本文選題：腫瘤 + 黑色素瘤相關(guān)抗原��； 參考：《青島大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的：旨在探討人黑色素瘤相關(guān)抗原MAGE-B18與核因子κB調(diào)控蛋白TNIP1間的相互作用,同時(shí)確定其相互作用的結(jié)合位點(diǎn),從而了解其相互結(jié)合的具體分子機(jī)制。在明確其分子作用機(jī)制后,采用多種手段證實(shí)其下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。為該抗原的功能研究奠定基礎(chǔ)。 方法：將人核因子K B調(diào)控蛋白TNIP1及人黑色素瘤相關(guān)抗原MAGE-B18共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,使用免疫共沉淀鑒定hMAGE-B18與TNIP1在293T細(xì)胞中是否存在相互作用。確定其能夠相互結(jié)合后,使用PCR方法構(gòu)建這兩種蛋白缺失不同結(jié)構(gòu)域的突變體攜帶HA及Myc標(biāo)簽的真核表達(dá)載體并使其在293T細(xì)胞中表達(dá)后；再次使用免疫共沉淀確定其具體的結(jié)合位點(diǎn)。了解其相互結(jié)合的集體分子機(jī)制后,使用Western-Blotting等手段觀察其下游信號(hào)分子的活化情況。并使用流式細(xì)胞術(shù)觀測(cè)293T細(xì)胞活化后細(xì)胞凋亡率的變化。 結(jié)果：免疫共沉淀結(jié)果表明TNIP1與MAGE-B18蛋白在細(xì)胞內(nèi)能夠相互結(jié)合。成功構(gòu)建了人核因子K B調(diào)控蛋白TNIP1及人黑色素瘤相關(guān)抗原MAGE-B18攜帶有標(biāo)簽蛋白的突變體,并且成功地在293T細(xì)胞中進(jìn)行了表達(dá)。并且鑒定出了TNIP1以及MAGE-B18的相互結(jié)合位點(diǎn)分別位于311-535aa與114-284aa,使用半定量Western-Blotting驗(yàn)證了TNIP1與MAGE-B18可以發(fā)生協(xié)同作用,從而影響核因子K B的活化。同時(shí)使用流式細(xì)胞術(shù)證實(shí)了TNIP1與MAGE-B18發(fā)生協(xié)同作用后可以抑制細(xì)胞凋亡。 結(jié)論：黑色素瘤相關(guān)抗原MAGE-B18可以與人核因子K B調(diào)控蛋白TNIP1在細(xì)胞內(nèi)發(fā)生相互作用。同時(shí)這兩種蛋白可以發(fā)生協(xié)同效應(yīng),從而抑制核因子K B活化。同時(shí),在這兩種蛋白的共同作用下可以顯著抑制由于NF-κB活化所產(chǎn)生的細(xì)胞凋亡這為我們進(jìn)一步研究MAGE-B18以及TNIP1在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中的作用奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective : To investigate the interaction between human melanoma - associated antigen MAGE - B18 and nuclear factor - 魏B regulatory protein TNIP1 , and to identify the binding sites of its interaction , so as to understand the specific molecular mechanism of the interaction of human melanoma - associated antigen MAGE - B18 .

Methods : Human nuclear factor K - B regulatory protein TNIP1 and human melanoma - associated antigen MAGE - B18 were co - transfected into 293 cells .
The specific binding sites were determined by using immune co - precipitation . The activation of downstream signaling molecules was observed by Western - Blotting and Western - Blotting .

Results : The results showed that TNIP1 and MAGE - B18 protein were able to bind to each other in the cells . The human nuclear factor K - B regulatory protein TNIP1 and human melanoma - associated antigen MAGE - B18 were successfully constructed .

Conclusion : The melanoma - associated antigen MAGE - B18 can interact with the human nuclear factor K - B regulatory protein TNIP1 in the cell . At the same time , the two proteins can inhibit the activation of nuclear factor K B . At the same time , the apoptosis induced by NF - 魏B activation can be significantly inhibited under the coaction of these two proteins , which lays a foundation for further study on the role of MAGE - B18 and TNIP1 in the development of tumor .

【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R739.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 陳雪華,劉炳亞,張冬青,張奕,張軼,李建芳,朱正綱;MAGE-1、MAGE-3基因在胃癌和胃活檢組織中的表達(dá)及意義[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2004年03期

2 彭良平,王貴齊,冉宇靚,劉海燕,孫立新,遇瓏,楊治華;MAGE-1基因在人食管癌中的表達(dá)及基因克隆[J];免疫學(xué)雜志;2001年02期

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本文編號(hào)：1761335