【摘要】：目的：監(jiān)測(cè)黑色素瘤荷瘤小鼠脾臟T細(xì)胞亞群隨時(shí)間的數(shù)量變化，可為評(píng)估臨床腫瘤患者的免疫狀態(tài)、判斷腫瘤復(fù)發(fā)、病人預(yù)后、以及臨床療效提供依據(jù)，評(píng)估預(yù)后有重要的臨床意義。 方法：從120只條件均等的健康小鼠中選出6只正常小鼠作為基礎(chǔ)值測(cè)定，其余114只小鼠隨機(jī)平分為2組，荷瘤組（A組，57只）和空白(PBS)組（B組，57只）。于發(fā)現(xiàn)出瘤當(dāng)天（D_0），從A組隨機(jī)選取5只測(cè)量并繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線。對(duì)于A組剩余小鼠和B組小鼠，自D_0當(dāng)日（含D_0）開始，每隔5天各隨機(jī)選出6只小鼠處死、取脾，制備單細(xì)胞懸液，行流式細(xì)胞（FACS）檢測(cè)，確定CD3+T、CD4+T、CD8+T、初始T細(xì)胞在脾淋巴細(xì)胞懸液中所占比例，及CD4+T/CD8+T比值，直至荷瘤曲線觀測(cè)組小鼠或A組剩余小鼠中出現(xiàn)半數(shù)以上死亡時(shí)結(jié)束觀察。 結(jié)果： 1CD+3T淋巴細(xì)胞所占比例的動(dòng)態(tài)變化：①空白組與荷瘤組相比，在D_0（U=4.500P0.05）、D_5(U=0.000P0.05)、D10(U=0.000P0.05)、D_(15)(U=0.000P0.05)、D_(20)(U=0.000P0.05)、D_(25)(U=0.000P0.05)之間均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表明CD+3T的數(shù)量隨荷瘤天數(shù)的延長(zhǎng)，空白組明顯高于荷瘤組；②空白組內(nèi)，正常小鼠、D_0、D_5、D_(10)、D_(15)、D_(20)、D_(25)之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=4.960P=0.001），其中正常小鼠、D_0、D_5、D10、D_(15)分別與D_(20)、D_(25)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05），正常、D_0、D_5、D10、D_(15)相互之間，D_(20)與D_(25)之間差異均無統(tǒng)計(jì)意義（P0.05），表現(xiàn)CD+3T淋巴細(xì)胞的數(shù)量在D_0和D_(15)之間基本不變，為64.7，D_(15)之后CD+3T淋巴細(xì)胞的數(shù)量隨時(shí)間呈下降趨勢(shì)，以17.6%的下降率降為D_(25)時(shí)的53.4。③荷瘤組內(nèi)，正常小鼠、D_0、D_5、D_(10)、D_(15)、D_(20)、D_(25)相互之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=3397.196P0.05），其中任何兩者之間均有差異（P0.05），表現(xiàn)CD+3T淋巴細(xì)胞數(shù)量隨時(shí)間呈下降趨勢(shì)，由D_0時(shí)的61.6，降為D_(25)時(shí)的7.9，下降率為87.2%。 2CD+4T淋巴細(xì)胞所占比例的動(dòng)態(tài)變化：①空白組與荷瘤組相比，于D_0時(shí)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=-0.036P=0.972），D_5、D_(10)、D_(15)、D_(20)、D_(25)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=-14.933P0.05、U=0.000P0.05、t=-37.860P0.05、U=0.000P0.05、U=0.000P0.05），表明CD+4T的數(shù)量隨時(shí)間延長(zhǎng)，空白組明顯高于荷瘤組；②空白組中，正常小鼠、D_0、D_5、D_(10)、D_(15)、D_(20)、D_(25)之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=3397.196P0.05），其中正常小鼠、D_0、D_5、D10、D_(15)與D_(20)、D_(25)分別相比，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異存在（P0.05），D_(20)、D_(25)之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05），正常、D_0、D_5、D10、D_(15)之間差異均無統(tǒng)計(jì)意義（P0.05），提示CD+4T淋巴細(xì)胞數(shù)量在D_0和D_(15)之間基本不變，為38.7，D_(15)之后才以27.9%的下降率降為D_(25)時(shí)的27.9；③荷瘤組中，正常小鼠、D_0、D_5、D_(10)、D_(15)、D_(20)、D_(25)之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=160.370P0.05），其中正常小鼠、D_0分別與D_5、D10、D_(15)、D_(20)、D_(25)相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05），正常小鼠與D_0之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），提示CD+4T淋巴細(xì)胞數(shù)量在D_0之后出現(xiàn)下降趨勢(shì)，由D_0時(shí)的38.9降為D_(25)時(shí)的3.1，下降率為92.0%。 3CD+8T淋巴細(xì)胞所占比例的動(dòng)態(tài)變化：①空白組與荷瘤組相比，于D_0時(shí)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=0.645P=0.533），，D_5、D_(10)、D_(15)、D_(20)、D_(25)差異顯著（U=3.000P0.05、U=0.000P0.05、t=-8.131P0.05、t=-16.059P0.05、U=3.000P0.05），表明CD+8T淋巴細(xì)胞的數(shù)量隨時(shí)間延長(zhǎng)，空白組明顯高于荷瘤組；②空白組中，不同時(shí)間的CD+8T的數(shù)量差異無統(tǒng)計(jì)意義（F=0.434P=0.851），表明隨時(shí)間延長(zhǎng)，趨勢(shì)比較平穩(wěn)，CD+8T淋巴細(xì)胞的數(shù)量由D_0時(shí)的21.6降為D_(25)時(shí)的20.5，下降率僅為5.1%。③荷瘤組中，正常小鼠、D_0、D_5、D_(10)、D_(15)、D_(20)、D_(25)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=76.815P0.05），其中正常小鼠、D_0分別與D_5、D_(10)、D_(15)、D_(20)、D_(25)相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05），D_5、D_(10)分別與D_(15)、D_(20)、D_(25)相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）；正常、D_0二者之間、D_5、D_(10)二者之間、D_(15)、D_(20)、D_(25)相互之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05），表明CD+8T淋巴細(xì)胞的數(shù)量隨時(shí)間延長(zhǎng)，呈下降趨勢(shì)，且D_(25)時(shí)為最低值，由D_0時(shí)的22.2降為D_(25)時(shí)的5.2，下降率為76.6%。 4CD+4T/CD+8T比值的變化：①空白組與荷瘤組相比，于D_0時(shí)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（U=12.500P=0.363），D_5、D10、D_(15)、D_(20)、D_(25)差異顯著（U=0.000P0.05、t=-16.971P0.05、t=-16.483P0.05、t=-12.562P0.05、U=0.000P0.05），說明隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，空白組CD+4T/CD+8T比值明顯高于荷瘤組；②空白組中，正常小鼠、D_0、D_5、D_(10)、D_(15)、D_(20)、D_(25)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=7.128P0.05），其中正常小鼠、D_0、D_5、D_(10)、D_(15)之間分別與D_(20)、D_(25)相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05），D_(20)、D_(25)相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05），正常、D_0、D_5、D_(10)、D_(15)之間差異均無統(tǒng)計(jì)意義（P0.05），說明CD+4T/CD+8T比值在D_0到D_(15)的范圍內(nèi)，保持1.8不變，從D_(15)以后，該值以22.2%的下降率降為D_(25)時(shí)的1.4；③荷瘤組中，正常小鼠、D_0、D_5、D_(10)、D_(15)、D_(20)、D_(25)總的來說有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=97.348P0.05），其中正常、D_0分別與D_5、D_(10)、D_(15)、D_(20)、D_(25)之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05），正常小鼠與D_0無顯著性差異（P0.05），D_5、D_(10)、D_(15)、D_(20)、D_(25)之間差異不明顯（P0.05），提示該比值逐漸下降，甚至倒置，從D_0時(shí)的1.8降為D_(25)時(shí)的0.6。 5初始T細(xì)胞所占比例動(dòng)態(tài)變化：①空白組與荷瘤組相比，于D_0時(shí)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=-0.200P=0.846），D_5、D_(10)、D_(15)、D_(20)、D_(25)差異顯著（U=0.000P0.05、U=0.000P0.05、t=-18.543P0.05、U=0.000P0.05、U=0.000P0.05），可以認(rèn)為，初始T淋巴細(xì)胞的數(shù)量隨時(shí)間逐漸延長(zhǎng)，空白組明顯高于荷瘤組；②空白組中，正常小鼠、D_0、D_5、D10、D_(15)、D_(20)、D_(25)之間存在差異（F=8.865P0.05），其中正常、D_0、D_5、D10、D_(15)分別與D_(20)、D_(25)相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05），D_(20)與D_(25)相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05），正常、D_0、D_5、D10、D_(15)之間差異不顯著（P0.05），說明初始T細(xì)胞的數(shù)量在D_0和D_(15)之間，由34.1下降到32.2，下降率僅為5.4%；該比例在D_(15)至D_(25)之間，由32.2減少為21.7，下降率為32.6%；③荷瘤組中，正常、D_0、D_5、D_(10)、D_(15)、D_(20)、D_(25)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=178.995P0.05），其中任何兩者之間均有差異（P0.05），提示初始T淋巴細(xì)胞數(shù)量隨時(shí)間呈下降趨勢(shì)，從D_0時(shí)的34.1降為D_(25)時(shí)的2.5，下降率為92.7%。 結(jié)論： 1荷瘤組小鼠，隨時(shí)間推移（D+0到D_(25)），其脾臟中CD3T、CD+4T、CD+8T占脾淋巴細(xì)胞懸液百分率都呈下降趨勢(shì)，且三者的下降幅度（下降率）排序?yàn)椋篊D+++4T淋巴細(xì)胞CD3T淋巴細(xì)胞CD8T淋巴細(xì)胞；CD+4T/CD+8T下降趨勢(shì)明顯，表明黑色素腫瘤逐漸生長(zhǎng)，小鼠的免疫功能逐漸下降；同時(shí)，初始T細(xì)胞比例也大幅下降。 2空白組小鼠，隨時(shí)間推移（D_0到D_(25)），CD+3T淋巴細(xì)胞、CD+4T淋巴細(xì)胞、CD+8T淋巴細(xì)胞占脾淋巴細(xì)胞懸液百分率都呈現(xiàn)先保持相對(duì)穩(wěn)定后逐漸下降的趨勢(shì)，D_(15)為這些比例由穩(wěn)定跨向下降的轉(zhuǎn)折時(shí)間點(diǎn)，三者后期（D_(15)以后）的下降幅度（下降率）排序?yàn)椋篊D++4T淋巴細(xì)胞CD3T淋巴細(xì)胞CD+8T淋巴細(xì)胞；CD4+T/CD+8T先保持相對(duì)穩(wěn)定，D_(15)后呈現(xiàn)明顯的下降趨勢(shì)；同時(shí)，初始T細(xì)胞比例也呈現(xiàn)先保持相對(duì)穩(wěn)定，D_(15)后才大幅下降的趨勢(shì)。 3荷瘤組與空白組小鼠相比，二者的CD3+T、CD4+T、CD8+T、初始T細(xì)胞在脾淋巴細(xì)胞懸液中所占比例，及CD4+T/CD8+T比值均隨時(shí)間的增加而逐漸下降，但下降幅度空白組小于荷瘤組，這表明，荷瘤組和空白組小鼠的免疫功能都隨著年齡增長(zhǎng)而下降，但荷瘤組的免疫功能下降地更快。 4流式細(xì)胞技術(shù)（FACS）能夠準(zhǔn)確檢測(cè)外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化，為臨床過繼免疫治療腫瘤提供個(gè)體化指導(dǎo)，可廣泛用于臨床。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R739.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2275265