本文關(guān)鍵詞：銀屑病皮損間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性及其對(duì)HaCaT細(xì)胞凋亡影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《山西醫(yī)科大學(xué)》 2015年

銀屑病皮損間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性及其對(duì)HaCaT細(xì)胞凋亡影響的研究

王建華  

【摘要】：目的:在體外分離、培養(yǎng)及鑒定銀屑病患者皮損和正常人皮膚來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells,MSCs),通過(guò)研究銀屑病患者皮損和正常人皮膚MSCs對(duì)Ha Ca T細(xì)胞凋亡的影響,進(jìn)一步明確銀屑病患者皮損MSCs對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞(Keratinocyte,KC)凋亡的作用,從而為銀屑病患者皮損KC的異常凋亡提供理論基礎(chǔ),進(jìn)一步揭示銀屑病可能的發(fā)病機(jī)制。方法:1.分別取自我院整形科和泌尿外科手術(shù)切除的多余的新鮮皮膚組織和皮膚科門(mén)診臨床上已確診的銀屑病患者的皮損組織各8份,在體外無(wú)菌條件下進(jìn)行真、表皮分離,培養(yǎng)真皮MSCs;2.采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)細(xì)胞表面抗原CD29、CD34、CD44、CD45、CD73、CD90、CD105、HLA-DR進(jìn)行檢測(cè);3.多向誘導(dǎo)分化及分化細(xì)胞的鑒定;4.將銀屑病患者組皮損及正常對(duì)照組皮膚的第5代MSCs分別與Ha Ca T細(xì)胞共培養(yǎng),并設(shè)對(duì)照進(jìn)行Ha Ca T細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng),采用實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)細(xì)胞分析法檢測(cè)Ha Ca T細(xì)胞的增殖曲線;5.三組細(xì)胞培養(yǎng)72 h后,在流式細(xì)胞儀上利用Annexin-V/PI試劑盒分別檢測(cè)三組Ha Ca T細(xì)胞的凋亡率;6.銀屑病患者組皮損及正常對(duì)照組皮膚MSCs對(duì)Ha Ca T細(xì)胞凋亡率的影響采用方差分析及SNK檢測(cè);7.銀屑病患者組Ha Ca T細(xì)胞的凋亡率與本病的皮損面積及嚴(yán)重程度評(píng)分兩者之間的相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。結(jié)果:1.在倒置相差顯微鏡下觀察銀屑病患者組皮損和正常對(duì)照組皮膚MSCs的細(xì)胞形態(tài)相似,呈細(xì)長(zhǎng)梭形;2.采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)MSCs表面抗原,結(jié)果顯示細(xì)胞表面抗原CD29、CD44、CD73、CD90、CD105呈高表達(dá),而CD34、CD45及HLA-DR呈陰性表達(dá);3.用脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞三種不同的誘導(dǎo)體系可將MSCs誘導(dǎo)分化為三種相應(yīng)的細(xì)胞;4.實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)細(xì)胞分析法檢測(cè)3組Ha Ca T細(xì)胞的增殖曲線在32~60h后開(kāi)始出現(xiàn)不同程度的凋亡;5.共培養(yǎng)結(jié)果為:銀屑病患者組Ha Ca T細(xì)胞凋亡率為(37.19±15.35)%,正常對(duì)照組Ha Ca T細(xì)胞凋亡率為(75.44±9.08)%,顯示了銀屑病患者組皮損及正常對(duì)照組皮膚MSCs均具有誘導(dǎo)或者抑制Ha Ca T細(xì)胞凋亡的能力(p0.05);6.兩組相比,銀屑病患者組皮損MSCs誘導(dǎo)Ha Ca T細(xì)胞凋亡的能力減弱或抑制Ha Ca T細(xì)胞凋亡的能力增加(p0.05);7.銀屑病患者組Ha Ca T細(xì)胞凋亡率與本病的皮損面積及嚴(yán)重程度評(píng)分兩者之間無(wú)相關(guān)性(p0.05)。結(jié)論:1.成功的在體外分離、培養(yǎng)及鑒定了銀屑病患者皮損及正常人皮膚MSCs,進(jìn)一步加強(qiáng)了培養(yǎng)MSCs方法的可靠性及有效性;2.銀屑病患者皮損及正常人皮膚MSCs均具有誘導(dǎo)或者抑制Ha Ca T細(xì)胞凋亡的能力;3.銀屑病患者皮損MSCs誘導(dǎo)Ha Ca T細(xì)胞凋亡的能力與正常人皮膚MSCs相比明顯減弱或者抑制Ha Ca T細(xì)胞凋亡的能力與正常人皮膚MSCs相比明顯增加,表明銀屑病患者皮損MSCs可能誘導(dǎo)Ha Ca T細(xì)胞凋亡的能力減弱或者抑制Ha Ca T細(xì)胞凋亡的能力增加,進(jìn)一步揭示了銀屑病患者皮損形成的原因可能是由皮損MSCs誘導(dǎo)KC凋亡的能力減弱或者抑制KC凋亡的能力增加導(dǎo)致的,從而使皮損表皮異常增厚,這也可能是銀屑病的發(fā)病機(jī)制之一。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R758.63
【目錄】：

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