本文選題：熱療 + B16F10細(xì)胞　； 參考：《中南大學(xué)》2010年博士論文

【摘要】： 研究背景惡性黑色素瘤是由黑色素細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化形成的一種高度惡性腫瘤,發(fā)病率為全身惡性腫瘤的1%-2%,占皮膚惡性腫瘤的20%。其侵襲性強(qiáng),易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,最常見的轉(zhuǎn)移部位包括肺、骨和肝臟,進(jìn)展期黑色素瘤患者平均生存期僅6-9個(gè)月,對(duì)人民群眾的生命帶來(lái)極大危害。治療惡性黑色素瘤的關(guān)鍵在于控制其遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,由于其對(duì)常規(guī)治療手段如化療、放療等敏感性較低,目前對(duì)于進(jìn)展期惡性黑色素瘤還無(wú)有效的預(yù)防治療方法。 腫瘤熱療(Hyperthermia)是一種以非電離輻射方式作用于腫瘤的物理治療方法,與化療和放療相比其優(yōu)勢(shì)在于較少受限于其毒副作用,并能夠多次重復(fù)使用,且可以增強(qiáng)放射治療和化學(xué)藥物治療的效果,被國(guó)際醫(yī)療界稱為“綠色療法”。傳統(tǒng)的腫瘤熱療方法常常不能將腫瘤加熱到治療溫度,新近研發(fā)的磁感應(yīng)加溫治療可以將腫瘤組織加熱到50℃左右,而使正常組織保持不升溫,有效殺滅靶區(qū)內(nèi)的腫瘤組織。近年來(lái)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明了熱療不僅可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖,還可抑制其遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。也有研究報(bào)道了熱療對(duì)轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。但對(duì)熱療抑制腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移能力的具體機(jī)制尚不十分清楚,有待進(jìn)一步探索。 基于以上觀點(diǎn),本研究將采用不同溫度體內(nèi)外加熱小鼠黑色素瘤,系統(tǒng)的研究41℃-50℃范圍內(nèi)不同溫度熱療對(duì)B16F10細(xì)胞的增殖、侵襲、運(yùn)動(dòng)能力的影響,并研究其相關(guān)分子機(jī)制,將有助于臨床個(gè)體化的熱療方案,為熱療治療惡性黑色素瘤的臨床應(yīng)用提供部分理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 目的探討不同溫度熱療對(duì)黑色素瘤B16F10細(xì)胞增殖以及周期分布的影響。 方法采用水浴對(duì)黑色素瘤B16F10細(xì)胞行41℃、43℃、45℃、47℃、50℃實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組(37℃)熱療,四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率,流式細(xì)胞術(shù)儀測(cè)定細(xì)胞周期分布的變化。 結(jié)果45℃,47℃,50℃組的細(xì)胞增殖抑制率在24h、48h、72h、96h明顯高于41℃和43℃組(P0.05)。47℃,50℃組的細(xì)胞增殖抑制率在24h、48h、72h、96h均明顯高于45℃組(P0.05)。在47℃、50℃兩組之間,各時(shí)間段的差異無(wú)顯著性(P0.05)。與37℃對(duì)照組相比,41℃、43℃組的G0/G1期細(xì)胞明顯增多,而S期細(xì)胞明顯減少(P0.05)。47℃和50℃組的G0/G1期細(xì)胞比37℃組明顯減少(P0.05),而S期細(xì)胞明顯增多(P0.05),在47℃和50℃組之間無(wú)明顯差異。與37℃對(duì)照組相比,43℃組的G2/M期細(xì)胞明顯增多(P0.05)。 結(jié)論45℃及以上溫度熱療可明顯抑制B16F10細(xì)胞的體外增殖能力；45℃熱療對(duì)B16F10細(xì)胞S期比例無(wú)明顯影響,47℃及以上溫度熱療使其發(fā)生S期阻滯。結(jié)果提示：45℃及以上溫度熱療不僅可以有效抑制B16F10細(xì)胞的增殖活性,且可以減少熱耐受的產(chǎn)生,而高于47℃的熱療并不產(chǎn)生更強(qiáng)的抑制作用。 目的研究不同溫度熱療對(duì)黑色素瘤B16F10細(xì)胞形態(tài)、運(yùn)動(dòng)能力及體外侵襲能力的影響。 方法采用水浴對(duì)黑色素瘤B16F10細(xì)胞行41℃、43℃、45℃、47℃、50℃實(shí)驗(yàn)組和37℃對(duì)照組熱療,倒置顯微鏡下觀察熱療后不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞形態(tài)的變化；透射電鏡觀察熱療后24h細(xì)胞顯微結(jié)構(gòu)的改變。取43℃、45℃、47℃實(shí)驗(yàn)組和37℃對(duì)照組熱療后的細(xì)胞進(jìn)行劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力；侵襲小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞體外侵襲能力；明膠酶譜法檢測(cè)不同溫度熱療后24h內(nèi)B16F10細(xì)胞的MMP-2及MMP-9的分泌量及活性。 結(jié)果(1)B16F10細(xì)胞在41℃、43℃加熱后更趨于成熟,分化更好,惡性程度降低,而45℃及以上溫度熱療后細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞明顯,細(xì)胞活力下降。(2)與37℃(對(duì)照組)相比,43℃、45℃、47℃組細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力均減弱,45℃、47℃組細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力下降尤其明顯。(3)37℃(對(duì)照組)、43℃,45℃及47℃熱療后,平均每個(gè)視野中B16F1O細(xì)胞穿過(guò)Matrigel膠到達(dá)Transwell小室膜背面的細(xì)胞數(shù)隨熱療溫度升高而降低,各組間均存在明顯差異(P0.05)。(4)與37℃組相比,43℃、45℃、47℃熱療后24h內(nèi)B16F10細(xì)胞MMP-2及MMP-9的分泌量及活性明顯下降(P0.05),并且與43℃組相比,45℃、47℃熱療組MMP-2的分泌量及活性進(jìn)一步下降(P0.05),而45℃、47℃熱療組之間無(wú)明顯差異(P0.05)。 結(jié)論不同溫度熱療后細(xì)胞形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)發(fā)生不同程度的改變,45℃及以上溫度熱療的主要表現(xiàn)為細(xì)胞結(jié)構(gòu)的破壞；43℃、45℃及47℃熱療均可抑制B16F10細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力,且對(duì)黑素瘤細(xì)胞明膠酶活性均有抑制作用,45℃、47℃熱療組MMP-2的分泌量及活性較43℃下降更明顯；43℃、45℃及47℃對(duì)腫瘤細(xì)胞的體外侵襲能力的抑制作用隨熱療溫度升高而增強(qiáng)。說(shuō)明B16F10細(xì)胞侵襲能力的減弱主要與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力及明膠酶活性受到抑制有關(guān)。 目的研究小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞經(jīng)過(guò)不同溫度熱療后TGF-β1等侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)變化。 方法采用水浴對(duì)黑色素瘤B16F10細(xì)胞行43℃、45℃、47℃實(shí)驗(yàn)組和37℃對(duì)照組熱療,免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)不同溫度熱療后24hTGF-β1、VEGF蛋白在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)變化,rt-PCR檢測(cè)不同溫度熱療后繼續(xù)培養(yǎng)2h、6h、12h、4h TGF-β1、Smad4、VEGF、MMP-2及MMP-9在mRNA水平的表達(dá)變化。Western Blotting檢測(cè)不同溫度熱療后繼續(xù)培養(yǎng)2h、6h、12h、24h TGF-β1、Smad4在蛋白水平的表達(dá)變化。 結(jié)果(1)不同溫度熱療后24h細(xì)胞內(nèi)TGF-β1蛋白表達(dá)降低,43℃、45℃、47℃組的平均光密度值(AOD)與37℃對(duì)照組相比,明顯降低(P0.05)；同樣,VEGF蛋白表達(dá)也下降,43℃、45℃、47℃組的平均光密度值(AOD)與37℃對(duì)照組相比,也明顯降低(P0.05),二者均呈現(xiàn)一定程度的溫度依賴性。(2)與37℃對(duì)照組相比,43℃熱療后各時(shí)間點(diǎn)MMP-9、VEGF mRNA的表達(dá)均降低(P0.05),43℃熱療后6h-24h MMP-2、TGF-β1、mRNA的表達(dá)明顯降低(P0.05)；45℃及47℃熱療后各時(shí)間點(diǎn)TGF-β1、VEGF、MMP-2及MMP-9 mRNA的表達(dá)均降低；各時(shí)間點(diǎn)Smad4 mRNA的表達(dá)均無(wú)明顯變化。(3)與37℃對(duì)照組相比,43℃熱療后12h-24h出現(xiàn)TGF-β1蛋白表達(dá)降低及Smad4蛋白表達(dá)升高(P0.05)；45℃熱療后6h-24hTGF-β1蛋白表達(dá)明顯下降,6h-12h Smad4蛋白表達(dá)升高(P0.05)；47℃熱療后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)TGF-β1蛋白的表達(dá)均降低(P0.05),而Smad4蛋白表達(dá)的增加(P0.05)只出現(xiàn)在熱療后2h-6h(P0.05)。 結(jié)論小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞中TGF-β1、Smad4在mRNA和蛋白水平的表達(dá)變化與熱療溫度和熱療后繼續(xù)培養(yǎng)的時(shí)間有關(guān)。43℃及以上溫度熱療使(MMP)-2/VEGF的基因表達(dá)明顯抑制,同時(shí)有TGF-β1基因表達(dá)的下調(diào),此三者之間可能存在相互影響。而TGF-β1蛋白水平的上調(diào)相對(duì)滯后于其基因水平的變化,Smad蛋白表達(dá)一過(guò)性增加�？傊�,實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明了TGF-β1表達(dá)的下調(diào)可能為熱療抑制B16F10細(xì)胞增殖及體外侵襲能力的機(jī)制之一。 目的探討不同溫度磁熱療對(duì)小鼠惡性黑色素瘤皮下移植瘤的作用。 方法用小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞株建C57BL6小鼠皮下移植瘤模型,將Fe3O4磁性納米顆粒直接注入腫瘤組織內(nèi),在交變磁場(chǎng)中進(jìn)行磁感應(yīng)加熱治療,控溫在45℃和50℃分別持續(xù)30min和10min,24h后重復(fù)加熱,共加熱3次,比較45℃組磁熱療組(H1)、50℃磁熱療組(H2)、單純磁流體組(M組)、單純磁場(chǎng)組(T組)和對(duì)照組的腫瘤體積的大小、生存期和TGF-β1的陽(yáng)性指數(shù)。 結(jié)果與對(duì)照組相比,45℃磁熱療組和50℃磁熱療組均能抑制腫瘤的生長(zhǎng)(P0.05)。與45℃磁熱療組比較,50℃磁熱療組抑瘤作用更顯著,有57.1%的腫瘤完全消退率(P0.05)。45℃MFH組和50℃MFH組的生存期分別為(40.286±8.592)d和(60.143±13.319)d比對(duì)照組的(17.429±3.054)d明顯延長(zhǎng)(P0.05)。TGF-β1的陽(yáng)性指數(shù)在50℃磁熱療組顯著降低為16.4%,與其它組相比,差異具有顯著性(P0.05)。 結(jié)論45℃磁熱療和50℃磁熱療均能抑制小鼠惡性黑色素皮下移植瘤的生長(zhǎng),延長(zhǎng)荷瘤小鼠的生存期,抑制腫瘤組織中TGF-β1的表達(dá)。50℃磁熱療組的抑瘤作用較45℃磁熱療組更為顯著,可以達(dá)到57.1%的腫瘤完全消退率。
[Abstract]:Background Malignant melanoma is a highly malignant tumor formed by malignant transformation of melanoma cells . The incidence of malignant melanoma is 1 % -2 % , which accounts for 20 % of malignant tumors . The most common metastatic sites include lung , bone and liver . The most common metastatic sites include lung , bone and liver . The most common metastatic sites include lung , bone and liver . The most common metastatic sites include lung , bone and liver . The key to the treatment of malignant melanoma is to control the distant metastasis .



Thermotherapy is a kind of physical therapy for tumor with non - ionizing radiation . Compared with chemotherapy and radiotherapy , it has the advantages of being less limited by its toxic and side effects , and can be used repeatedly , and can enhance the therapeutic effect of radiotherapy and chemotherapy . The traditional tumor hyperthermia treatment can heat the tumor tissue to about 50 鈩，

本文編號(hào)：2060568