靶向VEGF的miRNA對惡性黑色素細(xì)胞增殖和凋亡的影響
本文選題:黑色素瘤 + miRNA ; 參考:《南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報》2014年03期
【摘要】:目的研究靶向血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)基因的外源性miRNA對惡性黑色素瘤細(xì)胞增殖及凋亡的影響。方法根據(jù)VEGF基因序列設(shè)計合成4對miRNA干擾片段,構(gòu)建質(zhì)粒真核表達(dá)載體,分別為X-26-1-3、X-26-2n-1、X-26-3-2和X-26-4-4,測序分析鑒定插入序列的完整性;脂質(zhì)體法將該4個重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)染黑色素瘤細(xì)胞株SKmel-28,RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞中VEGF基因的mRNA表達(dá)變化,Western blotting檢測miRNA對VEGF蛋白表達(dá)水平的調(diào)控效應(yīng),明確抑制效果最為顯著的miRNA干擾序列。MTS法和流式細(xì)胞儀分別檢測人工合成的靶向VEGF的miRNA對SKmel-28生長的抑制作用,以及對腫瘤細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果測序分析證實4個重組體插入片段的堿基序列均完全正確,成功轉(zhuǎn)染SKmel-28細(xì)胞后,均能顯著抑制腫瘤細(xì)胞VEGF mRNA和蛋白的表達(dá),與對照組相比有顯著性差異(P0.01)。抑制效應(yīng)最強(qiáng)的重組載體是X-26-2n-1,MTS法和流式細(xì)胞儀檢測顯示,SKmel-28細(xì)胞轉(zhuǎn)染X-26-2n-1后,細(xì)胞增殖受到明顯抑制,增殖抑制效應(yīng)具有時間依賴性,與陰性對照組比較差異具有顯著性(P0.05),與空白組比較細(xì)胞增殖抑制更加明顯(P0.01);腫瘤細(xì)胞早期凋亡率、晚期凋亡率、總凋亡率也顯著高于對照組(P0.01)。結(jié)論外源性靶向VEGF的miRNA能夠顯著降低黑色素瘤細(xì)胞SKmel-28 VEGF基因和蛋白的表達(dá)水平,抑制腫瘤細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
[Abstract]:Objective to study the effects of exogenous miRNA targeting vascular endothelial growth factor (VEGF) gene on the proliferation and apoptosis of malignant melanoma cells. Methods according to the sequence of VEGF gene, four pairs of miRNA interference fragments were designed and synthesized, and the eukaryotic expression vectors were constructed, namely X-26-1-3OX-26-2n-1OX-26-3-2 and X-26-4-4, respectively. The integrity of the inserted sequence was identified by sequencing analysis. The four recombinant expression vectors were transfected into melanoma cell line SKmel-28 by liposome method. RT-PCR was used to detect the mRNA expression of VEGF gene in the transfected cells. Western blotting was used to detect the effect of miRNA on the expression of VEGF protein. MiRNA interference sequence. MTS and flow cytometry were used to detect the inhibitory effect of synthetic VEGF targeting miRNA on the growth of SKmel-28 and the effect on apoptosis of tumor cells. Results the sequence analysis showed that the sequence of the four inserted fragments was correct. After transfection of SKmel-28 cells, the expression of VEGF mRNA and protein in tumor cells was significantly inhibited, and there was significant difference compared with the control group (P 0.01). The strongest inhibitory effect of recombinant vector was X-26-2n-1MTS assay and flow cytometry analysis showed that after transfection of X-26-2n-1, the cell proliferation was significantly inhibited, and the inhibitory effect was time-dependent. Compared with the negative control group, the difference was significant (P 0.05), the inhibition of cell proliferation was more obvious than that of the blank group, and the early apoptosis rate, the late apoptosis rate and the total apoptosis rate of tumor cells were significantly higher than those of the control group. Conclusion exogenous miRNA targeting VEGF can significantly reduce the expression of SKmel-28 VEGF gene and protein, inhibit the proliferation and induce apoptosis of melanoma cells.
【作者單位】: 廣東省人民醫(yī)院//廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚科;廣東省人民醫(yī)院//廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院普通外科;
【基金】:廣東省科技計劃項目(2010B080701022,2010B080701021)
【分類號】:R739.5
【參考文獻(xiàn)】
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【二級參考文獻(xiàn)】
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