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《南華大學》 2015年

維生素C對過氧化氫誘導人A375黑素瘤細胞氧化損傷的保護

范英姬  

【摘要】：目的:觀察維生素C對受H2O2氧化損傷后人A375黑素瘤細胞的抗氧化保護作用,為維生素C作為抗氧化劑治療白癜風提供實驗依據(jù)。方法:1.將100μmol/L、250μmol/L、500μmol/L的H2O2溶液分別處理人A375黑素瘤細胞1h、2h、4h后,用MTT比色法篩選最適濃度及時間建立H2O2損傷模型。2.予H2O2損傷模型用0.1μmol/ml、0.5μmol/ml、1.0μmol/ml、1.5μmol/ml、2.0μmol/ml、2.5μmol/ml、3.0μmol/ml、4.0μmol/ml、5.0μmol/ml的維生素C溶液處理12小時后,行MTT比色法篩選出最適實驗濃度;用2.0μmol/ml維生素C處理H2O2損傷模型2h、6h、12h、24h、36h、48h后,同法篩選出最適實驗時間。3.用終濃度為0.1μmol/ml、1.0μmol/ml、2.0μmol/ml、4.0μmol/ml的維生素C分別處理H2O2損傷模型6h、12h、24h、36h后,MTT比色法檢測細胞增殖,Annexin V/PI雙染色法檢測細胞凋亡,Na OH裂解法測定黑素含量。結(jié)果:1.H2O2對人A375黑素瘤細胞帶來氧化損傷,細胞發(fā)生形態(tài)學改變且增殖受抑制,損傷程度呈濃度依賴性。2.MTT結(jié)果顯示:0.1μmol/ml、1.0μmol/ml、2.0μmol/ml、4.0μmol/ml四種濃度的維生素C加入后,細胞增殖水平高于H2O2損傷組,差異顯著(P0.05);維生素C濃度為4μmol/ml、培養(yǎng)時間為12h時,A490值達最大(0.945±0.044)。3.流式細胞術(shù)結(jié)果顯示:各維生素C實驗組的細胞存活率呈濃度依賴性升高;早期凋亡率及晚期凋亡率逐漸下降,皆低于H2O2損傷組。4.Na OH裂解法結(jié)果顯示:0.1μmol/ml、1.0μmol/ml、2.0μmol/ml、4.0μmol/ml四種濃度的維生素C可促進H2O2損傷后人A375黑素瘤細胞黑素合成的恢復,黑素含量高于H2O2損傷組,差異顯著(P0.05);維生素C濃度為4μmol/ml、培養(yǎng)時間為12h時,A490值達最大(0.360±0.031)。結(jié)論:1.H2O2使人A375黑素瘤細胞產(chǎn)生氧化損傷,抑制人A375黑素瘤細胞增殖,誘導凋亡。2.一定濃度的維生素C可促進損傷后人A375黑素瘤細胞增殖及黑素合成的恢復,降低凋亡率。

【關(guān)鍵詞】：
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.5
【目錄】：

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