本文選題：SZ95人皮脂腺細(xì)胞　切入點(diǎn)：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激　出處：《蘭州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：痤瘡(acne)是一種毛囊皮脂腺慢性炎癥性皮膚病,為最常見(jiàn)的皮膚病之一。好發(fā)于青少年,發(fā)病率高達(dá)80%左右。是最常見(jiàn)的毀容性皮膚病,對(duì)患者的身心均有較大的影響。其中皮脂腺炎癥及皮脂分泌過(guò)多是痤瘡發(fā)病的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。ALA-PDT(5-氨基酮戊酸+紅光光動(dòng)力)治療痤瘡已有效應(yīng)用于臨床多年,但其作用機(jī)制尚不明確。鑒于此,本研究選用生物學(xué)特征與人正常皮脂腺細(xì)胞相近的SZ95人皮脂腺細(xì)胞作為研究對(duì)象,以GRP78、CHOP、Caspase-12為指標(biāo)。研究ALA-PDT對(duì)該細(xì)胞ERS凋亡信號(hào)通路的影響,為進(jìn)一步闡明ALA-PDT治療痤瘡的作用機(jī)制,研究結(jié)果將為ALA-PDT治療痤瘡提供理論依據(jù)。目的:1.明確ALA-PDT作用于SZ95人皮脂腺細(xì)胞的ALA安全有效濃度及紅光輻照劑量;研究ALA-PDT作用該細(xì)胞后檢測(cè)ERS標(biāo)志分子GRP78及ERS凋亡相關(guān)標(biāo)志性分子CHOP、Caspase-12的調(diào)節(jié)作用。2.明確毒胡蘿卜素(TG)引起ERS的安全有效濃度;檢測(cè)ERS標(biāo)志分子GRP78、CHOP、Caspase-12來(lái)證明TG誘導(dǎo)該細(xì)胞發(fā)生ERS;3.明確ALA-PDT對(duì)已被TG作用后的該細(xì)胞細(xì)胞活力及ERS標(biāo)志性分子GRP78及凋亡相關(guān)標(biāo)志性分子CHOP、Caspase-12的影響。方法:1 MTT法分別篩僅有ALA、僅有紅光及ALA-PDT的安全有效ALA濃度及紅光劑量。ALA和紅光實(shí)驗(yàn)均分為空白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,均設(shè)調(diào)零孔(無(wú)細(xì)胞,僅加培養(yǎng)基)。ALA組分別給予不同濃度的ALA溶液;紅光組分別給不同劑量的紅光輻照,時(shí)間均為20min;對(duì)照組和調(diào)零孔僅加培養(yǎng)液。ALA各組及調(diào)零孔均避光孵育2h后換液;紅光實(shí)驗(yàn)組僅紅光組給予不同劑量的紅光輻照,其他組不做處理僅換液,后均繼續(xù)培養(yǎng)24h。ALA-PDT實(shí)驗(yàn)分兩組:空白對(duì)照組和ALA-PDT組,設(shè)調(diào)零孔。ALA-PDT組先用相應(yīng)濃度的ALA避光孵育2h,后給予相應(yīng)劑量的紅光輻照20min,對(duì)照組、調(diào)零孔均不處理。輻照后繼續(xù)培養(yǎng)24h。最后均用MTT法檢測(cè)ALA的安全有效濃度及紅光的安全有效劑量。ALA為25μg/mL+紅光為5J/cm2組成的ALA-PDT實(shí)驗(yàn)組作用細(xì)胞24h后,提取mRNA。用qRT-PCR法檢測(cè)GRP78、CHOP及Caspase-12mRNA的表達(dá)。2.MTT法篩選TG的安全有效濃度。實(shí)驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)組及空白對(duì)照組,設(shè)調(diào)零孔。不同濃度的TG作用于細(xì)胞24h后MTT法篩選安全有效的TG濃度。用0.5μg/mLTG作用于細(xì)胞(該濃度細(xì)胞存活率與空白對(duì)照組間明顯差異,但為臨界值)24h后提取RNA及蛋白分別用qRT-PCR和WB法檢測(cè)GRP78和CHOP及Caspase-12mRNA及蛋白的表達(dá)。3.MTT法篩TG作用細(xì)胞后的ALA-PDT的安全有效濃度及劑量。分為T(mén)G對(duì)照組(僅加TG)和ALA-PDT組,設(shè)調(diào)零孔。各組細(xì)胞均加0.5μg/mLTG培養(yǎng)24h后,ALA-PDT組先用不同濃度的ALA避光孵育2h,后輻照紅光(劑量均為5J/cm2)。其他組處置同前。輻照后繼續(xù)培養(yǎng)24h,MTT法篩選ALA-PDT組的安全有效濃度及劑量。0.5μg/mLTG作用細(xì)胞24h后,用ALA濃度為2.0μg/mL+紅光劑量5J/cm2組成的ALA-PDT組作用以上細(xì)胞24h后提取細(xì)胞RNA及蛋白。用qRT-PCR及WB分別檢測(cè)GRP78、CHOP和Caspase-12 mRNA和蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.與空白對(duì)照組比較,ALA實(shí)驗(yàn)組及紅光實(shí)驗(yàn)組經(jīng)以上述方法作用后細(xì)胞存活率均未見(jiàn)顯著性差異,(P0.05),提示單獨(dú)ALA或紅光對(duì)SZ95人皮脂腺細(xì)胞的存活率無(wú)明顯影響。與對(duì)照組比,ALA-PDT實(shí)驗(yàn)組ALA濃度為200、400、800μg/mL時(shí),各劑量紅光輻照后細(xì)胞存活率均明顯下降,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);ALA溶液為100μg/m L,經(jīng)≥2.5J/cm2紅光輻照,24h后細(xì)胞存活率明顯降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);當(dāng)ALA溶液為50μg/mL,經(jīng)≥5J/cm2紅光輻照,24h后細(xì)胞存活率明顯降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);當(dāng)ALA溶液為25μg/mL時(shí),≥10J/cm2紅光輻照后細(xì)胞存活率明顯下降,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);其他ALA-PDT組經(jīng)以上處理后細(xì)胞存活率未見(jiàn)明顯改變,(P0.05)。以上結(jié)果說(shuō)明ALA-PDT對(duì)細(xì)胞存活率的影響有明顯的ALA濃度及紅光劑量的依賴(lài)性。因25μg/mL ALA+5 J/cm2紅光組成的ALA-PDT作用于細(xì)胞,其存活率與空白對(duì)照組相比無(wú)明顯改變,其又為細(xì)胞存活率臨界值的條件。用該條件作用細(xì)胞后檢測(cè)GRP78、CHOP及Caspase-12mRNA的表達(dá)均明顯上調(diào),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P?0.05)。2.與對(duì)照組比,TG為0.06、0.125、0.25、0.5μg/mL時(shí)細(xì)胞存活率與對(duì)照組無(wú)明顯差異(P0.05);TG分別為1、2、4、8μg/mL時(shí),24h后細(xì)胞存活率明顯下降,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。TG濃度為0.5μg/mL時(shí)存活率與對(duì)照組比無(wú)明顯改變,但為臨界值,該條件作用細(xì)胞后GRP78、CHOP及Caspase-12mRNA及蛋白的表達(dá)均明顯上調(diào),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.與TG對(duì)照組相比當(dāng)ALA為0.25、0.5、1.0、4、7μg/mL時(shí)的ALA-PDT實(shí)驗(yàn)組,細(xì)胞存活率無(wú)明顯差異,(P0.05);當(dāng)ALA為12.5、25μg/mL時(shí)的ALA-PDT實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞存活率明顯下降,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);當(dāng)ALA為2.0μg/mL時(shí)的ALA-PDT細(xì)胞存活率明顯上調(diào),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。因ALA 2.0μg/mL+5J/cm2組成的ALA-PDT實(shí)驗(yàn)組對(duì)TG誘導(dǎo)發(fā)生ERS的該細(xì)胞的存活率明顯增高,故選該條件的ALA-PDT作用于TG誘導(dǎo)ERS的細(xì)胞,結(jié)果與TG對(duì)照組比GRP78、CHOP和Caspase-12mRNA和蛋白的表達(dá)均明顯下調(diào)。有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.僅有ALA、僅有紅光作用于SZ95人皮脂腺細(xì)胞,對(duì)細(xì)胞存活率無(wú)明顯影響;ALA-PDT作用于該細(xì)胞其存活率與ALA濃度及紅光劑量有明顯相關(guān)性。ALA25μg/m L+紅光5J/cm2組成ALA-PDT組其不影響細(xì)胞存活率,但引起ERS標(biāo)志分子GRP78及凋亡相關(guān)分子CHOP及Caspase-12上調(diào),說(shuō)明ALA-PDT可誘導(dǎo)該細(xì)胞發(fā)生凋亡,且ALA濃度及紅光劑量越高越明顯;2.當(dāng)TG0.5μg/mL時(shí)細(xì)胞存活率明顯下降。當(dāng)TG≤0.5μg/mL時(shí)細(xì)胞存活率無(wú)明顯影響。當(dāng)TG為0.5μg/mL時(shí)對(duì)細(xì)胞存活率無(wú)明顯影響,但可成功誘導(dǎo)ERS;3.當(dāng)2.0μg/mLALA+5 J/cm2紅光組成的ALA-PDT實(shí)驗(yàn)組對(duì)TG作用后的該細(xì)胞的存活率有明顯提高作用。其機(jī)制可能為:該條件下的ALA-PDT能夠抑制ERS通路中相關(guān)信號(hào)分子GRP78、CHOP和Caspase12的表達(dá)。提示該條件ALA-PDT可抑制該細(xì)胞發(fā)生的ERS,從而起到一定的保護(hù)作用。
[Abstract]:The effect of ALA - PDT on the apoptosis signal pathway of SZ95 was studied . The effect of ALA - PDT on the apoptosis signal pathway of SZ95 was studied . All groups of ALA - PDT group were treated with ALA - PDT group . After 24 h , the cells were incubated for 24 h . After 24 h , the cells were incubated for 24 h . After 24 h , the cells were incubated for 24 h . After 24 h of irradiation , the cells were incubated for 24 h . The results were as follows : 1 . The results were as follows : 1 . The results were as follows : 1 . The results showed that : 1 . The results showed that the concentration of ALA - PDT was significantly different from that of ALA - PDT group . The survival rate of ALA - PDT group was significantly higher than that of control group ( P0.05 ) . The survival rate of ALA - PDT group was significantly higher than that of control group ( P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R758.733

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本文編號(hào)：1700200