本文選題：GAB + 黑色素瘤��； 參考：《中華腫瘤防治雜志》2017年14期

【摘要】：目的惡性黑色素瘤主要由皮膚黑色素細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化引起。Grb2協(xié)同結(jié)合蛋白2(Grb2-associated binding protein-2,GAB2)是一個(gè)腳手架蛋白,通過招募受體酪氨酸激酶等膜受體進(jìn)行信號(hào)傳遞,已經(jīng)證實(shí)GAB2蛋白與多種腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移有關(guān),但GAB2蛋白抑制黑色素瘤的機(jī)制還不清楚。本研究通過沉默GAB2基因?qū)K-Mel28細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的影響,探討GAB2基因促進(jìn)SK-Mel28黑色素瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路變化。方法采用RNA干擾技術(shù)沉默GAB2基因表達(dá)。采用Matrigel法檢測SK-Mel28細(xì)胞在沉默GAB2基因表達(dá)后48h對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的影響;采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測SK-Mel28細(xì)胞在沉默GAB2基因表達(dá)后細(xì)胞遷移能力的改變;蛋白質(zhì)印跡法檢測PI3K和MAPK信號(hào)通路的關(guān)鍵蛋白、pAKT、pERK、pPDK1和β-catenin的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果沉默GAB2基因可使SK-Mel28細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力和遷移能力減弱,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示,SK-Mel28細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力降低了54.5%,與scramble RNA對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,t=5.053,P0.001;SK-Mel28細(xì)胞在轉(zhuǎn)染GAB2siRNA 18h后細(xì)胞的遷移能力減弱,與scramble RNA對(duì)照組比較遷移距離減少了43.0%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,t=3.877,P=0.001。SK-Mel28黑色素瘤細(xì)胞的GAB2蛋白表達(dá)水平降低后,PI3K信號(hào)通路的關(guān)鍵分子pAKT和pPDK1表達(dá)下調(diào),而T-AKT和T-PDK1無明顯變化,細(xì)胞膜表面粘附因子β-catenin蛋白表達(dá)下降。結(jié)論 GAB2蛋白的表達(dá)水平與SK-Mel28黑色素瘤的轉(zhuǎn)移相關(guān),其機(jī)制與GAB2蛋白調(diào)控下游的PI3K信號(hào)通路并抑制轉(zhuǎn)移相關(guān)因子β-catenin有關(guān)。
[Abstract]:Objective malignant melanoma is mainly caused by malignant transformation of melanocytes. Grb2 cobinding protein 2(Grb2-associated binding protein-2 GAB2) is a scaffold protein, which is transmitted by recruitment of receptor tyrosine kinase and other membrane receptors.It has been proved that GAB2 protein is involved in the occurrence and metastasis of many kinds of tumors, but the mechanism of GAB2 protein inhibiting melanoma is unclear.In this study, the effect of silencing GAB2 gene on the metastatic ability of SK-Mel28 cells was studied to investigate the changes of signal transduction pathway of SK-Mel28 melanoma cells promoted by GAB2 gene.Methods GAB2 gene expression was silenced by RNA interference technique.Matrigel assay was used to detect the effect of SK-Mel28 cells on the ability of cell metastasis after GAB2 gene expression was silenced for 48 hours, and cell scratch assay was used to detect the change of cell migration ability of SK-Mel28 cells after silencing the expression of GAB2 gene.The protein expression levels of pAKTT pERKN pPDK1 and 尾 -catenin in PI3K and MAPK signaling pathway were detected by Western blotting.Results silencing GAB2 gene decreased the metastasis and migration ability of SK-Mel28 cells.Statistical analysis showed that the metastatic ability of SK-Mel28 cells decreased by 54.5%, which was significantly lower than that of scramble RNA control group. The migration ability of SK-Mel28 cells was decreased after transfection of GAB2siRNA for 18 h.Compared with the control group of scramble RNA, the migration distance was decreased by 43.0. The difference was statistically significant. The expression of GAB2 protein in melanoma cells was significantly decreased, but the expression of pAKT and pPDK1, the key molecules of PI3K signaling pathway, was down-regulated, but T-AKT and T-PDK1 did not change significantly.The expression of adhesion factor 尾-catenin on cell membrane was decreased.Conclusion the expression of GAB2 protein is related to the metastasis of SK-Mel28 melanoma, and its mechanism is related to the regulation of downstream PI3K signal pathway by GAB2 protein and the inhibition of metastasis related factor 尾 -catenin.
【作者單位】： 天津大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院微生物與免疫學(xué)教研室;天津市腫瘤醫(yī)院血液科;
【基金】：天津市應(yīng)用基礎(chǔ)與前沿技術(shù)研究計(jì)劃(13JCYBJC40800)
【分類號(hào)】：R739.5

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本文編號(hào)：1767038