本文選題：BRAF抑制劑 + 耐藥機制��； 參考：《南方醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：背景黑色素瘤是來源于黑色素細胞的一類惡性腫瘤,常見于皮膚,是惡性程度最高的皮膚腫瘤。既往治療晚期黑色素瘤的藥物種類少,療效低,預后很差。近年來,免疫治療和個體化靶向治療的發(fā)展使黑色素瘤的治療取得了突破性進展。研究發(fā)現(xiàn),40-60%的黑色素瘤患者存在BRAF基因突變,其中90%為BRAFV600E突變,因此,靶向BRAF的小分子抑制劑成為研究熱點。維羅非尼(Vemurafenib,PLX4032)是2011年批準進入臨床應用的一種選擇性BRAF抑制劑,直接靶向抑制MAPK信號通路活性,顯著延長了患者的無進展生存期(PFS)和總生存期(OS),然而,大多數(shù)患者在治療1年內發(fā)生耐藥,出現(xiàn)病情進展。已報道的耐藥機制主要有NRAS和MEK1突變或EGFR、PDGFRb、FGFRs和IGF1R等酪氨酸激酶受體(RTK)的過表達引起的MAPK信號通路再活化或PI3K/AKT信號旁路的激活等。PTEN是重要的抑癌基因,30%的黑色素瘤發(fā)生PTEN突變,且常與BRAF突變同時發(fā)生。PTEN缺失可通過活化PI3K/AKT通路和抑制細胞凋亡導致BRAF抑制劑的原發(fā)耐藥,然而,某些PTEN突變型黑色素瘤仍然對BRAF抑制劑敏感。因此,PTEN基因狀態(tài)與BRAF抑制劑耐藥的關系目前并不完全清楚。本文重點研究PTEN基因狀態(tài)是否影響黑色素瘤對BRAF抑制劑的獲得性耐藥及其具體機制。內容和方法1.以逐步增加藥物劑量法誘導構建6株BRAF抑制劑耐藥人黑色素瘤細胞株(4株PTEN野生型101、103、111和A375sm,2株PTEN突變型105和M28)。2.Western Blot檢測PLX4032不同濃度或時間作用下,耐藥細胞MAPK和PI3K/AKT信號通路的活化水平。3.CCK8檢測BRAF、AKT和MEK抑制劑單獨或聯(lián)合對耐藥細胞的增長抑制作用;CalcuSyn2.11軟件分析藥物協(xié)同效應。4.磷酸化RTK抗體陣列同時檢測42種受體酪氨酸激酶(RTKs)在親代細胞與耐藥細胞中的相對磷酸化水平;以AXL抑制劑R428作用耐藥細胞株,檢測耐藥細胞對BRAF抑制劑敏感性的變化。5.統(tǒng)計學分析:采用One-way ANOVA和Student t檢驗方法分別進行多組數(shù)據(jù)間和兩組數(shù)據(jù)間的比較。結果1.成功誘導建立6株BRAF抑制劑耐藥人黑色素瘤細胞株101R、103R、105R、111R、A375smR 和 M28R,耐藥指數(shù) RI 分別為 35.1、89.4、1.9、3.8、22.9 和 19.0。2.MAPK信號通路在PTEN突變型和野生型耐藥細胞中均活化;PI3K/AKT通路僅在PTEN野生型耐藥細胞中活化,在PTEN突變型耐藥細胞中不活化或表達下調。3.PTEN野生型耐藥細胞中,BRAF抑制劑與AKT抑制劑具有協(xié)同抑制效應,與MEK抑制劑無協(xié)同抑制效應;PTEN突變型耐藥細胞中,BRAF抑制劑與AKT抑制劑或MEK抑制劑均有協(xié)同抑制效應,其中以與MEK抑制劑的協(xié)同效應更好;三種抑制劑聯(lián)合僅在PTEN突變型耐藥細胞中顯示出比兩藥方案更好的效果。4.受體酪氨酸激酶AXL蛋白的磷酸化水平僅在PTEN野生型耐藥細胞中明顯升高;通過抑制AXL蛋白的磷酸化水平,耐藥細胞對BRAF抑制劑的敏感性恢復,p-AKT的表達水平下調。結論1.不同PTEN基因狀態(tài)的黑色素瘤對BRAF抑制劑的獲得性耐藥機制不同。2.PI3K/AKT信號通路的活化是導致PTEN野生型黑色素瘤對BRAF抑制劑耐藥的主要機制之一;MAPK信號通路活化在PTEN突變型黑色素瘤對BRAF抑制劑耐藥中起主導作用。3.受體酪氨酸激酶AXL通過激活PI3K/AKT信號通路介導PTEN野生型黑色素瘤對BRAF抑制劑的耐藥,有可能是逆轉BRAF抑制劑耐藥的新靶點。
[Abstract]:In recent years , the expression of PTEN is a selective BRAF inhibitor for the treatment of advanced melanoma , which is a selective BRAF inhibitor for the treatment of advanced melanoma . Conclusion 1 . Activation of the receptor tyrosine kinase AXL protein plays a dominant role in the resistance to BRAF inhibitor . Conclusion 1 . Activation of the receptor tyrosine kinase AXL protein plays a dominant role in the resistance of the BRAF inhibitor .
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R739.5
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本文編號：1912912