本文選題：黑色素瘤 + miRNA　； 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報》2014年03期

【摘要】：目的研究靶向血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)基因的外源性miRNA對惡性黑色素瘤細(xì)胞增殖及凋亡的影響。方法根據(jù)VEGF基因序列設(shè)計合成4對miRNA干擾片段,構(gòu)建質(zhì)粒真核表達(dá)載體,分別為X-26-1-3、X-26-2n-1、X-26-3-2和X-26-4-4,測序分析鑒定插入序列的完整性;脂質(zhì)體法將該4個重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)染黑色素瘤細(xì)胞株SKmel-28,RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞中VEGF基因的mRNA表達(dá)變化,Western blotting檢測miRNA對VEGF蛋白表達(dá)水平的調(diào)控效應(yīng),明確抑制效果最為顯著的miRNA干擾序列。MTS法和流式細(xì)胞儀分別檢測人工合成的靶向VEGF的miRNA對SKmel-28生長的抑制作用,以及對腫瘤細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果測序分析證實4個重組體插入片段的堿基序列均完全正確,成功轉(zhuǎn)染SKmel-28細(xì)胞后,均能顯著抑制腫瘤細(xì)胞VEGF mRNA和蛋白的表達(dá),與對照組相比有顯著性差異(P0.01)。抑制效應(yīng)最強(qiáng)的重組載體是X-26-2n-1,MTS法和流式細(xì)胞儀檢測顯示,SKmel-28細(xì)胞轉(zhuǎn)染X-26-2n-1后,細(xì)胞增殖受到明顯抑制,增殖抑制效應(yīng)具有時間依賴性,與陰性對照組比較差異具有顯著性(P0.05),與空白組比較細(xì)胞增殖抑制更加明顯(P0.01);腫瘤細(xì)胞早期凋亡率、晚期凋亡率、總凋亡率也顯著高于對照組(P0.01)。結(jié)論外源性靶向VEGF的miRNA能夠顯著降低黑色素瘤細(xì)胞SKmel-28 VEGF基因和蛋白的表達(dá)水平,抑制腫瘤細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
[Abstract]:Objective to study the effects of exogenous miRNA targeting vascular endothelial growth factor (VEGF) gene on the proliferation and apoptosis of malignant melanoma cells. Methods according to the sequence of VEGF gene, four pairs of miRNA interference fragments were designed and synthesized, and the eukaryotic expression vectors were constructed, namely X-26-1-3OX-26-2n-1OX-26-3-2 and X-26-4-4, respectively. The integrity of the inserted sequence was identified by sequencing analysis. The four recombinant expression vectors were transfected into melanoma cell line SKmel-28 by liposome method. RT-PCR was used to detect the mRNA expression of VEGF gene in the transfected cells. Western blotting was used to detect the effect of miRNA on the expression of VEGF protein. MiRNA interference sequence. MTS and flow cytometry were used to detect the inhibitory effect of synthetic VEGF targeting miRNA on the growth of SKmel-28 and the effect on apoptosis of tumor cells. Results the sequence analysis showed that the sequence of the four inserted fragments was correct. After transfection of SKmel-28 cells, the expression of VEGF mRNA and protein in tumor cells was significantly inhibited, and there was significant difference compared with the control group (P 0.01). The strongest inhibitory effect of recombinant vector was X-26-2n-1MTS assay and flow cytometry analysis showed that after transfection of X-26-2n-1, the cell proliferation was significantly inhibited, and the inhibitory effect was time-dependent. Compared with the negative control group, the difference was significant (P 0.05), the inhibition of cell proliferation was more obvious than that of the blank group, and the early apoptosis rate, the late apoptosis rate and the total apoptosis rate of tumor cells were significantly higher than those of the control group. Conclusion exogenous miRNA targeting VEGF can significantly reduce the expression of SKmel-28 VEGF gene and protein, inhibit the proliferation and induce apoptosis of melanoma cells.
【作者單位】： 廣東省人民醫(yī)院//廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚科;廣東省人民醫(yī)院//廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院普通外科;
【基金】：廣東省科技計劃項目(2010B080701022,2010B080701021)
【分類號】：R739.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 方木平;劉漢忠;劉永橋;;VEGF-C及其受體在皮膚惡性黑素瘤中的表達(dá)及其臨床意義[J];中國麻風(fēng)皮膚病雜志;2007年05期

2 黃秋林;于永政;陽勇;呂忠誠;;靶向肝癌HepG2細(xì)胞VEGF基因的siRNA表達(dá)載體構(gòu)建及體外抑制作用[J];世界華人消化雜志;2009年02期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 周凌;魯元剛;楊桂紅;楊濤;伍津津;;肉桂醛對惡性黑素瘤A375細(xì)胞增殖和分泌VEGF的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2012年07期

2 顧煜琛;;白藜蘆醇對黑色素瘤細(xì)胞黏附生物學(xué)行為的影響[J];南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2012年01期

3 熊建寧;孫建;區(qū)應(yīng)亮;簡志祥;;靶向血管內(nèi)皮生長因子基因的微小RNA真核表達(dá)載體的構(gòu)建[J];中國組織工程研究;2012年15期

4 鄧娟;稅青林;;基因治療原發(fā)性肝癌的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代診斷與治療;2010年01期

5 鄭雙進(jìn);黎兆軍;;血管內(nèi)皮生長因子及其在增生性皮膚病中的表達(dá)[J];醫(yī)學(xué)綜述;2010年02期

6 黃秋林;劉璇;陽勇;曹超;戴小明;韓東;雷俊悅;;靶向肝癌HepG2細(xì)胞VEGF基因siRNA表達(dá)載體裸鼠成瘤抑制作用[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2013年14期

7 楊雪;王志榮;張卓琦;張超群;徐晤;程明月;;白藜三醇促進(jìn)缺氧條件下人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的血管生成作用[J];中國循環(huán)雜志;2013年08期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 李東升;白藜蘆醇對惡性黑素瘤抗癌機(jī)制的實驗研究[D];華中科技大學(xué);2011年

2 曾文勝;CS-PEG納米載體介導(dǎo)Mcl-1 siRNA聯(lián)合奧沙利鉑治療肝癌的實驗研究[D];中南大學(xué);2011年

3 王爽;血小板反應(yīng)蛋白-1在小鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷中的作用及在糖尿病視網(wǎng)膜病變中的應(yīng)用價值[D];吉林大學(xué);2012年

4 周凌;黑素瘤三維培養(yǎng)模型的建立及肉桂醛抑制黑素瘤細(xì)胞增殖和侵襲的實驗研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 黃文鋒;HJURP基因多態(tài)性與HBV相關(guān)性肝癌遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2011年

2 張蕾;皮膚鱗狀細(xì)胞癌和基底細(xì)胞癌中Maspin、VEGF的表達(dá)及意義[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2011年

3 高磊;VEGF121和VEGF165對血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性影響的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

4 張新偉;微小RNA前體區(qū)域基因多態(tài)與肝細(xì)胞肝癌遺傳易感性關(guān)聯(lián)的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2011年

5 王佩佩;不同強(qiáng)度游泳訓(xùn)練對腦缺血再灌注大鼠GFAP及bFGF表達(dá)的影響[D];青島大學(xué);2012年

6 鄧娟;靶向干擾STAT5A基因?qū)θ烁伟〩EPG-2細(xì)胞STAT5A蛋白表達(dá)及生長抑制的研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2010年

7 馬艷鵬;靶向siRNA體外抑制肝癌HepG-2細(xì)胞VEGF-B基因表達(dá)的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

8 王崢;慢病毒介導(dǎo)BC047440基因沉默逆轉(zhuǎn)HepG2/ADM細(xì)胞化療耐藥性機(jī)制的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2012年

9 于劍;原發(fā)性肝癌的基因治療[D];山東大學(xué);2012年

10 馬寧;2型糖尿病微血管病變患者的血清TSP-1的相關(guān)性研究[D];蘇州大學(xué);2013年

【二級參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 韓慶旺,樊燕蓉,傅更鋒,劉新卷,徐根興;RNA干擾對VEGF在人卵巢癌細(xì)胞中表達(dá)及細(xì)胞增殖的影響[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2005年09期

2 王涌,彭承宏;生長抑素類似物與肝癌治療的研究進(jìn)展[J];肝膽外科雜志;2001年01期

3 ;Effect of octreotide on angiogenesis induced by hepatocellular carcinoma in vivo[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2003年03期

4 陳緒軍;生長抑素類似物與肝膽系腫瘤(文獻(xiàn)綜述)[J];國外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊;1999年02期

5 余繼海,許戈良,汪健;奧曲肽對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2003年02期

6 陶娟,涂亞庭;惡性黑素瘤內(nèi)皮型一氧化氮合酶和血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)[J];中華皮膚科雜志;2004年10期

7 夏景林,楊秉輝,葉勝龍,林芷英,馬曾辰,周信達(dá),吳志全,湯釗猷;原發(fā)性肝癌腫瘤血管密度及其表達(dá)的臨床病理意義[J];中華腫瘤雜志;1998年06期

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 裴向克;蔡明;周鴻敏;劉暢;徐利軍;黃建敏;陳忠華;石炳毅;;Neuropilin-1在小鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖中的作用[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2010年02期

2 吳宏菊;孫丹;肖玉平;辛彥;;EGCG對胃癌BGC-823細(xì)胞增殖及其VEGF表達(dá)的影響[J];山東醫(yī)藥;2011年22期

3 賴曉紅;翁光華;;VEGF的RNAi對卵巢癌細(xì)胞SKOV3生物學(xué)活性的影響作用[J];中國醫(yī)療前沿;2008年22期

4 賴曉紅;翁光華;;VEGF的RNAi對卵巢癌細(xì)胞SKOV3生物學(xué)活性的影響[J];現(xiàn)代醫(yī)院;2009年01期

5 李善平;劉海威;程樂;張虎;曹登科;李政;;VEGF siRNA抑制人胰腺癌PANC-1細(xì)胞體外生長的研究[J];中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2011年06期

6 孫玲;王一浩;劉少君;王芳;馬鴻雁;孫慧;席雨人;;血管內(nèi)皮生長因子反義寡核苷酸對白血病細(xì)胞系HL-60細(xì)胞作用的研究[J];中國實驗血液學(xué)雜志;2007年04期

7 杜靜;趙秋;谷華;滕曉麗;覃華;劉南植;;缺氧條件下YC-1對人胰腺癌細(xì)胞VEGF和GPI基因的抑制效應(yīng)[J];中華腫瘤雜志;2006年07期

8 鄔珊;吳建芳;車向新;高崇茂;李衛(wèi)東;;心鈉素對小鼠腫瘤生長和血管新生的抑制作用[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2008年12期

9 畢永華;許為青;;Avastin對喉癌細(xì)胞增殖抑制的實驗研究[J];山東醫(yī)藥;2009年09期

10 劉明華;肖順漢;章卓;顧立;李華;馮文宇;;復(fù)爾康注射液抗血管生成的體外實驗研究[J];沈陽藥科大學(xué)學(xué)報;2009年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 封巍;祝淑釵;鄭曉;王玉祥;王準(zhǔn);王鑫;;阻斷血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)對食管癌細(xì)胞放射敏感性的影響[A];2009年浙江省放射腫瘤治療學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

2 賈軍;楊世勇;張志明;;血管內(nèi)皮生長因子在食管鱗癌中的表達(dá)及臨床意義[A];2000全國腫瘤學(xué)術(shù)大會論文集[C];2000年

3 張清媛;康欣梅;趙文輝;;雌激素及其拮抗劑對乳腺癌血管內(nèi)皮生長因子的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

4 劉耀煌;方志軍;方向明;朱慧星;方金峰;徐如意;周虹;;肝細(xì)胞癌患者血清VEGF和NO含量測定及其臨床意義[A];湖北省暨武漢市微生物學(xué)會分析微生物專業(yè)委員會第十屆第五次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

5 丁佩劍;楊陽;馮佩明;劉志滿;楊宗偉;;VEGF在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義[A];第五屆全國中醫(yī)藥免疫學(xué)術(shù)研討會——暨環(huán)境·免疫與腫瘤防治綜合交叉會議論文匯編[C];2009年

6 王啟遠(yuǎn);周長江;高云飛;徐巖;李坤;;血管內(nèi)皮生長因子與結(jié)直腸癌[A];《中華急診醫(yī)學(xué)雜志》第八屆組稿會暨急診醫(yī)學(xué)首屆青年論壇論文匯編[C];2009年

7 封巍;鄭曉;;干擾VEGF表達(dá)聯(lián)合放射線治療食管癌細(xì)胞移植瘤的實驗研究[A];中國第九屆全國食管癌學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

8 譚守剛;朱樹干;梅林;;COX-2、VEGF在垂體腺瘤中的表達(dá)及臨床意義[A];中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

9 封巍;鄭曉;王躍珍;王準(zhǔn);;干擾VEGF表達(dá)聯(lián)合放射線治療食管癌細(xì)胞移植瘤的對比實驗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會放射腫瘤治療學(xué)分會六屆二次暨中國抗癌協(xié)會腫瘤放療專業(yè)委員會二屆二次學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

10 李青山;呂喜英;高東奇;;VEGF和CEA檢測對結(jié)核性與惡性胸腔積液鑒別診斷價值[A];第五屆全國中醫(yī)藥免疫學(xué)術(shù)研討會——暨環(huán)境·免疫與腫瘤防治綜合交叉會議論文匯編[C];2009年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 實習(xí)生 蔣洪濤　王昊魁;miRNA—21：讓腫瘤對它“上癮”[N];科技日報;2010年

2 張中橋;卵巢癌與血管內(nèi)皮生長因子有關(guān)[N];民族醫(yī)藥報;2000年

3 ;小兒腎母細(xì)胞瘤血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)及臨床意義[N];中國醫(yī)藥報;2003年

4 ;讓癌細(xì)胞休眠有望用于醫(yī)治癌癥[N];新華每日電訊;2005年

5 辛華;ＴＢＸ２基因失效可使癌細(xì)胞休眠[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2005年

6 蒲昭和;飲茶防癌的奧秘[N];中國醫(yī)藥報;2001年

7 陸志誠編譯;黑色素瘤疫苗進(jìn)入臨床試驗[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2004年

8 編譯 北小冉;使用癌癥疫苗前景樂觀[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2009年

9 蔣明;武大二院新法治療膠質(zhì)瘤[N];中國醫(yī)藥報;2002年

10 記者 常麗君;驗血可比CT掃描提前28個月發(fā)現(xiàn)肺癌[N];科技日報;2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 盧韶華;肺癌患者組織及血漿miRNA腫瘤標(biāo)記物的發(fā)現(xiàn)及驗證[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

2 何艷;肝細(xì)胞肝癌相關(guān)基因中miRNA結(jié)合靶點內(nèi)多態(tài)的篩選及功能分析[D];蘇州大學(xué);2010年

3 夏偉;臨床腫瘤標(biāo)本中差異miRNA的檢測及mir-200b功能研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2010年

4 羅紅春;胃癌miRNA表達(dá)譜及胃癌中顯著下調(diào)的miR-9和miR-433的功能研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

5 張文輝;胃遠(yuǎn)端腺癌miRNA表達(dá)譜及miR-204調(diào)控機(jī)制的初步研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2010年

6 李艷;miRNA在胃癌中的表達(dá)及表觀遺傳調(diào)控機(jī)制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

7 張萍;小分子RNA及ESR1基因多態(tài)與三陰性乳腺癌易感性及預(yù)后的關(guān)聯(lián)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

8 王旭東;miRNA-21調(diào)控多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞生長與耐藥機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

9 江瓊;細(xì)胞周期調(diào)控蛋白cyclin D1基因靶向microRNAs的預(yù)測、系統(tǒng)驗證及西洋參提取物處理人乳腺癌細(xì)胞的表達(dá)譜分析[D];浙江大學(xué);2010年

10 李夏雨;不同階段結(jié)直腸癌動態(tài)轉(zhuǎn)錄組與表達(dá)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建的生物信息學(xué)分析[D];中南大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 尤昊;抑制miRNA-21的表達(dá)對膽管癌細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲的影響及其靶基因的探討[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2011年

2 何進(jìn)鵬;X射線對胃癌miRNA表達(dá)譜的影響[D];蘭州大學(xué);2010年

3 李紀(jì)鵬;miR-183在肝癌細(xì)胞中的功能及人工miRNA簇表達(dá)載體的構(gòu)建研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2010年

4 彭泉;甲基化芯片+TA克隆測序研究胰腺癌細(xì)胞株中異常甲基化miRNA[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

5 張菊;miRNA let-7a-1對前列腺癌PC-3細(xì)胞增殖和凋亡的影響[D];山東大學(xué);2010年

6 岳宏宇;胃癌組織中miRNA-34b/c和miRNA-124a基因甲基化研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2010年

7 陳亮;miRNA沉默ILK基因?qū)θ税螂装〣IU-87細(xì)胞增殖的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

8 韋源;MicroRNA在SMMC-7721肝癌細(xì)胞差異表達(dá)譜的研究[D];鄭州大學(xué);2010年

9 胡華梅;食管癌相關(guān)miRNA基因DNA甲基化狀態(tài)的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

10 王湘茹;癌癥基因及相關(guān)MicroRNA的關(guān)系分析研究[D];吉林大學(xué);2011年

，

本文編號：1915462