本文選題：銀屑病　切入點：白細(xì)胞介素-36α　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景銀屑病(Psoriasis)是最常見的慢性炎癥增生性皮膚病之一,病情復(fù)雜、易復(fù)發(fā),給患者和家庭帶來了巨大的精神和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[1,2]。銀屑病發(fā)病與鏈球菌感染、遺傳易感性、環(huán)境因素、情緒、免疫紊亂等有關(guān),其中持續(xù)的皮膚免疫系統(tǒng)應(yīng)答失調(diào)在銀屑病的發(fā)病及炎癥過程中占有至關(guān)重要的地位[3,4,5],它可以導(dǎo)致各種慢性炎癥性皮膚病的發(fā)生。由于免疫調(diào)節(jié)主要通過細(xì)胞因子間的相互作用來實現(xiàn),因而細(xì)胞因子與銀屑病的關(guān)系一直是國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點。以往大量研究表明IL-23/IL-17軸在銀屑病中起重要作用,然而近來研究發(fā)現(xiàn)IL-36炎癥通路可能優(yōu)于該軸在銀屑病中的作用[6,7]。研究發(fā)現(xiàn)IL-36及其受體在銀屑病患者皮損及血清中過度表達(dá)[8],敲除基因IL-36的咪喹莫特銀屑病小鼠比敲除基因IL-17的小鼠表現(xiàn)出更大的治療作用[9],腹腔注射IL-36抗體的小鼠可以使銀屑病小鼠皮損減輕[10],這提示IL-36可能在銀屑病發(fā)病機(jī)制中起重要作用。IL-36是一種新型促炎因子,屬于IL-1家族,由3個生物學(xué)功能相似的分子:IL-36α,IL-36β及IL-36γ組成(既往命名為IL-1F6,IL-1F8及IL-1F9)[11]。目前有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)IL-36是角質(zhì)形成細(xì)胞分泌CCL20的強(qiáng)烈誘導(dǎo)劑[12],皮下注射IL-36α可導(dǎo)致趨化因子、淋巴細(xì)胞等炎癥細(xì)胞浸潤[13],同時Yijun Carrier等也研究發(fā)現(xiàn)IL-36可以促進(jìn)Th17細(xì)胞活化分泌更多IL-17,而CC趨化因子配體(CCL)20、CC趨化因子受體(CCR)6的表達(dá)與IL-17產(chǎn)生具有正相關(guān)性[14,15],這進(jìn)一步提示了 IL-36與CCL20可能存在相互作用關(guān)系。綜上所述,IL-36可以促進(jìn)Th17細(xì)胞活化,并刺激角質(zhì)形成細(xì)胞分泌CCL20,可能參與銀屑病的發(fā)病機(jī)制,因而進(jìn)一步探討IL-36在銀屑病的作用機(jī)理就顯得極為重要。鑒于國外有研究報道IL-36家族中IL-36α在銀屑病的作用可能優(yōu)于IL-36β、IL-36γ[16],故本研究選擇IL-36α作為研究對象,通過構(gòu)建咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病模型,采用實時熒光定量PCR和Western Blot檢測IL-36α在小鼠銀屑病皮損中的表達(dá);另外,通過腹腔注射IL-36抗體,采用實時熒光定量PCR、免疫組化方法,研究IL-36抗體對銀屑病樣皮損及銀屑病相關(guān)因子CCL20的影響,以進(jìn)一步探討IL-36家族在銀屑病的作用機(jī)制,為銀屑病的治療及預(yù)后提供新的理論依據(jù)。研究目標(biāo)1.構(gòu)建咪喹莫特乳膏誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型;2.初步探討IL-36α在咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病樣皮損中的表達(dá)。3.研究IL-36抗體對咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病樣炎癥是否具有緩解作用。4.研究IL-36抗體對咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病樣皮損中CCL20的影響,從而探討IL-36參與銀屑病的可能作用機(jī)理。研究方法1.建立咪喹莫特乳膏誘導(dǎo)的小鼠銀屑病模型,對照組涂抹凡士林乳膏;2.通過實時熒光定量PCR、Western blot檢測IL-36α在小鼠皮損中的表達(dá)。3.將BALB/c小鼠隨機(jī)分為3組:空白對照組:凡士林乳膏+腹腔注射PBS緩沖液;模型組:咪喹莫特乳膏+腹腔注射PBS緩沖液;實驗組:咪喹莫特乳膏+腹腔注射IL-36抗體。4.每天觀察小鼠銀屑病樣炎癥反應(yīng)的變化,同時進(jìn)行PASI評分;通過HE染色觀察組織病理皮損改變,并測量表皮層的垂直厚度。5.通過免疫組織化學(xué)法、實時熒光定量PCR檢測小鼠皮損中CCL20的表達(dá)。結(jié)果1.IL-36α在小鼠銀屑病皮損及正常小鼠皮膚中的表達(dá)實時定量PCR結(jié)果顯示,模型組IL-36α的mRNA的表達(dá)顯著高于對照組(t=7.523,P0.05)。免疫印跡結(jié)果顯示,模型組小鼠皮損中IL-36α的蛋白表達(dá)較對照組明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=31.695,P0.05)。以上結(jié)果提示IL-36α可能參與了銀屑病的發(fā)病機(jī)制。2.IL-36抗體對咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病樣皮損的影響研究發(fā)現(xiàn)空白對照組小鼠背部皮膚未見明顯異常;涂抹咪喹莫特第3天模型組部分出現(xiàn)淡紅斑,隨后皮膚漸漸出現(xiàn)增厚,到涂抹咪喹莫特乳膏第4-6天,模型組紅斑顏色加深、鱗屑變厚密,第7-8天呈典型銀屑病樣改變,部分小鼠開始出現(xiàn)脫屑,可見點狀出血、薄膜現(xiàn)象;相比模型組,IL-36抗體實驗組在涂抹咪喹莫特第3天時小部分小鼠背部皮膚出現(xiàn)淡紅斑伴少量鱗屑,至第5-8天鱗屑、紅斑及皮膚厚度才慢慢加重,但各指標(biāo)均不如模型組,且第8天實驗組小鼠未出現(xiàn)典型的銀屑病樣炎癥皮損,但鱗屑、紅斑及增厚的指標(biāo)仍比空白對照組明顯升高。從臨床表現(xiàn)來看,這表明IL-36抗體可以改善咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病樣炎癥反應(yīng)。第8天取小鼠背部皮膚進(jìn)行HE染色。結(jié)果發(fā)現(xiàn)對照組小鼠皮膚未見明顯異常;模型組大部分小鼠皮損呈現(xiàn)典型的銀屑病樣改變,可見角質(zhì)層增厚、表皮突延長增寬;而實驗組小鼠表皮層較平整,角化不全的細(xì)胞數(shù)減少,且厚度較模型組低。從病理結(jié)果看,也表明IL-36抗體可以改善咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病樣炎癥反應(yīng)。3.IL-36抗體對咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病樣皮損CCL20的影響免疫組化結(jié)果示空白對照組小鼠CCL20僅僅少量表達(dá)或無表達(dá),顏色呈淡褐色;模型組小鼠CCL20表達(dá)主要定位于表皮層,顏色呈深褐色、棕褐色,著色細(xì)胞層數(shù)及數(shù)量較對照組顯著增多;IL-36抗體實驗組小鼠CCL20也主要定位于表皮層,著色細(xì)胞層數(shù)及數(shù)量明顯比模型組低,CCL20染色呈淺褐色。免疫組化結(jié)果示,實驗組與模型組相比,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(Z=3.25,P0.05),實驗組與對照組相比,差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(Z =1.45,P0.5)。通過非參數(shù)檢驗分析,我們發(fā)現(xiàn)模型組和實驗組小鼠CCL20主要表達(dá)于表皮層,且實驗組、對照組與模型組在CCL20表達(dá)方面均具有顯著性差異(P0.05)。實時熒光定量PCR也顯示實驗組(1.63±0.19)與模型組(2.65±0.47)皮損CCL20的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。這提示IL-36抗體可以抑制CCL20在咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病皮損中的表達(dá)。結(jié)論1.IL-36α在咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病樣皮損中表達(dá)升高,提示IL-36α可能參與銀屑病的發(fā)病機(jī)制。2.IL-36抗體可以改善咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病樣炎癥反應(yīng),其作用可能與抑制CCL20的表達(dá)有關(guān)。
[Abstract]:IL - 36 and its receptors play an important role in the pathogenesis of psoriasis . The effects of IL - 36 on psoriasis - like skin lesions and psoriasis - like skin lesions were investigated by real - time fluorescence quantitative PCR and Western Blot . Western blot showed that the expression of IL - 3偽 in skin lesion of model group was significantly higher than that of control group ( t = 31.695 , P0.05 ) . The results showed that IL - 36 antibody could be involved in the pathogenesis of psoriasis . The results showed that IL - 36 antibody could improve imiquimod - induced psoriasis - like inflammatory reaction in mice . The results showed that IL - 36 antibody could improve imiquimod - induced psoriasis - like inflammatory reaction . The expression of IL - 36 偽 in the skin lesion of mice induced by imiquimod was significantly higher than that in the model group ( 2.65 鹵 0.47 ) .

【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R758.63

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1699987