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ARE途徑的影響及其對(duì)肝細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用

發(fā)布時(shí)間:2016-11-07 14:19

  本文關(guān)鍵詞:基于七點(diǎn)檢查表準(zhǔn)則的黑色素瘤診斷模型與檢測(cè)技術(shù)研究,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。


【摘要】核因子E2相關(guān)因子2(Nuclearfactorerythroid-2-relatedfactor2,Nrf2)通過(guò)作用于抗氧化蛋白啟動(dòng)子區(qū)域的抗氧化反應(yīng)元件(anti-oxidantresponseelement,ARE),發(fā)揮抗氧化應(yīng)激損傷作用。Nrf2-ARE是目前為止發(fā)現(xiàn)的最為重要的內(nèi)源性抗氧化應(yīng)激信號(hào)通路。金絲桃苷(Hyperoside,Hyp)是廣泛存在于各種植物果實(shí)及全草中的一種重要天然產(chǎn)物,屬于黃酮醇苷化合物。它具有廣泛的藥理活性,其機(jī)制主要為抗氧化。氧化應(yīng)激是酒精性肝病、非酒精性脂肪肝、缺血再灌注肝損傷等肝臟疾病的主要發(fā)病機(jī)制。植物黃酮對(duì)肝臟疾病的防治多與其抗氧化作用有關(guān)。目的本研究以缺氧或H202損傷的人肝細(xì)胞(L02)為模型,研究Hyp對(duì)氧化應(yīng)激損傷的L02細(xì)胞中Nrf2-ARE信號(hào)通路的影響,并探討其對(duì)肝細(xì)胞的保護(hù)作用。方法離體培養(yǎng)L02細(xì)胞,設(shè)置正常對(duì)照組,缺氧模型組,H202模型組及Hyp高、中、低劑量三個(gè)預(yù)處理組。細(xì)胞處理結(jié)束后,CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活力,試劑盒檢測(cè)SOD活性和丙二醛(MDA)含量,流式細(xì)胞儀檢測(cè)活性氧(ROS)水平,探討Hyp對(duì)氧化應(yīng)激引起L02細(xì)胞損傷的預(yù)保護(hù)作用。隨后重新設(shè)置正常對(duì)照組,缺氧模型組,H202模型組,單獨(dú)Hyp處理組及Hyp預(yù)處理組。qRT-PCR法及、Westernblot法分析細(xì)胞保護(hù)蛋白血紅素加氧酶-1(H0-1)、超氧岐化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GPx)及Nrf2、BTB-CNC異體同源蛋白-1(Bachl)、Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關(guān)蛋白-1(Keap1)的基因和蛋白表達(dá)水平的變化,研究Hyp對(duì)氧化應(yīng)激損傷的L02細(xì)胞中Nrf2-ARE信號(hào)通路的影響。結(jié)果缺氧或H202造成的氧化應(yīng)激會(huì)引起L02細(xì)胞活力和SOD活性明顯降低,MDA含量和ROS水平顯著升高。兩種方式Hyp預(yù)處理均明顯改善這些指標(biāo),即削弱缺氧或H202引起的細(xì)胞活力與SOD等活性降低、MDA含量與ROS水平升高,減弱缺氧或H202引起的氧化應(yīng)激損傷。qRT-PCR和、Westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示,缺氧或H202造成的氧化應(yīng)激均引起細(xì)胞保護(hù)蛋白HO-1和轉(zhuǎn)錄因子Nrf2升高。氧化損傷前、后,用Hyp處理均可進(jìn)一步顯著增加細(xì)胞保護(hù)蛋白HO-1、SOD、CAT、GPx和轉(zhuǎn)錄因子Nrf2的基因和蛋白表達(dá)水平,促進(jìn)Nrf2向細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移,同時(shí)明顯下調(diào)Bach1相對(duì)表達(dá)量,但對(duì)Keap1沒有顯著影響。結(jié)論缺氧或H202可引起L02細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷,Hyp可減弱此損傷,對(duì)L02細(xì)胞進(jìn)行預(yù)保護(hù),其機(jī)制可能是通過(guò)促進(jìn)Nrf2向細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移,與Bach1競(jìng)爭(zhēng)細(xì)胞保護(hù)蛋白啟動(dòng)子區(qū)域中的抗氧化反應(yīng)元件(ARE),從而上調(diào)細(xì)胞保護(hù)蛋白的水平來(lái)發(fā)揮其細(xì)胞保護(hù)作用。本課題以Hyp為研究對(duì)象,從Nrf2/Keap1-Bach1競(jìng)爭(zhēng)性調(diào)控細(xì)胞保護(hù)蛋白,促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)氧化還原穩(wěn)態(tài)恢復(fù)的角度探討其作用機(jī)制,為闡明黃酮類藥物藥理機(jī)制提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù),為充分合理地利用傳統(tǒng)中醫(yī)藥資源對(duì)抗氧化性肝損傷開拓了新策略。
【作者】張倩;
【導(dǎo)師】白志川;陳劍鴻;
【作者基本信息】西南大學(xué),植物學(xué),2014,碩士
【關(guān)鍵詞】金絲桃苷;缺氧;H2O2;氧化應(yīng)激;抗氧化蛋白;

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  本文關(guān)鍵詞:基于七點(diǎn)檢查表準(zhǔn)則的黑色素瘤診斷模型與檢測(cè)技術(shù)研究,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào):166933

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