【摘要】：背景： 銀屑病是臨床最常見的慢性炎癥性皮膚病之一,其發(fā)病為多因素參與、多基因改變及多階段發(fā)展的病變過程,隨著社會的發(fā)展與環(huán)境的改變,本病發(fā)病率逐年增高,因其發(fā)病原因不明,機(jī)制不清,治療較為棘手,易于反復(fù)發(fā)生。銀屑病發(fā)病機(jī)制的研究一直是皮膚科研究的重點(diǎn),近年來,隨著國內(nèi)外學(xué)術(shù)界在小分子RNA領(lǐng)域研究的逐步深入,發(fā)現(xiàn)多種miRNA在皮膚生理病理等過程中發(fā)揮了極其重要的作用,部分特定的miRNA在某些皮膚病皮損組織中有異常表達(dá),如皮膚腫瘤、銀屑病、特應(yīng)性皮炎等。同時從基因?qū)用嫣接戙y屑病的早期診斷、治療及預(yù)防等課題已成為業(yè)界今后研究的主要方向之一。 目的： 運(yùn)用基因芯片技術(shù)檢測銀屑病皮損miRNA表達(dá)譜,篩選其與正常人皮膚組織差異性表達(dá)的miRNA,并對差異miRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測及靶基因功能富集分析,構(gòu)建銀屑病差異表達(dá)miRNA與靶基因及基因功能調(diào)控網(wǎng)絡(luò),為銀屑病基因?qū)用鏅C(jī)制研究提供依據(jù),為銀屑病早期診治提供思路,為下一步開展miRNA靶基因功能及分子標(biāo)志物研究提供線索。同時研究中藥竹黃顆粒劑治療銀屑病患者前后皮損miRNA及血清細(xì)胞因子的表達(dá)差異,探索中醫(yī)藥治療銀屑病的作用機(jī)制,為中醫(yī)藥防治銀屑病提供客觀依據(jù)。 方法： 招募20名銀屑病患者和15名健康志愿者,采集皮膚組織標(biāo)本并用Trizo法提取RNA,運(yùn)用Affymetrix miRNA2.0芯片檢測正常人皮膚組織與銀屑病患者典型皮損組織中miRNA表達(dá)譜,運(yùn)用聚類分析軟件(cluster3.0)分析差異表達(dá)的miRNA,采用實(shí)時熒光定量PCR方法驗(yàn)證部分差異miRNA。通過miRNA靶標(biāo)基因數(shù)據(jù)庫(miRGen3.0)預(yù)測靶基因,基于Gene Ontology數(shù)據(jù)庫,對靶基因進(jìn)行功能富集分析。20名銀屑病志愿者進(jìn)行2個月竹黃顆粒劑治療后再次采集原發(fā)皮損樣本,進(jìn)行miRNA芯片檢測,分析治療前后miRNA表達(dá)差異及意義,同時采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測治療前后血清細(xì)胞因子并比較其差異性。 結(jié)果： 銀屑病皮損組織中明顯上調(diào)的miRNA有55個,明顯下調(diào)的miRNA有12個,5個特異性miRNA (miR-31、miR-155、miR-192、miR-139-5p.miR-497)靶基因預(yù)測,得出AIRE、ADRA1D、AREG、IKBKE、POU6F1、BUB1B、 SMC3、SOCS1、DGKH、MAP3K12、OTC、REV3L、SLC26A6等33個關(guān)鍵基因。功能分析得出其調(diào)控了促分裂素原活化蛋白激酶信號通路(MAPK signaling pathway)、Wnt信號通路(Wnt signaling pathway)等30項(xiàng)主要的信號通路,主要通過調(diào)節(jié)炎癥發(fā)生、細(xì)胞凋亡、血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、新血管生成、體液免疫、蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)、JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與激活、有絲分裂細(xì)胞周期等,從而參與銀屑病的發(fā)病。同時采用竹黃顆粒劑治療2月后,總有效率為80%,PASI評分較治療前有顯著下降,顯示對患者血清中IL-1、IL-2、IL-8、IL-10、IL-18、IFN-γ、TNF-α等細(xì)胞因子有明顯下調(diào)作用,使之趨近于正常對照組。芯片結(jié)果顯示對miR-192、miR-194、miR-3175、miR-18a、miR-629、miR-21、miR-25、miR-100、miR-199a-5p、miR-99a、miR-409-3p miR-125b、miR-99b等差異miRNA有顯著雙向調(diào)節(jié)作用。 結(jié)論： 1.miR-31等67個差異性miRNAs參與了銀屑病的發(fā)病并扮演著重要角色； 2.差異性miRNA所調(diào)控的基因可能通過影響MAPKs等信號通路從而參與銀屑病的發(fā)病,在細(xì)胞增殖、炎癥形成、血管增生等方面構(gòu)成影響； 3.miR-31等特異性miRNA有望成為銀屑病早期診斷的潛在標(biāo)記物和治療靶點(diǎn)； 4.中藥竹黃顆粒劑治療銀屑病療效顯著,對有些差異miRNA有雙向調(diào)節(jié)作用,為中醫(yī)藥防治銀屑病提供了客觀依據(jù)； 5.研究結(jié)果為下一步開展銀屑病相關(guān)miRNA靶基因功能及分子標(biāo)志物研究提供了線索。
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【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R758.63

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 孫少馨;消銀解毒顆粒治療尋常型銀屑病臨床研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

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本文編號：2270347