本文選題：神經(jīng)菌毛素單克隆抗體 + 黑色素瘤細(xì)胞��； 參考：《中國(guó)藥學(xué)雜志》2014年20期

【摘要】：目的研究靶向神經(jīng)菌毛素1(neuropilin1,NRP1)單克隆抗體(NRP1 mAb)對(duì)黑色素瘤細(xì)胞B16F10增殖、遷移和凋亡的影響,并探討其作用機(jī)制。方法 SDS-PAGE檢測(cè)神經(jīng)菌毛素1單克隆抗體的純度;蛋白質(zhì)印跡法、免疫熒光和免疫組化檢測(cè)神經(jīng)菌毛素1單克隆抗體的特異性和B16F10細(xì)胞及其移植瘤上神經(jīng)菌毛素1的表達(dá);四甲基偶氮唑藍(lán)法、劃痕實(shí)驗(yàn)、Annexin V-FITC/PI雙標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)等方法檢測(cè)不同濃度神經(jīng)菌毛素1單克隆抗體對(duì)黑色素瘤細(xì)胞增殖、遷移和凋亡的影響;蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)神經(jīng)菌毛素1單克隆抗體作用后細(xì)胞內(nèi)相關(guān)信號(hào)蛋白的表達(dá)。結(jié)果純化的神經(jīng)菌毛素1單克隆抗體具有高純度和特異性,同時(shí)B16F10細(xì)胞及其移植瘤上神經(jīng)菌毛素1高表達(dá)。神經(jīng)菌毛素1單克隆抗體能有效抑制B16F10細(xì)胞的增殖和遷移,抑制作用呈時(shí)間和濃度依賴性(P0.05)。神經(jīng)菌毛素1單克隆抗體能顯著誘導(dǎo)B16F10細(xì)胞凋亡,并呈劑量依賴關(guān)系(P0.05)�？贵w作用后B16F10細(xì)胞中磷酸化的Akt和ERK1/2表達(dá)下調(diào),Bcl-2和Caspase 3蛋白表達(dá)下調(diào),Bax蛋白的表達(dá)上調(diào)。結(jié)論純化的神經(jīng)菌毛素1單克隆抗體能有效地抑制B16F10增殖,遷移并明顯誘導(dǎo)凋亡,其可能通過抑制膜上神經(jīng)菌毛素1與相關(guān)細(xì)胞因子結(jié)合而減少其介導(dǎo)的PI3K/Akt和MEK/ERK1/2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的活化來抑制細(xì)胞增殖和遷移,并通過Bcl-2/Bax/Caspase3途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,從而發(fā)揮其抗腫瘤作用。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of neuropilin 1 (NRP1) monoclonal antibody (NRP1 mAb) on the proliferation, migration and apoptosis of melanoma cell line B16F10, and to explore its mechanism. Methods the purity of monoclonal antibody against neuromycin 1 was detected by SDS-PAGE, the specificity of monoclonal antibody against neuromycin 1 and the expression of neuromycin 1 on B16F10 cells and its transplanted tumor were detected by Western blot, immunofluorescence and immunohistochemistry. The effects of different concentrations of neuromycin-1 monoclonal antibody on the proliferation, migration and apoptosis of melanoma cells were detected by MTT assay and Annexin V-FITC / Pi double labeling flow cytometry. The expression of related signal proteins was detected by Western blot. Results the purified monoclonal antibody was of high purity and specificity, and the expression of neuromycin 1 was high in B16F10 cells and its transplanted tumor. Neuromycin 1 monoclonal antibody could effectively inhibit the proliferation and migration of B16F10 cells in a time-and concentration-dependent manner (P0.05). Neuromycin 1 monoclonal antibody could induce apoptosis of B16F10 cells in a dose-dependent manner (P0.05). The expression of phosphorylated Akt and ERK1 / 2 in B16F10 cells was down-regulated by antibodies, and the expression of Bcl-2 and caspase 3 was down-regulated in B16F10 cells. Conclusion the purified monoclonal antibody against neuromycin 1 can effectively inhibit the proliferation, migration and apoptosis of B16F10. It may inhibit cell proliferation and migration by inhibiting the activation of PI3K / Akt and MEK / ERK1 / 2 signal transduction pathways, and induce cell apoptosis through Bcl-2 / Bax-caspase3 pathway. In order to play its anti-tumor effect.
【作者單位】： 廈門大學(xué)醫(yī)學(xué)院抗癌研究中心;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(30973485,81172970) 福建省屬公益類科研專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)(2011R1039-1,2013J0138)
【分類號(hào)】：R739.5

【共引文獻(xiàn)】

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