自噬在紫草素誘導(dǎo)人A375黑素瘤細(xì)胞凋亡中的作用
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《揚(yáng)州大學(xué)》 2014年
自噬在紫草素誘導(dǎo)人A375黑素瘤細(xì)胞凋亡中的作用
劉國華
【摘要】:目的: 1、檢測紫草素及自噬抑制劑3-MA預(yù)處理后紫草素在體外對人A375黑素瘤細(xì)胞增殖影響 2、研究紫草素誘導(dǎo)人A375黑素瘤細(xì)胞自噬產(chǎn)生以及通過應(yīng)用3-MA抑制自噬后探討自噬在紫草素誘導(dǎo)人A375黑素瘤細(xì)胞凋亡中的作用。 方法: 1、WST-1法檢測紫草素及自噬抑制劑3-MA預(yù)處理后紫草素對人A375黑素瘤細(xì)胞增殖的影響 2、形態(tài)學(xué)觀察紫草素聯(lián)合3-MA對人A375黑素瘤細(xì)胞生長的影響 3、Western blot法檢測紫草素聯(lián)合3-MA對人A375黑素瘤細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白Beclinl和LC3B及凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3表達(dá)的影響 結(jié)果: 1、增殖試驗(yàn)結(jié)果顯示,不同濃度(0.1μg/ml、0.25μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、1.5μg/ml、2.0μg/ml、2.5μg/ml)的紫草素均對A375細(xì)胞均產(chǎn)生了抑制作用,抑制作用呈現(xiàn)出時(shí)間和濃度的依賴性。3-MA抑制自噬后,紫草素對A375細(xì)胞生長抑制率增加。 2、倒置相差顯微鏡下觀察,與未處理組相比,紫草素組以及紫草素+3-MA組的A375腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)基液面細(xì)胞碎片增多,細(xì)胞數(shù)目減少、萎縮變圓,發(fā)生明顯凋亡,并且紫草素+3-MA組凋亡比紫草素組凋亡更加明顯。 3、Western blot檢測自噬相關(guān)蛋白顯示,與對照組相比,紫草素組自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)明顯升高,表明紫草素誘導(dǎo)A375細(xì)胞自噬產(chǎn)生。 4、Western blot檢測結(jié)果顯示,抑制自噬可促進(jìn)紫草素誘導(dǎo)的A375細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3的表達(dá)。 結(jié)論: 紫草素可誘導(dǎo)人A375黑素瘤細(xì)胞產(chǎn)生自噬;紫草素和3-MA聯(lián)合用藥可增加人A375黑素瘤細(xì)胞凋亡。紫草素誘導(dǎo)人A375黑素瘤細(xì)胞凋亡的過程中自噬起到保護(hù)作用,3-MA特異性抑制自噬后可增強(qiáng)紫草素誘導(dǎo)的人A375黑素瘤細(xì)胞的凋亡。本研究為今后以自噬為切入點(diǎn),通過調(diào)控自噬來改善抗腫瘤藥物的療效提供了新的思路。
【關(guān)鍵詞】:
【學(xué)位授予單位】:揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2014
【分類號】:R739.5
【目錄】:
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本文編號:207308
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