本文選題：白地霉 + 林生地霉��； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的：本實驗通過建立真菌透甲模型，探討林生地霉、白地霉在體外能否侵犯健康甲板，并通過測定透甲時間來比較兩種地霉和紅色毛癬菌的侵襲作用，同時采用掃描電鏡微觀觀察受侵甲組織的情況。檢測兩種地霉和紅色毛癬菌的細胞外分泌酶活性，比較三者的異同性，結(jié)合第一部分結(jié)果進行分析，討論真菌胞外酶與對宿主的侵襲作用的關(guān)系。林生地霉（Geotrichum silvicola）為新近發(fā)現(xiàn)的一種罕見地霉[1]，我科相繼從一例膿癬患兒皮損中和一例中毒性表皮壞死松解癥患者的血液中分離得到林生地霉[2,3]，首次證明林生地霉能夠侵犯人類。白地霉(Geotrichum candidum)是地霉屬的經(jīng)典代表菌種，為條件性致病菌，以支氣管感染最多見。至今未有地霉屬真菌侵犯指甲的相關(guān)病例報道。紅色毛癬菌（Trichophytonrubrum）為親人性皮膚癬菌，主要侵犯皮膚、指（趾）甲，是我國甲真菌病優(yōu)勢致病菌[4.5]，此試驗中紅色毛癬菌作為陽性對照菌。 方法：林生地霉為河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院真菌室保存，由中國科學(xué)院微生物研究所鑒定。白地霉標準菌株購自中國科學(xué)院微生物研究所菌種保藏中心。紅色毛癬菌購自北京醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院真菌實驗室。三株真菌均經(jīng)過復(fù)蘇培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)和生化鑒定。1.建立真菌透甲模型，分為林生地霉組、白地霉組和紅色毛癬菌組，，其中紅色毛癬菌組設(shè)定為陽性對照組，各組均包括1個陰性對照模型（即不加任何菌種）和1個陽性對照模型（將菌懸液直接加入液體培養(yǎng)基中），觀察并記錄各組透甲時間，采用統(tǒng)計學(xué)方法比較是否存在差異性。2.采用掃描電鏡觀察受侵甲板的微觀變化及菌絲和孢子的形態(tài)。3.通過半定量API ZYM細胞外酶活性系統(tǒng)(法國梅里埃生物公司)測定出林生地霉、白地霉及紅色毛癬菌的19種胞外酶，包括四種酯酶、五種蛋白酶、二種水解酶和八種糖發(fā)酵酶。 結(jié)果：1.本實驗中，三種真菌菌株均能透過甲板模型，其中林生地霉的透甲時間為(15.07±3.28)d,白地霉的透甲時間為(14.50±1.67)d，紅色毛癬菌的透甲時間為(6.76±1.72)d。林生地霉和白地霉的透甲時間均明顯長于紅色毛癬菌（P＜0.05），林生地霉和白地霉的透甲時間無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。2.掃描電鏡觀察：三株菌株均有菌絲從角化細胞縫隙及細胞中央穿過；3. API-ZYM試劑盒測定結(jié)果顯示：(1)紅色毛癬菌菌株堿性磷酸酶、胰凝乳蛋白酶及多數(shù)糖發(fā)酵酶活性明顯高于林生地霉和白地霉；(2)白地霉和林生地霉的胞外酶譜大致相同，二株菌株具有很高的同源性；(3)三株真菌均含有的胞外酶有：酯酶C4、類脂酯酶C8、白氨酸芳氨酶、纈氨酸芳氨酶、酸性磷酸酶、萘酚-AS-BI-磷酸水解酶。 結(jié)論：1.林生地霉和白地霉均能穿透甲板，但透甲時間明顯長于紅色毛癬菌；2.掃描電鏡觀察：林生地霉、白地霉及紅色毛癬菌侵襲的甲板均可觀察到有菌絲穿過甲板，菌絲多從角化形成細胞邊緣間隙中穿過，部分菌絲直接從角化細胞中央穿出；3.白地霉和林生地霉的胞外酶譜大致相同；4.紅色毛癬菌大部分胞外酶活性明顯高于林生地霉和白地霉,堿性磷酸酶、胰凝乳蛋白酶及糖發(fā)酵酶可能是分解破壞甲板組織的主要作用酶。
[Abstract]:Objective: by establishing a model of fungal penetration in this experiment, we explored the invasion of the health decks in vitro, and by measuring the penetration time to compare the invasion of two kinds of ground molds and Trichophyton rubrum by measuring the time of penetration. At the same time, scanning electron microscopy was used to microscopic observation of the tissues of the invaded armour. The cells of two kinds of ground molds and Trichophyton rubrum were detected. Exocrine activity, comparing the similarities and differences between the three, analyzed the relationship between the fungal extracellular enzyme and the invasion of the host with the results of the first part. Geotrichum silvicola is a newly discovered rare earth mould, [1], and one successively from a case of psoriasis and one case of toxic epidermal necrosis. [2,3] is isolated from the blood of the people, and it is the first time to prove that the Rhizopus of the forest is an invasion of human. Geotrichum candidum is the classic representative of the genus Rhizopus. It is a conditioned pathogen and the most common case is bronchus infection. It is a dermatomycosis of the family members, which mainly invades the skin and refers to the [4.5], the dominant pathogen of onychomycosis in China. In this experiment, Trichophyton rubrum was used as a positive control bacterium.
Methods: Lin Sheng Di mildew was preserved in the fungal room of Fourth Hospital of Hebei Medical University. The standard strain of mildew was bought from the center of bacterial species preservation in the Institute of Microbiology of China Academy of Sciences. Trichophyton red fungus was purchased from the first hospital of Beijing Medical University, the first hospital of the true bacteria laboratory. Three strains of fungi were recovered and cultivated. The morphological and biochemical identification of.1. established a fungal penetration model, which was divided into two groups: forest ground mold, white fungus and Trichophyton rubrum. The Trichophyton red group was set as a positive control group. All the groups included 1 negative control models (that is, without any strains) and 1 positive control models (adding the bacterial suspension directly into the liquid medium). The time of penetration in each group was recorded, and statistical method was used to compare the difference of.2. by scanning electron microscope to observe the microscopic changes of the decks and the morphology of the mycelium and spores of the hyphae and spores.3. by the semi quantitative API ZYM cell outer enzyme activity system (France myrarie biological company) to determine 19 extracellular enzymes of the fungi of the ground molds, mildew and Trichophyton rubrum. It consists of four esterases, five proteases, two hydrolases and eight kinds of sugar fermentation enzymes.
Results: 1. in the 1. experiments, three fungal strains were able to penetrate the deck model, in which the time for the penetration of the fungi was (15.07 + 3.28) d, and the time for the penetration was (14.50 + 1.67) d, and the time for the penetration of Trichophyton rubre was (6.76 + 1.72) d. and the time of penetration was significantly longer than that of Trichophyton rubrum (P < 0.05). There was no statistical difference between the time and the time of penetration (P > 0.05).2. scanning electron microscopy. The three strains all had mycelia from the crevice of keratinized cells and the center of cells. The results of 3. API-ZYM kit showed that (1) the activity of alkaline phosphatase, chymotrypsin and most sugar fermentase activity of Trichophyton rubrum strain was obviously higher than that of forest ground mould And white earth molds; (2) the extracellular enzyme spectrum of Candida alba and phylum Lin was approximately the same, and two strains had high homology; (3) three strains of fungi all contained extracellular enzymes: esterase C4, lipoid esterase C8, alanine aromatase, valine aromatase, acid phosphatase, naphthol -AS-BI- phosphoric acid hydrolase.
Conclusion: 1. the decks can penetrate the deck, but the time of penetration is obviously longer than that of Trichophyton rubrum. 2. scanning electron microscope observation: the decks of mycelia, mycelia and Trichophyton rubrum can be observed through the decks, and the mycelium passes through the diagonalization of the edge of the cell edge, and some mycelium is directly from the keratinocyte The extracellular enzyme spectrum of 3. mildew and ground mildew was approximately the same. 4. most of the extracellular enzyme activity of Trichophyton rubrum was significantly higher than that of fungi and mildew. Alkaline phosphatase, chymotrypsin and sugar fermentase may be the main enzymes that decompose the decks.
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R756

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本文編號：2060767