/L ALA exposure to light for 1 h. The expression of IFN-ymRNA decreased to normal level. The expression of IL-4 mRNA in patients with PBMCs was significantly lower than that in healthy subjects, but increased significantly after ALA-PDT, but did not reach the level of healthy people. The expression of IL-10mRNA in patients with PBMCs was slightly lower than that in healthy subjects and increased after ALA-PDT, but there was no statistical significance. 1. The best drug concentration and optimum time for PBMCs were 0.6mmol/L ALA exposed to light for 1 h. 2. The apoptosis of human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) could be promoted by PDT after 1 hour of 0.6mmol/L ALA incubation with 0.6mmol/L ALA. 3. The peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of psoriatic patients changed from Thl dominant response to Th1/Th2 balance after ALA-PDT.
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R758.63

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本文編號：2320033